本发明专利技术公开了一种抗体修饰的纳米银(AgNPs)，它以直径为10～30nm的纳米银球为内核，银球外表面静电吸附有羊抗鼠IgG抗体。本发明专利技术还公开了上述抗体修饰的纳米银的制备方法、包含该抗体修饰的纳米银的试剂盒、及该抗体修饰的纳米银在制备检测鼠IgG的试剂中的应用。本发明专利技术的抗体修饰的纳米银(纳米银-抗体)相比商品化的纳米金-抗体具有与目标物反应时间快，显色时间短，检测浓度范围宽且价格便宜的优势。此种纳米银-抗体具有取代纳米金-抗体的能力。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抗体修饰的纳米银(AgNPs)，它以直径为10～30nm的纳米银球为内核，银球外表面静电吸附有羊抗鼠IgG抗体。本专利技术还公开了上述抗体修饰的纳米银的制备方法、包含该抗体修饰的纳米银的试剂盒、及该抗体修饰的纳米银在制备检测鼠IgG的试剂中的应用。本专利技术的抗体修饰的纳米银(纳米银-抗体)相比商品化的纳米金-抗体具有与目标物反应时间快，显色时间短，检测浓度范围宽且价格便宜的优势。此种纳米银-抗体具有取代纳米金-抗体的能力。【专利说明】一种抗体修饰的纳米银及其试剂盒与应用
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种用于检测IgG的抗体修饰的纳米银及其试剂盒与应用。
技术介绍
免疫诊断试剂常规应用的检测方法有放射免疫分析(RIA)，酶联免疫吸附分析法(ELISA)，化学发光免疫分析法，纳米标记物免疫分析法。与酶标记物相比，纳米标记物具有良好的化学稳定性和制备可控性，因此基于纳米材料标记的免疫测定技术灵敏度高、特异性强、精密度好、结果准确、操作简便、快速、无污染，该技术正在进入微量物质测定的各个领域。其中，纳米金标记物由于其显色效果突出、检测方便而被广泛应用于各类试纸条，纳米金催化银增强显色反应也被进一步应用于免疫分析中。 近年来，具有优良光学特性的纳米银正被越来越多地应用于蛋白质和DNA等生物分子的检测分析。首先，纳米银相比于纳米金成本更低廉，可以大大降低生产的成本；其次，由于纳米银具有更高的摩尔消光系数，其颜色变化会更灵敏；最后，纳米银具有很强的催化性能。可见，纳米银具有摩尔消光系数高、表面增强拉曼散色效应强和催化活性好等独特的物理化学性能。然而，纳米银标记物用于免疫显色分析的报道并不多，研究和发展纳米银标记物及其相应的显色分析系统是十分有必要的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种适用于IgG检测的抗体修饰的纳米银试剂。 本专利技术还要解决的技术问题是提供包含上述纳米银材料的试剂盒，用于IgG的检测。 本专利技术最后要解决的技术问题是提供上述试剂盒在检测IgG中的应用。 为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下: 一种抗体修饰的纳米银，它以直径为10?30nm的纳米银球为内核，纳米银球外表面吸附有羊抗鼠IgG。 本专利技术还提供了上述抗体修饰的纳米银的制备方法，包括如下步骤: (I)在冰浴条件下,将聚乙烯卩比咯烧酮(Polyvinylpyrrolidone,PVP)溶液加入硼氢化钠溶液中，搅拌并逐滴加入硝酸银溶液，继续搅拌至室温，得纳米银溶液； (2)将羊抗鼠IgG抗体溶液加入至纳米银溶液中，于冰箱中过夜反应； (3)将步骤(2)反应体系的上清液离心，沉淀加入BSA缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤I?3次；最后离心得到的沉淀用lmg/mL BSA溶液重悬即得。 其中步骤(I)中，硝酸银溶液浓度为2-20mmol/L ;硼氢化钠溶液的浓度为3-30mmol/L ;聚乙烯吡咯烷酮的浓度为O?5%，优选0.1?1% ;硝酸银溶液、硼氢化钠溶液、聚乙烯卩比咯烧酮(Polyvinylpyrrolidone, PVP)溶液的体积比为I: (1-10): (0-1),优选1:(1-10):(0.1-1)。 步骤⑵中，羊抗鼠IgG抗体溶液的浓度为1-lOmg/mL ;羊抗鼠IgG抗体溶液与纳米银溶液的体积比为(0.1?10):10o 步骤(3)中，BSA缓冲溶液的浓度为lmg/mL，BSA缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1?5倍。 本专利技术还提供了上述抗体修饰的纳米银在IgG检测中的应用。 本专利技术还提供了一种用于检测IgG的试剂盒，包括磷酸盐缓冲液、羊抗鼠IgG、链霉亲和素、银增强试剂A和银增强试剂B、牛血清白蛋白溶液、抗体修饰的纳米银。 本专利技术还提供了上述用于检测IgG的试剂盒在检测鼠IgG中的应用。 所述应用，包括以下步骤: (I)配制溶液: 洗涤液:将20 X PBS用二次水稀释20倍至I X PBS，加入0.05 %体积比的Tween-20即得PBST洗涤液； 探针和样品稀释液:将0.1g牛血清白蛋白溶解于10mLlXPBS溶液中即得Img/ml BSA ； 封闭液:将Ig牛血清白蛋白溶解于10mLl XPBS溶液中即得10mg/ml BSA封闭液； 目标物:用lmg/ml BSA配制不同浓度的IgG ； 探针:用BSA溶液配制所需浓度的探针； 显色液:将银增强试剂A和银增强试剂B按体积比1:1的混合液； (2)将目标物、阴性对照物、阳性对照物分别在醛基修饰的玻璃片上点样，37°C条件下固定2-4h ； (3)每孔加入10?50μ L封闭液，在20_37°C条件下封闭I?3小时，用洗涤液荡洗5?15min,洗漆3?4次,吹干； (4)每孔加入20?50 μ L纳米银-抗体探针，在20-37°C条件下反应10?60分钟，用洗涤液荡洗5?15min，洗涤3?4次，并用去离子水冲洗3?4次，吹干； (5)每孔加入20?50 μ L显色液,避光反应5?20min,去离子水冲洗3?4遍，吹干； (6)用CCD生物芯片扫描仪扫描，根据得到的灰度值信号做标准曲线，得到IgG的线性范围。 有益效果:利用本专利技术的纳米银-抗体进行IgG的检测，相比纳米金-抗体，具有灵敏度更高，检测时间更短的优势，且此显色方法操作简单易行，检测结果可视化，无需特殊昂贵的检测仪器，目视即可达到孔内半定量检测；成本低廉，可实现大批量检测，适于推广使用。 本专利技术通过两种检测IgG的方法的比较，第一种方法是以纳米银-抗体作为检测探针，第二种方法是以纳米金-抗体作为检测探针，证明了纳米银-抗体作为检测探针检测的浓度范围宽，显色时间短，与目标物反应快。 【专利附图】【附图说明】 图1为本专利技术抗体修饰的纳米银的制备及检测鼠IgG的原理图； 图2为纳米银及本专利技术抗体修饰的纳米银的紫外-可见光谱图(UV-Vis)； 图3为本专利技术抗体修饰的纳米银的透射电镜图(TEM)； 图4纳米金-抗体检测鼠IgG的结果图，反应时间为30min ； 图5为纳米银-抗体检测鼠IgG的结果图，反应时间为30min ； 图6纳米金-抗体检测鼠IgG的结果图，反应时间为15min ； 图7及纳米银-抗体检测鼠IgG的结果图，反应时间为15min。 【具体实施方式】 根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。 实施例1:抗体修饰的纳米银的制备。 在冰浴条件下，首先将2mL0.25% PVP加入至20mL3mmol/L硼氢化钠溶液中，然后将10mL2mmol/L的硝酸银溶液逐滴加入，不断搅拌至反应完全，继续搅拌至室温，即可得到纳米银溶液。得到的纳米银的表征图如图2。 将2mg/mL50 μ L羊抗鼠IgG抗体加入至0.5mL纳米银溶液中，放于4°C冰箱过夜反应，取上清液离心，14°C 15000r/min20min离心后去除上清，沉淀加入BSA缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤2次,每次15min本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体修饰的纳米银，其特征在于：它以直径为10～30nm的纳米银球为内核，纳米银球外表面吸附有羊抗鼠IgG。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许丹科，李慧，牛奇奇，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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