高效细胞爬片免疫组化方法技术

本发明专利技术公开了一种高效细胞爬片免疫组化方法，将均已经过灭菌消毒处理的大面积载玻片和培养皿匹配使用，载玻片置于培养皿中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；所述免疫细胞组织化学染色鉴定包括用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补。本发明专利技术可进行大规模，多样本的医学实验科学研究。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，将均已经过灭菌消毒处理的大面积载玻片和培养皿匹配使用，载玻片置于培养皿中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；所述免疫细胞组织化学染色鉴定包括用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补。本专利技术可进行大规模，多样本的医学实验科学研究。【专利说明】
本专利技术涉及一种细胞爬片免疫组化方法。
技术介绍
细胞爬片免疫组织化学是用标记的特异性抗体对细胞标本中某些化学成分的 分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫细胞化学 (immunocytochemistry)技术。 常规细胞爬片免疫组织化学检测是对单张细胞爬片一片一片进行染色操作，一般 只能对单样本做一种抗体，蛋白及基因的检测，难以胜任大规模，多样本及多组别的医学实 验科学研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可进行大规模，多样本多组别的医学实验科学研究的 。 本专利技术的技术解决方案是： 一种，将均已经过灭菌消毒处理的大面积载玻片和培养皿 匹配使用，载玻片置于培养皿中，，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后 进行免疫细胞组织化学染色鉴定；培养皿设有培养皿盖，其特征是：所述培养皿设有多个 相同大小、可放置载玻片/盖玻片的细胞培养槽，每个细胞培养槽中分别放置一片载玻片； 所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下列步骤： (1) 用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定； (2) 流水漂洗，用PBS清洗标本3次； (3) 用 0· 5 % Triton X-100 (PBS 配）孵育 lOmin ; (4) 0. 3% H202 孵育 lOmin ; (5) 用PBS清洗标本3次后，热风充分干燥； (6) 用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片 拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，揭取载玻片并查 看，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7) 空气充分干燥； (8) 用正常二抗血清封闭孵育10min ; (9) 在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30?60min ; (10) 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11) 滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30?60min ; (12) PBS清洗标本3次； (13) DAB显色，避光，镜下观察； (14) 蒸馏水洗； (15) 苏木素衬染； (16) 盐酸酒精分化，自来水洗； (17) 梯度酒席脱水，二甲苯透明； (18) 中性树|父封片。 所述工具印章包括印章基座，印章基座的底部设置多个方框凸起，方框凸起内为 凹区。 所述油墨由下列重量百分比的组分组成： 石蜡 15?20% 松香 2?3% 松节油 4?6% 汽油 20?26% 异丙醚 2?3% 二硫化碳 12?16% 二氯甲烷 2?5% 石油酿 2?3% 乙二醇丁醚 0. 8?1. 2% 乙醚 6?10% 丙酮 3?6% 环已丽 6?10% 四氯化碳 5?8% 微晶蜡 2?3% 蜂蜡 2?3%。 上述各组分用量之和为100%。 培养皿的一个角呈斜面形式，方便方位标识；培养皿盖的一个角呈与培养皿呈斜 面的角配合的斜面形式；培养皿盖与培养皿吻合口周缘的交错深度> l〇mm。 本专利技术有利于免疫组化的染色，染色步骤与常规免疫组织化学相似，但样本处理 的温度，时间，试剂浓度等标准一致，标记的一抗种类多，可比性和可靠性均显著提高！处 理的样本数量多，高效快捷。PBS清洗、血清孵育、标记二抗，衬染(苏木素)等不需要分隔的 染色可一同处理，方便快捷，实验条件标准一致且易控制。采用大面积细胞爬片进行细胞培 养本处理的温度，时间，试剂浓度等标准一致，使实验结果的可比性和可靠性均显著提高。 专用细胞培养皿培养孔的数量减少，操作方便，高效快捷。特定的油墨配方充分保证了工作 效果。 【专利附图】【附图说明】 下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。 图1是本专利技术培养皿的结构示意图。 图2是培养皿盖的结构示意图。 图3是工具印章的结构示意图。 图4是细胞爬片分隔分区示意图。 图5是油墨涂画笔的结构示意图。 【具体实施方式】 一种，将已经过灭菌消毒处理的载玻片置于培养皿 中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色 鉴定；所述培养皿是透明材料，设有多个相同大小、可放置载玻片的细胞培养槽，槽深度 > 20ml，每个细胞培养槽中分别可放置一片载玻片；培养皿的一个角呈斜面形式，方便方 位标识；培养皿盖与培养皿的底口周缘有吻合堤互相交错，交错深度> 10 mm。 细胞培养槽的规格为80X30/mm(放单张载玻片）；64X28/mm(放单张60X24的 盖玻片）；54X28/mm(放单张50X24的盖玻片）；38X28/mm(放单张34X24/mm的盖玻 片）；所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下列步骤： (1) 用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定； (2) 流水漂洗，用PBS清洗标本3次； (3) 用 0· 5% Triton X-100 (PBS 配）孵育 lOmin ; (4) 0. 3% H202 孵育 lOmin ; (5) 用PBS清洗标本3次后，热风充分干燥； (6) 用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章的拓印面，压迫载玻 片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，揭取载玻片并 查看，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7) 空气充分干燥； (8) 用正常二抗血清封闭孵育lOmin ; (9) 在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30?60min ; (10) 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11) 滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30?60min ; (12) PBS清洗标本3次； (13) DAB显色，避光，镜下观察； (14) 蒸馏水洗； (15) 苏木素衬染； (16) 盐酸酒精分化，自来水洗； (17) 梯度酒席脱水，二甲苯透明； (18) 中性树|父封片。 所述工具印章包括印章基座，印章基座的底部设置多个方框凸起，方框凸起内为 凹区。 所述油墨涂画笔包括笔筒，笔筒内设置笔芯，笔芯为包裹海绵样的圆柱体，其内中 灌注有油墨，笔芯前端设置木质笔芯。 所述油墨由下列重量百分比的组分组成： 石蜡 15 ?20% (例 15%、18%、20%) 松香 2 ?3% (例 2%、2. 5%、3%) 松节油 4?6% (例4%、5%、6%) 汽油 20 ?26% (例 20%、23%、26%) 异丙醚 2?3% (例2%、2. 5%、3%) 二硫化碳 12 ?16% (例 12%、14%、16%) 二氯甲烷 2?5% (例2%、4%、5%) 石油醚 2?3% (例2%、2. 5%、3%) 乙二醇丁醚 0· 8 ?1. 2% (例 0·本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效细胞爬片免疫组化方法，将已经过灭菌消毒处理的载玻片置于培养皿中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；培养皿设有培养皿盖，其特征是：所述培养皿设有多个相同大小、可放置载玻片的细胞培养槽，每个细胞培养槽中分别放置一片载玻片；所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下列步骤： (1)用冰丙酮固定15min或4％多聚甲醛固定； (2)流水漂洗，用PBS清洗标本3次； (3)用0.5％Triton X‑100(PBS配)孵育10min； (4)0.3％H2O2孵育10min； (5)用PBS清洗标本3次后，热风充分干燥； (6)用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，揭取载玻片并查看，如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7)空气充分干燥； (8)用正常二抗血清封闭孵育10min； (9)在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30～60min； (10)吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11)滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30～60min； (12)PBS清洗标本3次； (13)DAB显色，避光，镜下观察； (14)蒸馏水洗； (15)苏木素衬染； (16)盐酸酒精分化，自来水洗； (17)梯度酒席脱水，二甲苯透明； (18)中性树胶封片。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：鄂裘恺，胡义扬，郭绍文，王敏燕，韩志宏，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属曙光医院，
类型：发明
国别省市：上海;31