源自血浆的免疫球蛋白的级分I‑IV‑1沉淀制造技术

在其它方面，本发明专利技术提供用于从混合血浆中生产血液蛋白质组合物的方法。在一个实施方案中，本发明专利技术提供允许从起始血浆样品中纯化的血液蛋白质的产率显著增加的醇分级分离方案。在具体的实施方案中，提供使混合血浆分级分离的方法，所述方法包括初始低pH、高醇沉淀步骤。本发明专利技术还提供治疗性血液蛋白质的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】源自血浆的免疫球蛋白的级分I-IV-1沉淀申请的交叉引用本申请要求2012年2月23日提交的美国临时专利申请序列号61/602,488的优先权，所述申请的公开内容出于所有目的在此通过引用整体并入本文。专利技术背景在1952年，源自人血浆的免疫球蛋白产品首次用于治疗免疫缺陷。最初，所选方法为肌内或皮下施用分离自血浆的免疫球蛋白同种型G(IgG)。然而，这些方法不允许施用有效治疗各种疾病所必需的大量IgG。因此，研发可静脉内施用的IgG产品。通常，静脉内免疫球蛋白(IVIG)含有源自超过一千个血液供体的血浆的混合免疫球蛋白G(IgG)免疫球蛋白。制剂通常含有超过95％的具有完整Fc依赖性效应器功能的未修饰的IgG和仅痕量的免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)。通常，IVIG是无菌过滤的并且生产过程包含灭活和/或除去病毒的步骤。这些纯化的IgG产品主要用于治疗以下三大类医学病状：(1)免疫缺陷：X连锁丙种球蛋白缺乏血症、低丙种球蛋白血症(原发性免疫缺陷)和特征为低抗体水平的获得性免疫低下病状(继发性免疫缺陷)；(2)炎性和自身免疫疾病；和(3)急性感染。具体地，患有原发性免疫缺陷病症的许多人缺乏抵抗感染所需的抗体。在某些情况下，这些缺陷可通过通常通过静脉内施用输注纯化的IgG(即，IVIG治疗)来弥补。通常以以下形式治疗几种原发性免疫缺陷病症，包括X连锁丙种球蛋白缺乏血症(XLA)、普通可变性免疫缺陷(CVID)、高IgM综合症(HIM)、重症联合免疫缺陷(SCID)和一些IgG亚类缺陷(Blaese和Winkelstein,J.Patient&FamilyHandbookforPrimaryImmunodeficiencyDiseases.Towson,MD:ImmuneDeficiencyFoundation；2007)。尽管IgG治疗可极为有效地管控原发性免疫缺陷病症，但此治疗仅临时性替代体内未产生的抗体，而不能治愈该疾病。因此，患者依赖于IgG治疗的反复给药，通常大约每月一次，至死方休。此治疗非常需要连续生产IgG组合物。然而，与通过重组DNA载体的体外表达产生的其它生物制剂不同，IgG是从人血液和血浆供体中分级分离得到。因此，可商购的IgG的水平受到血液和血浆供体可资供应量的限制。若干个因素促进对IgG的需求，包括对IgG治疗的认可、对IgG治疗有效的其它适应症的鉴定以及患者诊断和IgG处方的增加。值得注意的是，在1990年和2009年之间全球对IgG的需求已增长四倍以上，并且以每年约7％至10％的速率继续增加(RobertP.,PharmaceuticalPolicyandLaw,11(2009)359-367)。例如，澳大利亚国家血液管理局报道，澳大利亚在2008-2009财年对IgG的需求增加10.6％(NationalBloodAuthorityAustraliaAnnualReport2008-2009)。部分由于全球需求的增加和免疫球蛋白产品可资供应量的波动，若干个国家(包括澳大利亚和英国)已开始实施需求管理程序，从而在产品短缺期间保护这些产品对需求最高的患者的供应。在2007年已报道，对两千六百五十万升血浆进行分级分离，产生75.2公吨IgG，平均产率为2.8克/升(RobertP.，如前所述)。据同一报道评估，到2012年预期全球IgG产率将增加至约3.43克/升。然而，由于全球对IgG的需求持续增长(预期从现在起至2015年每年增长约7％至13％)，因此需要进一步提高IgG总体产率来满足全球需求。IgG产品的市场供应商使用多种IgG制备方法。现行IgG生产方法的常见问题是在纯化过程期间IgG大量损失，据估算至少为起始材料中总IgG含量的30％至35％。一个挑战在于维持病毒灭活的质量和除去可导致不良反应的杂质，同时提高增加IgG产率的过程效率。在IgG的当前生产水平下，即便产率的较小增加实际上也是极有意义的。例如在2007年的生产水平下，效率增加2％(等于增加56毫克/升)将多产生1.5公吨IgG。在一系列关于血清和血浆蛋白质的制备和特性的已出版学术论文的第四期中，Cohn等人，(J.Am.Chem.Soc.,1946,68(3):459-475)首次描述血浆蛋白质的醇分级分离方法(方法6)，其使得可分离来自人血浆的富含IgG的级分。若干年后，Oncley等人，(J.Am.Chem.Soc.,1949,71(2):541-550)基于Cohn的方法进行了扩展，其公开了使得可分离更纯净的IgG制剂的方法(方法9)。尽管这些方法为源自血浆的血液蛋白质的整个工业奠定了基础，但这些方法不能提供具有足够高纯度的IgG制剂来治疗若干种免疫相关的疾病，包括川崎综合症(Kawasakisyndrome)、免疫性血小板减少性紫癜和原发性免疫缺陷。因此，研发出采用诸如离子交换色谱的各种技术的其它方法来提供较高纯度的IgG制剂。Hoppe等人，(MunchMedWochenschr1967(34):1749-1752)、Falksveden(瑞典专利号348942)以及Falksveden和Lundblad(MethodsofPlasmaProteinFractionation1980)首先采用离子交换色谱来实现此目的。用于纯化源自血浆的免疫球蛋白的多种现代方法采用与柱色谱偶联的沉淀步骤，诸如辛酸盐沉淀(Lebing等人,VoxSang2003(84):193-201)和Cohn级分(I+)II+III乙醇沉淀(Tanaka等人,BrazJMedBiolRes2000(33)37-30)。最近，Teschner等人(VoxSang,2007(92):42-55)描述生产10％IgG产品的方法，其中首先从混合血浆中除去冷冻沉淀物，然后进行经过修改的Cohn-Oncley冷乙醇分级分离，之后对中间体进行S/D处理，进行离子交换色谱，纳米过滤，并且任选地进行超滤/渗滤。尽管这些IgG分离方法提供了纯度、安全性和产率，但仍可提高从血浆回收的IgG的产率。例如，Teschner等人报道，其方法使IgG产率提高65％(Teschner等人，如前所述)。根据各种血浆产品会议期间的报道，大规模制备IgG(诸如Baxter、CSLBehring、UpfrontTechnology、Cangene、PrometricBioTherapeutics和FinnishRedCross)的平均产率在最终容器中在约61％至约65％的范围内。虽然优于前面采用的方法，但此IgG回收的量仍表示在分离过程中存在于混合血浆级分中的IgG损失至少约三分之一。由于用于生产血浆衍生的产品的可用的血浆供应有限，因此通过将纯化并入单一框架可实现从常见起始血浆库分离若干血液蛋白质。例如，通常通过形成Cohn级分II+III沉淀物或Kistler-Nitschmann沉淀物A来富集IgG，然后将沉淀物相应的上清液用于生产α-1-抗胰蛋白酶(A1PI)和白蛋白。类似地，已经描述了用于从生产IgG免疫球蛋白期间形成的副产物中生产因子H的几种方法，包括WO2008/113589和WO2011/011753。因此，需要生产治疗性IgG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于从Cohn池生产富集的免疫球蛋白组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在第一沉淀步骤中通过在pH为5.0至6.0以20％至30％(v/v)的终浓度向所述Cohn池中加入乙醇，从Cohn池中共沉淀免疫球蛋白和α‑1‑抗胰蛋白酶(A1PI)，以形成第一沉淀物和第一上清液；(b)使所述第一沉淀物中的免疫球蛋白溶解，以形成具有包含免疫球蛋白的可溶性部分和包含A1PI的不溶性部分的第一悬浮液；(c)从所述第一悬浮液的所述不溶性部分中分离所述第一悬浮液的所述可溶性部分；和(d)回收所述第一悬浮液的所述可溶性级分，从而形成富集的免疫球蛋白组合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.23 US 61/602,4881.一种用于从Cohn池生产富集的免疫球蛋白组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)在第一沉淀步骤中通过在pH为5.0至6.0以20％至30％v/v的终浓度向所述Cohn池中加入乙醇，从Cohn池中共沉淀免疫球蛋白和α-1-抗胰蛋白酶(A1PI)，以形成第一沉淀物和第一上清液；(b)使所述第一沉淀物中的免疫球蛋白溶解，以形成具有包含免疫球蛋白的可溶性部分和包含A1PI的不溶性部分的第一悬浮液；(c)从所述第一悬浮液的不溶性部分中分离所述第一悬浮液的可溶性部分；和(d)回收所述第一悬浮液的所述可溶性级分，从而形成富集的免疫球蛋白组合物，其中，在步骤(a)之前不执行醇沉淀。2.根据权利要求1所述的方法，其中乙醇的终浓度为25±4％v/v。3.根据权利要求1所述的方法，其中乙醇的终浓度为25±3％v/v。4.根据权利要求1所述的方法，其中乙醇的终浓度为25±2％v/v。5.根据权利要求1所述的方法，其中乙醇的终浓度为25±1％v/v。6.根据权利要求5所述的方法，其中乙醇的终浓度为25％v/v。7.根据权利要求1所述的方法，其中乙醇的终浓度为25±2％v/v，以及所述pH为5.5±0.2。8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述pH为5.5±0.4。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述pH为5.5±0.3。10.根据权利要求8所述的方法，其中所述pH为5.5±0.2。11.根据权利要求8所述的方法，其中所述pH为5.5±0.1。12.根据权利要求8所述的方法，其中所述pH为5.5。13.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀步骤的持续时间保持所述pH。14.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀步骤包括通过扩散加入来加入所述乙醇。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述扩散加入包括喷雾。16.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀步骤包括在邻近叶轮的位点加入所述乙醇。17.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀步骤在-3℃至-10℃的温度下进行。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一沉淀步骤在-5℃至-9℃的温度下进行。19.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀物用4L至60L缓冲液/kg沉淀物来悬浮。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述第一沉淀物用8L至15L缓冲液/kg沉淀物来悬浮。21.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一悬浮液具有的pH为4.0至5.4。22.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一悬浮液具有的pH为4.7至5.1。23.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一悬浮液具有的电导率为0mS/cm至4mS/cm。24.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一悬浮液具有的电导率为0.5mS/cm至2mS/cm。25.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第一沉淀物悬浮于包含乙酸盐和/或磷酸盐的缓冲液中。26.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中通过离心或过滤从所述第一悬浮液的所述不溶性部分中分离所述第一悬浮液的所述可溶性部分。27.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中从所述第一悬浮液的所述不溶性部分中分离所述第一悬浮液的所述可溶性部分的所述步骤包括：(i)使细碎二氧化硅(SiO2)与所述第一悬浮液混合；和(ii)从所述悬浮液中分离所述SiO2。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述细碎二氧化硅(SiO2)具有的平均比表面积为350m2/g至410m2/g。29.根据权利要求27所述的方法，其中以15g/kg第一沉淀物至80g/kg第一沉淀物的终浓度下将所述细碎二氧化硅(SiO2)加至所述第一悬浮液中。30.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)在第一沉淀步骤中在pH为5.3和5.7之间并且温度在-6℃和-8℃之间用24％和26％v/v之间的乙醇从Cohn池中沉淀免疫球蛋白以形成第一沉淀物和第一上清液；(b)使所述第一沉淀物悬浮以形成第一悬浮液；(c)用细碎二氧化硅(SiO2)处理所述第一悬浮液；(d)从所述第一悬...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·布鲁克施威格，T·贡丁格，J·尼恩贝格尔，W·特施纳，HP·施瓦茨，
申请(专利权)人：巴克斯特国际公司，巴克斯特保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US