具有脂肪酶活性的多肽及编码它的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及具有脂肪酶活性的分离的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明专利技术还涉及核酸构建体、载体以及包括这些多核苷酸的宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】序列表的引用本申请包括一个计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及具有脂肪酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术还涉及核酸构建体、载体以及包括这些多核苷酸的宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。相关技术说明本专利技术提供具有脂肪酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。披露于Glogauer(葛罗高尔)等人Microbial Cell Factories(微生物细胞工厂)2011,10:54中的脂肪酶示出与SEQ ID NO:2具有91.8％的氨基酸序列一致性。专利技术概述本专利技术涉及选自下组的具有脂肪酶活性的分离的多肽，该组由以下各项组成：(a)具有与SEQ ID NO:2的成熟多肽至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的一种多肽；(b)一种多肽，该多肽是由一种多核苷酸编码的，该多核苷酸在低严谨度条件下、中严谨度条件下、中-高严谨度条件下、高严谨度格条件下或非常高严谨度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长补体杂交；(c)一种多肽，该多肽是由一种多核苷酸编码的，该多核苷酸具有与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；(d)(a)、(b)或(c)的多肽的一种变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段，该片段具有脂肪酶活性。本专利技术还涉及编码本专利技术的多肽的分离的多核苷酸；核酸构建体；重组表达载体；包括这些多核苷酸的重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。本专利技术还涉及多种组合物、生产一种组合物的方法、清洁一个表面的方法、以及水解一种脂质的方法。定义在详细描述本专利技术的组合物和方法之前，为了清楚，定义了以下术语。未定义的术语和缩写应与如在本领域中使用的它们普通含义一致。脂肪酶：术语“脂肪酶(lipase、lipase enzyme)”，“脂肪分解酶”，“脂质酯酶”，“脂肪分解多肽”，和“脂肪分解蛋白”是指如由酶命名法定义的类别EC3.1,1中的一种酶。它可以具有脂肪酶活性，该脂肪酶活性包括但不局限于甘油三酯脂肪酶活性(EC3.1.1.3)、甘油单酯脂肪酶活性(EC3.1.1.23)、磷脂酶活性(若干个EC)、溶血磷脂酶活性、阿魏酸酯酶活性、角质酶活性(EC3.1.1.74)、甾醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蜡-酯水解酶活性(EC3.1.1.50)。出于本专利技术的目的，根据实例中所述的程序确定脂肪酶活性。在一个方面，本专利技术的变体具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的脂肪酶活性的至少20％、例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％。等位基因变体：术语“等位基因变体”是指占用同一染色体位点的一种基因的两个或更多个替代形式中的任一者。等位基因变异由突变天然产生，并且可以导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。催化结构域：术语“催化结构域”是指一种酶的含有该酶的催化机构的区域。cDNA：术语“cDNA”是指可以通过得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子的反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工，包括剪接。编码序列：术语“编码序列”是指直接指定一个多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由一个开放阅读框架决定，该开放阅读框架从一个起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以一个终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是一种基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。控制序列：术语“控制序列”是指表达编码本专利技术的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是原生的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是原生的或外源的。此类控制序列包括但不局限于前导子、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。至少，控制序列包括启动子，以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码一种多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不局限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。表达载体：术语“表达载体”是指一种直链或环状DNA分子，该分子包括编码一种多肽的一种多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。片段：术语“片段”是指在一种成熟多肽的氨基和/或羧基末端不存在一个或多个(例如若干个)氨基酸的一种多肽；其中该片段具有脂肪酶活性。在一个方面，一个片段含有成熟多肽的氨基酸数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％。高严谨度条件：术语“高严谨度条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹(Southern blotting)程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在65℃下洗涤三次，每次15分钟。宿主细胞：术语“宿主细胞”是指易于用包括本专利技术的一种多核苷酸的一种核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。分离的：术语“分离的”是指处于非天然存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从与其在自然界中相关联的一种或多种或全部天然存在的组分中除去的任何物质，包括但不局限于任何酶、变体、核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有脂肪酶活性的分离的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)具有与SEQ ID NO:2的成熟多肽至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的一种多肽；(b)一种多肽，该多肽是由一种多核苷酸编码的，该多核苷酸在低严谨度条件下、中严谨度条件下、中‑高严谨度条件下、高严谨度格条件下或非常高严谨度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长补体杂交；(c)一种多肽，该多肽是由一种多核苷酸编码的，该多核苷酸具有与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；(d)(a)、(b)或(c)的多肽的一种变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段，该片段具有脂肪酶活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.12 EP 12176129.01.一种具有脂肪酶活性的分离的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各
项组成：
(a)具有与SEQ ID NO:2的成熟多肽至少92％、至少93％、至少94％、
至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致
性的一种多肽；
(b)一种多肽，该多肽是由一种多核苷酸编码的，该多核苷酸在低严谨度
条件下、中严谨度条件下、中-高严谨度条件下、高严谨度格条件下或非常高
严谨度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长补
体杂交；
(c)一种多肽，该多肽是由一种多核苷酸编码的，该多核苷酸具有与SEQ 
ID NO:1的成熟多肽编码序列至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、
或100％序列一致性；
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的一种变体，该变体在一个或多个位置处包括
取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段，该片段具有脂肪酶活性。
2.如权利要求1所述的多肽，包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:2的成
熟多肽或由其组成。
3.如权利要求2所述的多肽，其中该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸
1至292。
4.一种组合物，该组合物包括如权利要求1-3中任一项所述的多肽。
5.如权利要求4所述的组合物，其中与缺乏脂肪酶的等效组合物相比，
所述组合物更有效地去除一个表面上存在的多种脂质污物。
6.如权利要求4-5中任一项所述的组合物，进一步包括一种或多种二价
阳离子，这些二价阳离子优选地选自钙(Ca2+)、镁(Mg2+)和铁-II(Fe2+)。
7.如权利要求4-6中任一项所述的组合物，进一步包括选自下组的一种
或多种表面活性剂，该组由以下各项组成：阴离子表面活性剂、阳离子表面
活性剂、非离子表面活性剂、兼性离子表面活性剂。
8.如权利要求4-7中任一项所述的组合物，其中该表面活性剂包括选自
下组的一种或多种表面活性剂，该组由以下各项组成：十二烷基苯磺酸钠、

\t氢化椰油酸钠、月桂醇醚硫酸钠、C12-14链烷醇聚醚-7、C12-15链烷醇聚醚
-7、C12-15链烷醇聚醚硫酸钠、以及C14-15链烷醇聚醚-4。
9.如权利要求4-8中任一项所述的组合物，在从8.0至11的pH下配制。
10.如权利要求4-9中任一项所述的组合物，其中该组合物选自下组，该
组由以下各项组成：洗衣清洁组合物、洗碗清洁组合物、硬表面清洁组合物
和个人护理清洁组合物。
11.如权利要求4-10中任一项所述的组合物，其中该组合物的形式是选
自下...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·P·奥林斯基，P·尼尔森，K·博尔奇，A·V·赖泽，C·H·汉森，L·鲍恩斯加德，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK