Trop-2特异性抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供与滋养层细胞表面抗原2(Trop-2)特异性结合之抗体。本发明专利技术进一步提供包含抗体之抗体缀合物、编码抗体之核酸及获得抗体之方法。本发明专利技术还涉及使用这些抗体及Trop-2抗体缀合物以治疗与Trop-2表达有关之症状(例如癌，诸如结肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肺癌、卵巢癌或胰癌)之治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本申请案要求美国临时专利申请案号61/559,015(2011年11月11日提出申请)、美国临时专利申请案61/640,641(2012年4月30日提出申请)及美国临时专利申请案61/717,288(2012年10月23日提出申请)之权益，上述申请以参照方式全文并入本文。
本专利技术涉及抗体(例如全长抗体或其抗原结合片段)，其与滋养层细胞表面抗原(Trop-2)特异性结合。本专利技术进一步涉及包含Trop-2抗体之抗体缀合物(例如抗体-药物-缀合物)、包含Trop-2抗体之组合物，及使用Trop-2抗体及其缀合物以治疗与Trop-2表达有关之症状(例如癌)之方法。
技术介绍
滋养层细胞表面抗原(Trop-2)又名M1S1、GA733-1(胃抗原733-1)、EGP-1(上皮糖蛋白-1)或TACSTD2(肿瘤相关性钙信号传导因子)，其系最早于人胎盘滋养层鉴定到之细胞表面糖蛋白，后来被发现高度表现于大部分人之癌细胞中，且仅受限或有限地表达于正常成人组织。见例如Varughese et al.,Gynecologic Oncology,122:171-177,2011。Trop-2在不同物种之间具有高度保守性。举例来说，人Trop-2蛋白与小鼠Trop-2蛋白之间具有79％一致性。见Cubas et al.,Molecular Cancer,9:253,2010。虽然Trop-2之生物功能尚不清楚，但多项研究显示Trop-2之过表达与多种人癌症之肿瘤侵犯性(agressiveness)、转移及预后不良有关，像是结肠癌、卵巢癌及胰腺癌。见例如Fang et al.,Int.J.Colorectal Dis,24:875-884,2009；Bignotti et al.,Eur.J.Cancer,46:944-953,2010；及Fong et al.,Br J Cancer,99:1290-1295,2008。研究亦显示Trop-2藉由活化在癌细胞增生、移动、入侵及存活上有重要关联性之ERK1/2MAPK途径造成至少部分的肿瘤发病机理。见Cubas et al.,2010，同上。上皮肿瘤细胞过表达Trop-2及其跨膜位置使Trop-2成为癌免疫治疗中值得注意之标靶。因此，对Trop-2(特别是人Trop-2)具有高度亲和性之抗体将是在人病患之癌治疗中的优良治疗剂。虽然已公开了多种Trop-2抗体公开(见例如美国专利第7,420,041号(抗体AR47A6.4.2)、美国专利第5,850,854号(抗体BR110)、美国专利第6,653,104号(抗体RS7)、美国专利第7,517,964号(抗体RS7)、US2012/0237518)，但是要找到具有高度亲和性、高度特异性及强效细胞毒性或肿瘤杀伤/抑制/退行活性之单克隆抗体非常困难。仍然需要具有改良的疗效及安全性特性且适用于人病患之针对Trop-2之抗体及其它免疫治疗剂(如抗体-药物缀合物)。
技术实现思路
本专利技术公开要求保护与Trop-2结合的抗体及抗体缀合物(例如抗体-药物缀合物)。在一方面，本专利技术提供抗体或抗体缀合物，其藉由表面等离子体共振所测量之约6.5nM或小于6.5nM之单价抗体结合亲和性(KD)与人Trop-2(SEQ ID NO:27)之结构域3(例如氨基酸残基152至206)及结构域4(例如氨基酸残基209至274)特异性结合。在另一方面，本专利技术提供经分离之抗体或其抗原结合片段，其与Trop-2特异性结合，其中该抗体包含a)重链可变区(VH)互补决定区及/或b)轻链可变区(VH)互补决定区，该重链可变区(VH)互补决定区包含(i)VH互补决定区1(CDR1)，其包含序列SYGVH(SEQ ID NO:30)、GGSISSY(SEQ ID NO:36)或GGSISSYGVH(SEQ ID NO:37)；(ii)VH CDR2，其包含序列VIWTX1GX2TDYNSALMX3，其中X1系G或S、X2系S或V、X3系S或G(SEQ ID NO:49)；或WTX1GX2，其中X1系G或S、X2系S或V(SEQ ID NO:50)；及(iii)VH CDR3，其包含序列DGDYDRYTMDY(SEQ ID NO:35)；DYDRYTX1DY，其中X1系E或M(SEQ ID NO:82)；或DYDRYTX1DY，其中X1系任何天然存在之氨基酸，例如A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y或V(SEQ ID NO:83)，该轻链可变区(VL)互补决定区包含(i)VL CDR1，其包含序列RASKSVSTSX1YSYMH，其中X1系G、L或N(SEQ ID NO:63)；(ii)VL CDR2，其包含序列LASNLES(SEQ ID NO:55)；及(iii)VL CDR3，其包含序列VLQHSRELPYT(SEQ ID NO:56)。在一些实施方式中，该抗体不包含以下序列之重链可变区(SEQ ID NO:2)及轻链可变区(SEQ ID NO:1)：QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLGVIWT GGSTDYNSALMSRLSINKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCARDGDYDRYTM DYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:2)；DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIY LASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPYTFGGGT KLEIK(SEQ ID NO:1)。在另一方面，本专利技术提供一种经分离之抗体或其抗原结合片段，其与Trop-2特异性结合，其中该抗体包含：VH区和/或VL区，该VH区包含如SEQ ID NO:5、84或85所示之VH序列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，该VL区包含如SEQ ID NO:3或6所示之VL序列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3。在一些实施方式中，该VH区包含(i)VH CDR1，其包含序列SYGVH(SEQ ID NO:30)、GGSISSY(SEQ ID NO:36)或GGSISSYGVH(SEQ ID NO:37)；(ii)VH CDR2，其包含序列VIWTSGVTDYNSALMG(SEQ ID NO:38)或WTSGV(SEQ ID NO:39)；及(iii)VH C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种经分离之抗体或其抗原结合片段，其与滋养层细胞表面抗原2(Trop‑2)特异性结合，其中所述抗体包含(a)重链可变区(VH)互补决定区，其包含(i)VH互补决定区1(CDR1)，其包含序列SYGVH(SEQ ID NO:30)、GGSISSY(SEQ ID NO:36)或GGSISSYGVH(SEQ ID NO:37)；(ii)VH CDR2，其包含序列VIWTX1GX2TDYNSALMX3，其中X1系G或S；X2系S或V；X3系S或G(SEQ ID NO:49)，或包含序列WTX1GX2，其中X1系G或S，X2系S或V(SEQ ID NO:50)；及(iii)VH CDR3，其包含序列DYDRYTX1DY，其中X1系E或M(SEQ ID NO:82)；和/或(b)轻链可变区(VL)互补决定区，其包含(i)VL CDR1，其包含序列RASKSVSTSX1YSYMH，其中X1系G、L或N(SEQ ID NO:63)；(ii)VL CDR2，其包含序列LASNLES(SEQ ID NO:55)；及(iii)VL CDR3，其包含序列QHSRELPYT(SEQ ID NO:56)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.11.11 US 61/559,015;2012.04.30 US 61/640,641;1.一种经分离之抗体或其抗原结合片段，其与滋养层细胞表面抗原2
(Trop-2)特异性结合，其中所述抗体包含
(a)重链可变区(VH)互补决定区，其包含(i)VH互补决定区1(CDR1)
，其包含序列SYGVH(SEQ ID NO:30)、GGSISSY(SEQ ID NO:36)或
GGSISSYGVH(SEQ ID NO:37)；(ii)VH CDR2，其包含序列
VIWTX1GX2TDYNSALMX3，其中X1系G或S；X2系S或V；X3系S或
G(SEQ ID NO:49)，或包含序列WTX1GX2，其中X1系G或S，X2系S
或V(SEQ ID NO:50)；及(iii)VH CDR3，其包含序列DYDRYTX1DY，其
中X1系E或M(SEQ ID NO:82)；和/或
(b)轻链可变区(VL)互补决定区，其包含(i)VL CDR1，其包含序列
RASKSVSTSX1YSYMH，其中X1系G、L或N(SEQ ID NO:63)；(ii)VL 
CDR2，其包含序列LASNLES(SEQ ID NO:55)；及(iii)VL CDR3，其包
含序列QHSRELPYT(SEQ ID NO:56)。
2.一种经分离之抗体或其抗原结合片段，其与Trop-2特异性结合，
其中所述抗体包含：
VH区，其包含SEQ ID NO:5或85所示之VH序列的VH CDR1、
VH CDR2及VH CDR3；和/或
VL区，其包含SEQ ID NO:3或6所示之VL序列的VL CDR1、VL 
CDR2及VL CDR3。
3.权利要求2之抗体或抗原结合片段，其中所述VH区包含(i)VH 
CDR1，其包含序列SYGVH(SEQ ID NO:30)、GGSISSY(SEQ ID NO:36)
或GGSISSYGVH(SEQ ID NO:37)；(ii)VH CDR2，其包含序列
VIWTSGVTDYNSALMG(SEQ ID NO:38)或WTSGV(SEQ ID NO:39)；
及(iii)VH CDR3，其包含序列DGDYDRYTMDY(SEQ ID NO:35)、
DYDRYTMDY(SEQ ID NO:99)或DYDRYTEDY(SEQ ID NO:100)。
4.权利要求3之抗体或抗原结合片段，其中所述VL区包含(i)VL 
CDR1，其包含序列RASKSVSTSGYSYMH(SEQ ID NO:54)或
RASKSVSTSLYSYMH(SEQ ID NO:57)；(ii)VL CDR2，其包含序列
LASNLES(SEQ ID NO:55)；及(iii)VL CDR3，其包含序列

\tQHSRELPYT(SEQ ID NO:56)。
5.权利要求4之抗体或抗原结合片段，其中所述VH区包含SEQ ID 
NO:5、85所示之序列或在非CDR内之残基具有一或多个保守性氨基酸取
代之变体，和/或所述VL区包含SEQ ID NO:3、6所示之氨基酸序列或其
在非CDR内之氨基酸具有一或多个氨基酸取代之变体。
6.权利要求5之抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含轻链及重
链，所述轻链包含SEQ ID NO:66所示之序列，且所述重链包含SEQ ID 
NO:65或102所示之序列。
7.权利要求3之抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含由ATCC
编号PTA-12872之表达载体所产生之VH区。
8.权利要求4之抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含由ATCC
编号PTA-12871之表达载体所产生之VL区。
9.一种经分离之抗体或其抗原结合片段，其藉由表面等离子体共振所
测量之约6.5nM或小于6.5nM之单价抗体结合亲和性(KD)与人Trop-2
(SEQ ID NO:27)之结构域3及结构域4特异性结合。
10.一种经分离之抗体或其抗原结合片段，其与Trop-2特异性结合，
其中所述抗体包含
(a)重链可变区(VH)互补决定区，其包含(i)VH互补决定区1...

【专利技术属性】
技术研发人员：SH·刘，WH·胡，P·施特罗普，M·G·多里沃尔斯卡，A·拉吉帕尔，D·L·谢尔顿，T·T·德兰，
申请(专利权)人：瑞纳神经科学公司，
类型：发明
国别省市：美国;US