本发明专利技术公开一种双水相系统萃取血清中抗体的方法，为一种新的取血清中抗体的方法，克服了传统取血清中抗体的方法得率低、含杂质多、制备繁琐、活性低等特点。采用乙酸钠作为盐水相中的盐使用。既提高了抗体的得率而且为今后乙酸钠在工业生产提供依据。提取设备要求简单，室温下可操作；所提取的抗体纯度较高，活性无影响；得率大大提高；萃取时间大大缩短；可用于扩大生产。扩大生产后得率不改变。
【技术实现步骤摘要】
: 本专利技术公开一种，涉及双水相系统萃取生物活性大分子蛋白，特别适用于对免疫血清中抗体的萃取，以及对萃取后的抗体进行处理，处理后的抗体可直接作为抗体药用于治疗相应疾病，属于生物工程提取
。
技术介绍
: 抗体(Antibody)又称免疫球蛋白(Immune globulin),具有抗菌、抗病毒、中和毒素等免疫活性。还能够调理、凝集和沉淀抗原，激活补体。在疫病爆发时可用于紧急治疗。因此大量生产抗体对于治疗免疫疾病具有重要的价值和广阔的市场前景。由于此类蛋白大分子作为药物用于治疗时，其治疗效果与其生物活性密切相关，因此在提取时必须确保其生物活性的稳定。传统血清中提取抗体的方法为盐析法，该方法提取抗体在实验室水平经检测得率在48%，在药厂大批生产应用时经检测得率在40%左右，不但影响抗体分子的免疫活性，得率不足一半导致抗体分子在提取过程中的严重浪费，也使得抗体药物价格昂贵而不能广泛应用。经检索采用未见文献报道，特别是双水相萃取技术中涉及的“乙酸钠”只是人们用来作为食品的风味剂，促进蛋白的吸收提高食物口感而增加食欲或作为防腐剂可以杀灭酶菌提高食物的保存时间。而“乙酸钠”作为双水相系统的一种盐溶液来萃取血清中的抗体未见文献报道。
技术实现思路
: 本专利技术公开一种，为一种新的取血清中抗体的方法，克服了传统取血清中抗体的方法得率低、含杂质多、制备繁琐、活性低等特点。本专利技术所述的，其特征在于包括以下步骤: 1)制备免疫血清； 2)制备双水相系统: 先配好浓度为50% (w/w)的聚乙二醇(分子量为3350)储存液；浓度为40% (w/w)盐溶液(其中硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1)； 将聚乙二醇储存液、盐溶液、血清按体积比4.5:4.5:1混合；体系PH定为7.0 ; 3)室温静止至双水相系统分层，待双水相系统明显分层后转入尚心机1400r/min，尚心15分钟； 4)离心后双水相系统明显分三层，上层为聚乙二醇层，下层为盐水相层；中间层为抗体层；排除下层和上层后，取出中间层的抗体，经检测得率为85%-90% ； 5)对抗体进行透析除盐； 6)将透析后的抗体加入5%的蔗糖进行冻干保存，延长了抗体的保存时间及对抗体进行浓缩。在本专利技术中，双水相萃取系统由于其水分含量在90%以上，且具有温和非致变性的萃取条件，特别适用生物大分子蛋白的萃取；本专利技术提取抗体确保了所提抗体蛋白具有高活性；双水相系统组成为聚乙二醇聚合物和盐水相，特别是盐水相位硫酸铵和乙酸铵的混合物。在双水相系统中，使用乙酸铵作为一种盐溶液来萃取血清中的抗体，不仅可以很好地成相而且对于抗体的萃取率有极大的提闻。本专利技术操作工艺简单、价格低廉、抗体得率在85%_90% ;室温下可操作性强、设备要求不高、可扩大生产等优点而有望成为工业大批生产抗体的新技术。使用传统方法提取抗体在实验室水平经检测得率在48%，在药厂大批生产应用时经检测得率在40%左右。双水相系统萃取技术与传统方法相比得到极大的提高。因此研究开发新型方法萃取血清中的抗体具有越来越重要的价值，为工业生产提供理论依据。本专利技术的积极效果在于:采用乙酸钠作为盐水相中的盐使用。既提高了抗体的得率而且为今后乙酸钠在工业生产提供依据。提取设备要求简单，室温下可操作；所提取的抗体纯度较高，活性无影响；得率大大提高；萃取时间大大缩短；特别是本专利技术提取方法主要成本消耗在聚合物上，而聚合物可回收利用，大大节约成本。可用于扩大生产。扩大生产后得率不改变。 【具体实施方式】 本专利技术专利不仅限用于以下所例举的实施方式，还包括【具体实施方式】间的任意组合。 实施例11、制备免疫血清。 用灭活的水貂细小病毒免疫健康马。经而免后抗体效价达到所需值后对免疫的马采血。采集的血液静止放置沉淀出血清，此血清即为免疫血清；2、制备双水相系统；先配好浓度为50% (w/w)的聚乙二醇(分子量为3350)储存液；浓度为40% (w/w)盐溶液(其中硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1);取4.5ml聚乙二醇储存液、4.5ml盐溶液、Iml血清混匀，PH定为7.0 ;3、室温静止使双水相完全分层。分层后置于离心机内1500r/min离心15分钟。离心后的双水相系统分为三层，上层PEG层，下层为盐水相层，中间层即为抗体，经检验抗体得率 85.7% ；4、收集中间层抗体；对收集的抗体进行透析处理后加入0.05%的蔗糖作为保护剂进行冻干保存。 实施例21、制备免疫血清；用灭活的水貂细小病毒免疫健康马。经而免后抗体效价达到所需值后对免疫的马采血。采集的血液静止放置沉淀出血清，此血清即为免疫血清；2、制备双水相系统；先配好浓度为50% (w/w)的聚乙二醇(分子量为3350)储存液；浓度为40% (w/w)盐溶液(其中硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1);取451111聚乙二醇储存液、45ml盐溶液、1ml血清混匀，PH定为7.0 ;3、室温静止使双水相完全分层。分层后置于离心机内1500r/min离心15分钟。离心后的双水相系统分为三层，上层PEG层，下层为盐水相层，中间层即为抗体，经检验抗体得率 83.4% ；4、收集中间层抗体；对收集的抗体进行透析处理后加入0.05%的蔗糖作为保护剂进行冻干保存。 实施例31、制备免疫血清；用灭活的水貂细小病毒免疫健康马。经而免后抗体效价达到所需值后对免疫的马采血。采集的血液静止放置沉淀出血清，此血清即为免疫血清；2、制备双水相系统；先配好浓度为50% (w/w)的聚乙二醇(分子量为3350)储存液；浓度为40% (w/w)盐溶液(其中硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1);取450ml聚乙二醇储存液、450ml盐溶液、10ml血清混匀，PH定为7.0 ;3、室温静止使双水相完全分层。分层后置于离心机内1500r/min离心15分钟；离心后的双水相系统分为三层，上层PEG层，下层为盐水相层，中间层即为抗体，经检验抗体得率89.1% ；4、收集中间层抗体 ；对收集的抗体进行透析处理后加入0.05%的蔗糖作为保护剂进行冻干保存。 实施例41、制备免疫血清；用灭活的狂犬病毒免疫健康马。经而免后抗体效价达到所需值后对免疫的马采血。采集的血液静止放置沉淀出血清，此血清即为免疫血清2、制备双水相系统先配好浓度为50% (w/w)的聚乙二醇(分子量为3350)储存液；浓度为40% (w/w)盐溶液(其中硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1);取4.5ml聚乙二醇储存液、4.5ml盐溶液、Iml血清混匀，PH定为7.03、室温静止使双水相完全分层。分层后置于离心机内1500r/min离心15分钟离心后的双水相系统分为三层，上层PEG层，下层为盐水相层，中间层即为抗体，经检验抗体得率87.4%4、收集中间层抗体对收集的抗体进行透析处理后加入0.05%的蔗糖作为保护剂进行冻干保存。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双水相系统萃取血清中抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：1）制备免疫血清；2）制备双水相系统：先配好浓度为50%（w/w）分子量为3350的聚乙二醇储存液；浓度为40%（w/w）盐溶液：硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1；将聚乙二醇储存液、盐溶液、血清按体积比4.5:4.5:1混合；体系PH定为7.0；3）室温静止至双水相系统分层，待双水相系统明显分层后转入离心机1400r/min，离心15分钟；4）离心后双水相系统明显分三层，上层为聚乙二醇层，下层为盐水相层；中间层为抗体层；排除下层和上层后，取出中间层的抗体，经检测抗体效价在85%‑90%；5）对抗体进行透析除盐；6）将透析后的抗体加入5%的蔗糖进行冻干保存，延长了抗体的保存时间及对抗体进行浓缩。
【技术特征摘要】
1.一种双水相系统萃取血清中抗体的方法，其特征在于包括以下步骤: 1)制备免疫血清； 2)制备双水相系统: 先配好浓度为50% (w/w)分子量为3350的聚乙二醇储存液；浓度为40% (w/w)盐溶液:硫酸铵与乙酸钠质量比为3:1 ； 将聚乙二醇储存液、盐溶液、血清按体积比4.5:4.5:1混合；体系PH定为7.0 ; 3)室温静止至双水...
【专利技术属性】
技术研发人员：雷连成，冯新，杜崇涛，黄盼盼，肖锋，侯春苗，孙长江，孙莹莹，王彬，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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