本发明专利技术涉及具有脂肪酶活性的分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(b)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下、中严格条件下、中-高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:3或(i)的全长互补体杂交；(c)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(d)一种多肽，该多肽是在一个或多个(例如若干个)位置处包括一个取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:4的变体；以及(e)一种多肽，该多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一项的片段。本发明专利技术还涉及编码这些多肽的多核苷酸；包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及使用这些多肽的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有脂肪酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸对序列表的引用本申请包含一个计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及具有脂肪酶活性的多肽、编码这些多肽的多核苷酸、产生这些多肽的方法、以及使用这些多肽的方法。相关技术说明脂肪酶是重要的生物催化剂，其已显示可用于各种应用并且大量的不同脂肪酶已经被鉴定并且许多已被商品化。然而，适合于在适应于当前使用的条件的不同组合物中使用的新脂肪酶是令人希望的。脂肪酶已经被用于组合物中用于通过水解甘油三酯以产生脂肪酸来去除脂质污渍。当前清洁和/或织物护理组合物包括许多活性成分，这些成分干扰脂肪酶去除脂质污渍的能力。因此，需要可以在用于清洁的组合物的严苛环境中起作用的脂肪酶。专利技术概述本专利技术涉及具有脂肪酶活性的分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)一种多肽，该多肽与SEQIDNO:4具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(b)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下、中严格条件下、中-高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQIDNO:3或(i)的全长互补体杂交；(c)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:3具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(d)一种多肽，该多肽是在一个或多个(例如若干个)位置处包括一个取代、缺失、和/或插入的SEQIDNO:4的变体；以及(e)一种多肽，该多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一项的片段。本专利技术还涉及编码这些变体的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及产生该多肽的方法和该多肽的用途。本专利技术还涉及包括该多肽的组合物和使用该多肽进行清洁的方法。定义等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占用同一染色体位点的一种基因的两个或更多个替代形式中的任一者。等位基因变异由突变天然产生，并且可以导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。cDNA：术语“cDNA”意指可以通过得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子的反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工，包括剪接。编码序列：术语“编码序列”意指直接指定一个多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由一个开放阅读框架决定，该开放阅读框架从一个起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以一个终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是一种基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本专利技术的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。至少，控制序列包括启动子，以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码一种多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。表达载体：术语“表达载体”意指一种直链或环状DNA分子，该分子包括编码一种多肽的一种多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。片段：术语“片段”意指在成熟多肽的氨基(N-)和/或羧基(C-)末端不存在一个或多个(例如，若干个)氨基酸的一种多肽；其中该片段具有脂肪酶活性。在一方面，该片段的N-末端对应于SEQIDNo:2的氨基酸残基115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140。在一方面，该片段至少包含SEQIDNO:2的氨基酸残基115至395、116至395、117至395、118至395、119至395、120至395、121至395、122至395、123至395、124至395、125至395、126至395、127至395、128至395、129至395、130至395、131至395、132至395、133至395、134至395、135至395、136至395、137至395、138至395、139至395、或140至395。在一方面，该片段包含SEQIDNO:4的氨基酸数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。高严格条件：术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2XSSC、0.2％SDS，在65℃下洗涤三次，每次15分钟。宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包括本专利技术的一种多核苷酸的一种核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。分离的：术语“分离的”意指处于非天然存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从与其在自然界中相关联的一种或多种(例如，若干种)或全部天然存在的组分中除去的任何物质，包括但不局限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子；(3)相对于自然界中发现的那种物质通过人工手动修饰的任何物质；或者(4)通过相对于与其天然相关联的其他组分增加该物质的量而修饰的任何物质(例如，编码该物质的基因的多个拷贝；比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。一种分离的物质可以存在于发酵液样品中。脂肪酶：术语“脂肪酶(lipase)”、“脂肪酶(lipaseenzyme)”、“脂解酶”、“脂质酯酶”、“脂解多肽”以及“脂解蛋白”是指如酶命名法所定义的EC3.1,1类中的一种酶。它可以具有脂肪酶活性(三酰基甘油脂肪酶，EC3.1.1.3)、角质酶活性(EC3.1.1.74)、固醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蜡酯水解酶活性(EC3.1.1.50)。出于本专利技术的目的，根据实例中所述的程序确定脂肪酶活性。在一方面，本专利技术的变体具有SEQIDNO:4的多肽的脂肪酶活性的至少20％，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有脂肪酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(b)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下、中严格条件下、中‑高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:3或(i)的全长互补体杂交；(c)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(d)一种多肽，该多肽是在一个或多个(例如若干个)位置处包括一个取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:4的变体；以及(e)一种多肽，该多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一项的片段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.21 EP 13160414.21.一种组合物，其包含源自卷枝毛霉(Mucorcircinelliodes)的具有脂肪酶活性的多肽，并进一步包含至少一种表面活性剂或至少一种皂，其中所述多肽与SEQIDNO:4具有至少99%序列一致性。2.如权利要求1所述的组合物，其中这些表面活性剂选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性表面活性剂、兼性离子表面活性剂、半极性非离子表面活性剂。3.如权利要求2所述的组合物，其中这些表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、氢化椰油酸钠、月桂醇醚硫酸钠、C12-14pareth-7、C12-15pareth-7、C12-15pareth硫酸钠、以及C14-15pareth-4。4.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物是一种衣物清洁组合物、餐具清洁组合物、硬表面清洁组合物和/或个人护理清洁组合物。5.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物被配制为压缩的或浓缩的液体；凝胶；膏；皂条；压缩的粉末；粒状固体；具有两个或更多个层的均匀或多层片剂；具有一个或多个室的袋；单个或多个室单位剂型。6.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物具有从pH8至pH11的清洁活性。7.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物在从20°C...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·D·莫兰特，A·V·赖泽，C·H·汉森，K·博尔奇，L·鲍恩斯加德，V·K·巴蒂亚，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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