一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法。本发明专利技术通过固相合成方法替度鲁肽对定点的PEG修饰，从而改变替度鲁肽的性质。其主要优点是可以延长蛋白质（多肽）在体内的半衰期，降低免疫原性和抗原性。

【技术实现步骤摘要】
一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法
本专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法。
技术介绍
短肠综合征（SBS）是指由于严重小肠疾病或外科手术切除大部分小肠导致机体无法正常吸收营养而引发一系列综合征。SBS降低了患者摄取液体和营养物质的能力，导致他们脱水和营养不良。而肠外营养支持治疗又将增加全身感染和其他长期并发症的风险，迄今为止尚无药物可以治疗短肠综合征。替度鲁肽(teduglutide)是一种胰高血糖素样肽2（GLP-2）类似物，是一种天然生成的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。替度鲁肽于2001年被定性为孤儿药。临床试验表明，该药能够降低短肠综合征患者对胃肠外营养的需求。常规的替度鲁肽含有蛋白质（多肽）类药物常有的弊病。例如半衰期短，有免疫原性，易被蛋白水解酶降解，溶解性差等。传统的PEG修饰多为随机修饰，存在修饰剂呈现多种聚合度、选择性不够高、修饰后的蛋白质分子Mr分布宽、活性降低、稳定性有时不够理想等突出问题。因此，提供一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法具有现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法。本专利技术通过固相合成方法替度鲁肽对定点的PEG修饰，从而改变替度鲁肽的性质。其主要优点是可以延长蛋白质（多肽）在体内的半衰期，降低免疫原性和抗原性。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物，其N端氨基和/或Lys侧链氨基通过酰胺键与单甲氧基PEG衍生物偶联。在本专利技术的一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物的分子量为1000～40000Da。在本专利技术的另一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物的分子量为2000～20000Da。在本专利技术的另一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物的分子量为5000～10000Da。在本专利技术的一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物为直链型或支链型。在本专利技术的一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物选自mPEG琥珀酰亚胺丙酸酯（mPEG-SPA）、mPEG琥珀酰亚胺丁酸酯（mPEG-SBA）或mPEG-琥珀酰亚胺碳酸酯（mPEG-SC）。本专利技术在此不作限定。在本专利技术的另一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物选自Lys-mPEG2或Tris-mPEG3。本专利技术还提供了一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物的固相制备方法，包括如下步骤：步骤1、取Asp与固相载体偶联，获得固相载体-Asp；步骤2、取固相载体-Asp逐步偶联氨基酸，获得固相载体-多肽，多肽的序列如SEQIDNo.1所示；步骤3、脱除固相载体-多肽的N端氨基的保护基团和/或Lys侧链氨基的保护基团后，单甲氧基PEG衍生物通过酰胺键与N端氨基和/或Lys侧链氨基偶联，裂解、纯化后，即得。本专利技术提供的一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物的固相制备方法中，单甲氧基PEG衍生物是指通过酰胺键与N端氨基或赖氨酸侧链氨基偶联的任何活化PEG衍生物。本专利技术在此不作限定。在本专利技术的一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物的分子量为1000～40000Da。在本专利技术的另一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物的分子量为2000～20000Da。在本专利技术的另一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物的分子量为5000～10000Da。在本专利技术的一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物为直链型或支链型。在本专利技术的一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物选自mPEG琥珀酰亚胺丙酸酯（mPEG-SPA）、mPEG琥珀酰亚胺丁酸酯（mPEG-SBA）或mPEG-琥珀酰亚胺碳酸酯（mPEG-SC）。在本专利技术的另一些实施例中，单甲氧基PEG衍生物选自Lys-mPEG2或Tris-mPEG3。在本专利技术的一些实施例中，N端氨基的保护基团为Fmoc。在本专利技术的一些实施例中，Lys侧链氨基的保护基团为mmt，mtt，Alloc或Trt。作为优选，Trt侧链保护基只在PEG单修饰N端氨基酸时使用。在本专利技术的一些实施例中，N端氨基的保护基团的脱除剂为20%哌啶/DMF溶液。在本专利技术的另一些实施例中，Lys侧链氨基的保护基团的脱除剂为TFA或四三苯基膦钯/苯硅烷。作为优选，选择性脱除mmt或mtt采用TFA，选择性脱除Alloc采用四三苯基膦钯/苯硅烷。本专利技术还提供了上述固相制备方法获得的替度鲁肽的聚乙二醇偶合物。本专利技术提供一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法。本专利技术通过固相合成方法替度鲁肽对定点的PEG修饰，从而改变替度鲁肽的性质。其主要优点是可以延长蛋白质（多肽）在体内的半衰期，降低免疫原性和抗原性。附图说明图1示替度鲁肽及本专利技术提供的替度鲁肽的聚乙二醇偶合物的药代试验结果；其中，线1示替度鲁肽，线2示实施例12制备的PEG2000修饰的替度鲁肽，线3示实施例15制备的PEG5000修饰的替度鲁肽，线4示实施例21制备的PEG10000修饰的替度鲁肽，线5示实施例19制备的PEG20000修饰的替度鲁肽；图2示替度鲁肽及本专利技术提供的替度鲁肽的聚乙二醇偶合物对小鼠体重修复的影响；其中，线1示替度鲁肽，线2示实施例12制备的PEG2000修饰的替度鲁肽，线3示实施例15制备的PEG5000修饰的替度鲁肽，线4示实施例21制备的PEG10000修饰的替度鲁肽，线5示实施例19制备的PEG20000修饰的替度鲁肽。具体实施方式本专利技术公开了一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供的替度鲁肽的聚乙二醇偶合物及其固相制备方法中所用原料及制剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1：替代度为0.1mmol/g的Fmoc-Asp(OtBu)-Wang树脂的合成称取替代度为1.0mmol/g的Wang树脂40g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。称取4.94gFmoc-Asp(OtBu)-OH（12mmol）、1.95gHOBt（14.4mmol）和0.15gDMAP（1.2mmol）溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，冰水浴下加入2.25mlDIC（14.4mmol）活化3min后加入固相反应柱中，室温反应2小时。用DMF洗涤3次，加入70ml封闭液（吡啶/乙酸酐=1:1，400mmol：400mmol）封闭8小时（树脂若未完全扩散加DCM作为溶剂）。用DMF洗涤4次，DCM洗4次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Wang树脂。检测替代度为0.098mmol/g。实施例2：替代度为0.19mmol/g的Fmoc-Asp(OtBu)-Wang树脂的合成称取替代度为1.0mmol/g的Wang树脂40g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟。称取9.38gFmoc-Asp(OtBu)-OH（22.8mmol）、3.70gHOBt（27.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物，其特征在于，其N端氨基和/或Lys侧链氨基通过酰胺键与单甲氧基PEG衍生物偶联。

【技术特征摘要】
1.一种替度鲁肽的聚乙二醇偶合物，其特征在于，其N端氨基通过酰胺键与单甲氧基PEG衍生物偶联；所述单甲氧基PEG衍生物选自mPEG琥珀酰亚胺丙酸酯、mPEG琥珀酰亚胺丁酸酯或mPEG-琥珀酰亚胺碳酸酯。2.一种如权利要求1所述的替度鲁肽的聚乙二醇偶合物的固相制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、取Asp与固相载体偶联，获得固相载体-Asp；步骤2、取所述固相载体-Asp逐步偶联氨基酸，获得固相载体-多肽，所述多肽的序列如SEQIDNo.1所示；步骤3、脱除所述固相载体-多肽的N端氨基的保护基团和/或Lys侧链氨基的保护基团后，单甲氧基PEG衍生物通过酰胺键与所述N端氨基和/或所述Lys侧链氨基偶联，裂解、纯化后，即得。3.根据权利要求2所述的固相制备方法，其特征在于，所述单甲氧基PEG衍生物的分子量为1000～40000Da。4.根据权利要求2所述的固相制备方法，其特征在于，所述单甲氧基PEG衍生物的分子量为2000～20000Da。5.根据权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：宓鹏程，刘建，潘俊锋，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44