抗CD138单克隆抗体可变区序列及其制备方法技术

本发明专利技术提供了抗CD138单克隆抗体可变区序列的十六种核苷酸序列，以及抗CD138单克隆抗体可变区序列的制备方法，并进行测序；其可用于制备重组抗体、ScFv抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体和单域抗体，可应用在制备抗体药物上，在肿瘤诊断、病情进展、转移潜能和预后的评价等方面具有很大的潜在价值；是生物医药领域中癌基因发展的一个重要进步，使行业领域内对癌的预测、诊断、治疗、预后的价值会得到更为全面的认识。

【技术实现步骤摘要】
抗CD138单克隆抗体可变区序列及其制备方法
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种抗CD138单克隆抗体可变区序列及其制备方 法。
技术介绍
⑶138是一种蛋白聚糖，通过与肝素结合生长因子、可溶性基质成分等多种效应器 相互作用来调节细胞行为。Syndecans家族有4个成员，分别为5711(16〇311-1、-2、-3、-4，其 中对Syndecan-I(CD138)的研究最为广泛。 Sydecan-1(CD138)分子是跨膜粘结蛋白聚糖家族成员，由胞浆段、跨膜段和胞外 段组成。⑶138是一类非常复杂的大分子复合物，分子量约85?92kD，由核心蛋白和未分 枝的糖胺聚糖链共价结合形成的一类糖结合物，亦称蛋白聚糖，蛋白聚糖存在于所有哺乳 动物中，是细胞间质、细胞质膜的重要组成成分。 ⑶138分子属I型跨膜蛋白，有一个N端信号肽、一个含糖胺聚糖附着处的膜外区、 一个疏水跨膜区和一个短的C端胞浆区组成。CD138的跨膜区和胞浆区是高度保守的，胞浆 区肽链较短，由13个氨基酸组成，与跨膜区紧密相连。目前胞浆区部分的功能还不太清楚。 跨膜蛋白聚糖CD138可表达在各种来源的肿瘤细胞表面，包括骨髓瘤、卵巢癌、乳 腺癌、肝癌、何杰金氏病及与某些HIV有关的淋巴瘤。当正常细胞恶变后，细胞膜表面CD138 分子的表达常发生改变，并且与肿瘤的恶性程度、预后有一定相关性。CD138是一种粘附分 子，它在肿瘤细胞膜表面表达减少或者缺失，使细胞的生长、分化等行为发生紊乱，导致了 瘤细胞大量繁殖，表现出极强的侵袭活性和转移特性。 CD138与肿瘤的发生、发展有一定的相关性，并与肿瘤的分型、分化分期有一定关 系，可根据癌组织中CD138表达程度来判断肿瘤分型，并采取相应治疗手段。由于CD138可 促进细胞-细胞，细胞-基质之间的粘附，肿瘤细胞生长，侵袭和转移的特性，因此可用于肿 瘤的免疫或基因治疗，其在肿瘤诊断、病情进展、转移潜能和预后的评价等方面具有很大的 潜在价值。因此，随着分子生物学的不断发展，癌基因研究的不断深入，相信该基因对癌的 预测、诊断、治疗、预后的价值会得到更为全面的认识。 鼠源单抗在人体内可引起人抗鼠抗体反应。基因工程抗体技术的发展使得人们可 以在基因水平上改造抗体，降低抗体的免疫原性，提高抗体特异性、稳定性和亲和力。对鼠 源抗体进行人源化改造，可保留抗体可变区与人源抗体恒定区融合，提高抗体亲和力；或改 造抗体结构，构建只保留抗体可变区的ScFv或含抗体可变区和部分恒定区的Fab，可提高 抗体在体内的吸收百分比和半衰期。
技术实现思路
本专利技术解决了现有技术中的不足，提供抗CD138单克隆抗体可变区核苷酸序列， 同时提供了制备上述核苷酸序列的方法。 本专利技术的专利技术思路：用CD138蛋白作为抗原，免疫小鼠后，检测得到相应抗体表达 呈阳性的小鼠，取阳性小鼠脾脏，分离脾细胞后，融合脾细胞和骨髓瘤细胞，特定培养基中 培养后，检测得到抗体表达阳性克隆，提取阳性杂交瘤细胞总RNA，以总RNA中的mRNA为模 板，反转录得到相应抗体基因的cDNA，再用特异引物PCR获得相应抗体重链可变区和轻链 可变区。 本专利技术的技术方案为：抗CD138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，包括十六种 核苷酸序列，所述核苷酸序列分别为 59166(1. 1)-VH, 59166(1. 1)-VL, 59166(1. 2)-VH, 5916 6 (1. 2) -VL, 58208 (1. 1) -VH, 58208 (1. 1) -VL, 58208 (1. 2) -VH, 58208 (1. 2) -VL, 58208 (2. 1)-VH, 58208 (2. 1) -VL, 58208 (2. 2) -VH, 58208 (2. 2) -VL, 59166 (2. 1) -VH, 59166 (2. 1) -VL, 5916 6(2. 2)-VH, 59166(2. 2)-VL〇 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，所述的核苷酸序列59166(1. 1)-VH 和59166(1. 1)-VL由保藏号为587CT11.3.6. 1的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列 59166(1. 2)-VH和59166(1. 2)-VL由保藏号为587CT11. 3. 6. 2的杂交瘤细胞制备，所述核 苷酸序列58208 (1. 1)-VH和58208 (1. 1)-VL由保藏号为480CT5. 4. 3. 1的杂交瘤细胞制备， 所述核苷酸序列58208 (1. 2)-VH和58208 (1. 2)-VL由保藏号为480CT5. 4. 3. 2的杂交瘤细 胞制备，所述核苷酸序列58208 (2. 1) -VH和58208 (2. 1) -VL由保藏号为480CT13. 4. 3. 2. 1 的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列58208(2. 2)-VH和58208(2. 2)-VL由保藏号为 480CT13. 4. 3. 2. 2的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列59166(2. 1)-VH和59166(2. 1)-VL 由保藏号为587CT7.3.6.5. 1的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列59166(2.2)-VH和 59166(2. 2)-VL由保藏号为587CT7. 3. 6. 5. 2的杂交瘤细胞制备。 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，还包括与所述十六种核苷酸序列具有 相同氨基酸序列产物的核苷酸序列。 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，还包括经一个或几个碱基替换、缺失或 添加后仍具有与所述核苷酸序列产生的氨基酸序列具有相同活性的核苷酸序列。 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，所述核苷酸序列59166(1. 1)_VH、 59166 (1. 1)-VL、59166 (1. 2)-VH、59166 (l. 2)-VL、58208 (l. 1)-VH、58208 (1. 1)-VL、 58208(1. 2)-VH、58208(1. 2)-VL、58208 (2. 1)-VH、58208 (2. 1)-VL、58208 (2. 2)-VH、 58208(2. 2)-VL、59166(2. 1)-VH、59166(2. 1)-VL、59166(2. 2)-VH 和 59166(2. 2)-VL 可用于 制备抗体。 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，上述抗体包括以下一种或几种：重组抗 体、ScFv抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体和单域抗体。 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，一种抗体药物，包含上述的抗体以及药 学上可接受的载体。 本专利技术的一个较佳实施例中，进一步包括，一种表达载体，包含上述的核苷酸序 列：59166 (1. 1) -VH, 59166 (1. 1) -VL, 59166 (1. 2) -VH, 59166 (1. 2) -VL, 58208 (1. 1) -VH，5 8208 (1. 1) -VL, 58208 (1.2) -VH, 58208 (1.2) -VL, 58208 (2. 1) -VH, 58208 (2. 1本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗CD138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，包括十六种核苷酸序列，所述核苷酸序列分别为59166(1.1)‑VH,59166(1.1)‑VL,59166(1.2)‑VH,59166(1.2)‑VL,58208(1.1)‑VH,58208(1.1)‑VL,58208(1.2)‑VH,58208(1.2)‑VL,58208(2.1)‑VH,58208(2.1)‑VL,58208(2.2)‑VH,58208(2.2)‑VL,59166(2.1)‑VH,59166(2.1)‑VL,59166(2.2)‑VH,59166(2.2)‑VL。

【技术特征摘要】
2013.01.30 CN 201310034972.81. 抗CD138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，包括十六种核苷酸序列，所述核苷 酸序列分别为 59166 (1. 1) -VH, 59166 (1. 1) -VL, 59166 (1. 2) -VH, 59166 (1. 2) -VL, 58208 (1 .1) -VH, 58208 (1.1) -VL, 58208 (1.2) -VH, 58208 (1.2) -VL, 58208 (2. 1) -VH, 58208 (2. 1) -V L, 58208 (2. 2) -VH, 58208 (2. 2) -VL, 59166 (2. 1) -VH, 59166 (2. 1) -VL, 59166 (2. 2) -VH, 59166 (2. 2)-VL〇2. 根据权利要求1所述的抗CD138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，所述的核苷酸 序列59166(1. 1)-VH和59166(1. 1)-VL由保藏号为587CT11. 3. 6. 1的杂交瘤细胞制备，所 述核苷酸序列59166(1. 2)-VH和59166(1. 2)-VL由保藏号为587CT11. 3. 6. 2的杂交瘤细胞 制备，所述核苷酸序列58208 (1. 1) -VH和58208 (1. 1) -VL由保藏号为480CT5. 4. 3. 1的杂交 瘤细胞制备，所述核苷酸序列58208 (1. 2)-VH和58208 (1. 2)-VL由保藏号为480CT5. 4. 3. 2 的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列58208(2. 1)-VH和58208(2. 1)-VL由保藏号为 480CT13. 4. 3. 2. 1的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列58208(2. 2)-VH和58208(2. 2)-VL 由保藏号为480CT13.4.3.2.2的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列59166(2. 1)-VH 和59166(2. 1)-VL由保藏号为587CT7. 3.6. 5. 1的杂交瘤细胞制备，所述核苷酸序列 59166 (2. 2)-VH和59166 (2. 2)-VL由保藏号为587CT7. 3. 6. 5. 2的杂交瘤细胞制备。3. 根据权利要求2所述的抗C138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，还包括与所述 十六种核苷酸序列具有相同氨基酸序列产物的核苷酸序列。4. 根据权利要求3所述的抗C138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，还包括经一个 或几个碱基替换、缺失或添加后仍具有与所述核苷酸序列产生的氨基酸序列具有相同活性 的核苷酸序列。5. 根据权利要求4所述的抗C138单克隆抗体可变区序列，其特征在于，所述核苷酸 序列 59166(1. 1)-VH、59166(1. 1)-VL、59166(1. 2)-VH、59166(l. ...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹建炫，杨林，张明，陈丹，杨春花，李静文，李顺玲，吴纯，周延庆，孙其玲，汪伟，
申请(专利权)人：百奇生物科技苏州有限公司，苏州大学，博生吉医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32