本发明专利技术提供了美洲大蠊总蛋白的提取方法，它包括如下操作步骤：取美洲大蠊药材，粉碎，以水为溶剂，于25～55℃下以闪式提取1～3次，每次加水10～22倍量，1～3min/次，提取电压为50～110V，水的pH为6～10。本发明专利技术通过对提取方法的筛选，最终得到了美洲大蠊的最佳闪式提取方法，能够保证较高的蛋白质收率基础上，缩短提取时间，为工业化大生产提供了可能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及。
技术介绍
美洲大蠊（Periplaneta americana Linnaeus)为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科 大蠊属昆虫。已有研究指出经提取、纯化而得的美洲大蠊蛋白具有良好的对抗四氯化碳所 致小鼠急性肝损伤作用，本研究前期工作基础亦证实美洲大蠊的水闪式提取物药效明显， 提示了闪式提取法应用于该活性部位制备过程的潜质，因此本研究拟以总蛋白含量为指 标，对闪式提取法与传统提取方法展开比较，并应用闪式提取法对提取工艺进行单因素考 察，以确定主要因素与水平，继而采用正交设计法优选闪式提取工艺，为动物药蛋白类热不 稳定活性成分的提取建立技术平台。 中国专利申请：CN 103083363 A，公开了美洲大蠊提取物的制备方法，它是采用闪 式提取方法进行提取的，其中，出膏率平均为47. 59%，蛋白质含量可以达到约15mg/g。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提取效果更优异的。 本专利技术提供了，它包括如下操作步骤： 取美洲大蠊，粉碎，以水为溶剂，于25?55°C下以闪式提取1?3次，每次加水 10?22倍量，1?3min/次，提取电压为50?110V，水的pH为6?10。 进一步地，提取温度为45?55°C，优选为45°C。 进一步地，闪式提取为Imin/次，提取电压70V。 优选地，提取次数为3次。 进一步地,每次加水量为16?20倍。 优选地，每次加水量为20倍。 中国专利申请：CN 103083363 A中，并未提及任何关于溶剂pH与提取效果之间的 关联。然而，本专利技术在研究中意外地发现，提取溶剂的PH对提取效果也有显著影响，因此， 本专利技术中还对溶剂PH进行了考察： 进一步地，水的pH为8. 3?9. 3。在此条件下，提取效果优于纯水。 优选地，水的pH为8. 8。 本专利技术通过对提取方法的筛选，最终得到了美洲大蠊的最佳闪式提取方法，能够 保证较高的蛋白质收率基础上，缩短提取时间，为工业化大生产提供了可能。 本专利技术经实验验证，所得美洲大蠊闪式提取物中总蛋白质的含量和出膏率均明显 优于专利号CN 103083363 A的专利公开方法所制备的美洲大蠊闪式提取样品。 【具体实施方式】 实施例1本专利技术提取方法 取美洲大蠊药材，粉碎，以水溶溶剂，于45°C下以闪式提取3次，每次加水20倍量， Imin/次，提取电压为70V，水的pH为9. 3。 实施例2本专利技术提取方法 取美洲大蠊药材，粉碎，以水溶溶剂，于45°C下以闪式提取3次，每次加水20倍量， Imin/次，提取电压为70V，水的pH为8. 8。 实施例3提取方法的筛选 1 材料 美洲大蠊药材（购自云南腾冲，经生药教研室卢先明教授鉴定为蜚蠊科大蠊属昆 虫美洲大蠊Periplaneta americana L.)，考马斯亮蓝G250(成都市科龙化工试剂厂，批号 20120924)〇 JHBE-50T型闪式提取器（河南金鼐科技发展有限公司），UV-1700型紫外-可见 分光光度计（岛津制作所分析计测事业部）。 2 方法与结果 2. 1总蛋白含量测定方法 2. L 1供试品溶液的制备方法 取药材适量，按各法提取，合并滤液。2. 3项下滤液定容至500mL，作为储备液，精 密吸取水提储备液8mL定容至25mL，作为供试品溶液；2. 4项下滤液定容至IOOOmL,作为储 备液，精密吸取水提储备液5或IOmL定容至25mL，作为供试品溶液。 2.1.2标准曲线的建立 以A595为纵坐标，BSA浓度为横坐标，回归方程为y =(λ0041χ+(λ 1500 (r = 0. 9995)，在30. 69?153. 45 μ g，其浓度与吸光度之间线性关系良好。 2.1.3供试品溶液含量测定 精密吸取供试品液各lmL，按2. 4.2显色，测定A595。通过标准曲线计算总蛋白含 量。 2.2出膏率测定 按照2. I. 1项下方法制备储备液，各取IOOmL置蒸发皿中，水浴挥干，105°C常压干 燥至恒重，称定质量，计算出膏率。 2. 3提取工艺的单因素考察 药材全虫与最粗粉的前处理均为45°C烘干。提取后过滤、离心、合并滤液，分别按 2. I. 1、2. 1. 4项下方法制备供试品溶液并测定总蛋白含量，另按2. 2项下方法测定出膏率。 以总蛋白含量与出膏率为提取工艺考察的评价指标。 2. 3. 1提取方法的确定 取最粗粉约25g，加入10倍量水，于25°C分别按闪式提取法（3min/次，70V)、 回流提取法（lh/次）、搅拌提取法（12h/次）提取各2次。总蛋白含量和出膏率分别为 19. 03,7. 74,6. Olmg .g-1和56. 19% ,46. 64% ,49. 53%。闪式提取法能以最低的出膏率获 得最高的总蛋白含量，符合制剂学减小剂量、提高疗效的要求。 2. 3. 2溶剂种类的确定 取最粗粉约25g，分别加入10倍量纯水、碱水（pH = 9. 0)、95 %乙醇，于25°C按闪 式提取法（3min/次，70V)提取2次。总蛋白含量和出膏率分别为19. 03,19. 80,10. 17mg j1 和56. 19% ,56.63% ,45.75%。以水为溶剂提取，总蛋白含量明显高于95%乙醇，因此后 续研究以水为溶剂进行；而PH= 9的碱水又优于纯水，因此本专利技术拟对溶剂pH作出进一步 考察。 2. 3. 3药材投料状态的确定 取全虫和最粗粉适量，加入10倍量水，于25°C按闪式提取法（lmin/次，70V)提取 1次。总蛋白含量和出膏率分别为18. 94, 19. 81mg·g_1和52. 06%，52. 27%。两指标均接 近，考虑到刀头的维护，后续研究以最粗粉投料。 2. 3. 4提取次数考察 取最粗粉适量，加入10倍量水，于25 °C按闪式提取法（lmin/次，70V)各提取 1，2, 3, 4次。随着提取次数的增加，总蛋白含量与出膏率有所增长，分别为19.01,19. 13， 19. 77,19.83mg·g-1 和 56.09 % ,56.21% ,56. 72%，56. 74%，但逐渐趋于平稳，经3 次提 取总蛋白已基本提取完全。 2. 3. 5提取温度考察 取最粗粉适量，分别于25, 35, 45, 55 °C下加入10倍量水，按闪式提取法 (lmin/次，70V)提取1次。在25-45°C，随着提取温度的升高，总蛋白含量与出膏率 呈增长趋势，而在45-55 °C呈下降趋势，分别为18. 32,19. 01，19. 56,19. 12mg·g4和 55. 17% ,56. 15%，56. 34%，56. 42%，推测在55°C左右某些蛋白的结构遭到破坏、产生絮 凝，影响溶出。 2. 3. 6提取时间考察 取最粗粉适量，加入10倍量水，于25°C按闪式提取法（各l，2,3,4min/次，70V) 提取1次。结果提取时间不超过3min时，总蛋白含量与出膏率随时间增加而升高，而在 4min略微下降，分别为 18. 47,19本文档来自技高网...
【技术保护点】
美洲大蠊总蛋白的提取方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：取美洲大蠊，粉碎，以水为溶剂，于25～55℃下以闪式提取1～3次，每次加水10～22倍量，1～3min/次，提取电压为50～110V，水的pH为6～10。
【技术特征摘要】
2013.08.02 CN 201310334198.21. 美洲大蠊总蛋白的提取方法，其特征在于：它包括如下操作步骤： 取美洲大蠊，粉碎，以水为溶剂，于25?55°C下以闪式提取1?3次，每次加水10? 22倍量，1?3min/次，提取电压为50?110V，水的pH为6?10。2. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：提取温度为45?55°C，优选为45°C。3. 根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：王达宾，苏柘僮，熊永爱，邹俊波，姜小东，郭华，
申请(专利权)人：成都百草和济科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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