【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种His标签包涵体蛋白的纯化方法。本专利技术以N-十二烷基肌氨酸钠为变性剂，以碱性PH的CAPS(N-环己基-3-氨基丙磺酸）为缓冲液，裂解包涵体蛋白。N-十二烷基肌氨酸钠为一种表面活性剂，通过破坏蛋白内的疏水键溶解包涵体蛋白，变性条件较为温和。该变性方法的最大特点是，避免了尿素易分解产生异氰酸盐导致蛋白多肽链的自由氨基甲酰化的缺陷，溶解蛋白经Ni-NTA柱纯化效果优于尿素，蛋白溶解后即具有生物活性，无需做复性处理。【专利说明】一种H i s标签包涵体蛋白纯化方法
本专利技术涉及蛋白纯化
，具体涉及一种His标签包涵体蛋白的纯化方法。
技术介绍
包涵体是指大肠杆菌高效表达的重组蛋白在细胞内凝集，形成的不溶的、无活性 的固体颗粒。一般含有50% (质量分数）以上的重组蛋白，及少量的核糖体、RNA聚合酶、 内毒素、外膜蛋白、脂多糖等，易于对目标蛋白进行分离纯化。另外大肠杆菌表达体系具有 培养周期短、成本低、高效表达等优点，在生产中被广泛应用。但得到的包涵体蛋白必须经 过变性溶解及复性处理，才能使目标蛋...
【技术保护点】
一种His标签包涵体蛋白的纯化方法，其特征在于包括以下步骤1)取待纯化的包涵体，先用包涵体洗涤液对其进行洗涤，再用PBS对其进行洗涤；2)取包涵体裂解液，对步骤1)洗涤完毕的包涵体进行溶解，室温震荡，充分溶解后离心收集上清；3)利用Ni‑NET柱对步骤2)得到的上清液进行纯化，过程中利用洗液洗脱杂蛋白，利用洗脱液洗脱目的蛋白，而后利用透析缓冲液对洗脱的目的蛋白进行透析；上述包涵体裂解液是其中具有50～100mM CAPS，0.1‑1％N‑十二烷基肌氨酸钠的溶液，其pH为8.0～9.0。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙艳，吕茂杰，杨保收，盛长忠，梁武，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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