一种制备耐热脂肪酶的方法及其专用表达载体技术

本发明专利技术公开了一种制备耐热脂肪酶的方法及其专用表达载体。本发明专利技术提供了一种重组载体，为将脂肪酶Btl2编码基因插入毕赤酵母表达载体中，得到的表达脂肪酶重组载体；所述脂肪酶Btl2的氨基酸序列为序列表中的序列2。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术通过毕赤酵母异源蛋白表达系统胞外分泌获得脂肪酶，使获取方法更加简单、降低该酶的生产成本，在耐热脂肪酶的生产中具有广阔的工业前景。

【技术实现步骤摘要】
一种制备耐热脂肪酶的方法及其专用表达载体
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种制备耐热脂肪酶的方法及其专用表达载体。
技术介绍
脂肪酶是一种羧酸酯酶，能够在油水界面催化长链甘油三酯的水解和合成反应。许多脂肪酶具有高度的化学选择性、区域选择性、底物选择性和立体选择性，能够在常温常压下反应，反应条件温和，转化率高，不易产生副产物，因此脂肪酶在食品加工、手性化合物合成、环境治理、生物柴油合成等工业方面有着广泛的应用。脂肪酶的来源包括动物、植物和微生物。相对于动植物脂肪酶，微生物脂肪酶具有更广的作用PH值，作用温度范围和底物特异性，是工业用脂肪酶的重要来源。脂肪酶Btl2的编码基因btl2克隆自一种极端耐热的细菌嗜热链状芽孢杆菌(Bacillus thermocatenulatus),该酶具有较高的温度稳定性，广泛的PH稳定性且在多种有机溶剂中保持酶活稳定，在工业领域特别是生物柴油工业中具有巨大的应用价值。 毕赤酵母异源蛋白表达系统是近年来应用得比较多的酵母蛋白表达系统，该系统被认为是表达外源蛋白的理想系统，具有很高的商业应用价值。这个系统的优点有以下几个方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组载体，为将脂肪酶Btl2编码基因插入毕赤酵母表达载体中，得到的表达脂肪酶重组载体；所述脂肪酶Btl2编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列1。

【技术特征摘要】
1.一种重组载体，为将脂肪酶Btl2编码基因插入毕赤酵母表达载体中，得到的表达脂肪酶重组载体； 所述脂肪酶Btl2编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列I。2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于:所述毕赤酵母表达载体为pPICZa。3.—种重组菌，为将权利要求1或2所述重组载体导入毕赤酵母菌中得到的重组菌。4.权利要求1或2所述的重组载体或权利要求3所述的重组菌在制备脂肪酶中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于:所述脂肪酶具有如下I)和/或2)所示的特征:1)胞外分泌；2)耐热。6.一种制备脂肪酶的方法，包括如下步骤:发酵权利要求3所述的重组菌，收集发酵产物的上清液，得到脂肪酶。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于: 所述发酵按照如下步骤进行: 1)将权利要求3所述的重组菌在发酵培养基中培养，在培养过程中流加补料； 2)向I)培养得到的 发酵体系中流加甲醇溶液诱导培养； 所述补料为含12ml/L PTMl的质量百分含量为50%甘油水溶液； 每 IL 的 PTMl 按照如下方法制备:6g CuSO4.5Η20、0.08g Nal、3g MnSO4.H20,0.2gNaMoO4.2Η20、0.02g ...

【专利技术属性】
技术研发人员：印铁，刘德华，欧先金，杜伟，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11