判断转基因水稻韧皮部汁液中是否含有Bt杀虫蛋白方法技术

本发明专利技术属于涉及生物研究的基础领域，具体涉及一种判断转基因水稻韧皮部汁液中是否含有Bt杀虫蛋白方法。本发明专利技术方法选用水稻吐出的水滴来作为韧皮部汁液的替代品进行Bt杀虫蛋白的测定。将经过常规浸种、催芽处理的水稻种子平铺到塑料托盘中，加入适量的营养液，放置于人工气候箱内，待种子出苗5天后，每天早晨使用移液枪收集水稻尖部的水珠，然后存放于离心管中，最后用蛋白酶联免疫检测试剂盒测定Bt杀虫蛋白的含量。本发明专利技术的有益效果有：本发明专利技术的判断转基因水稻韧皮部汁液中杀虫蛋白含量的新方法适用于多种主要作物，操作简单，极易掌握，并且整个取样过程中植株个体未受到损伤，完全避免了污染的可能，保证了结果的准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于涉及生物研究的基础领域，具体涉及一种。
技术介绍
随着DNA重组技术的不断发展，利用基因工程技术培育的抗虫品种已经在世界范围内广泛种植，这些品种表达来自苏云金杆菌(Bt)的Cry毒素，现已成为害虫防治的一种有效手段。然而，转基因作物的生态风险特别是对环境和非靶标有机体的影响一直是人们关注的焦点。转基因抗虫作物对非靶标生物的影响主要是指对农田生态系统中非靶标的害虫、有益生物以及对作物不产生危害的昆虫类等的影响。由于不同类型的Bt杀虫蛋白具有不同的杀虫谱，因此转基因植物中不同的Bt基因表达必然会对非靶标昆虫产生直接或者间接的影响，这种影响与昆虫对Bt杀虫蛋白的敏感程度以及转基因植株中Bt杀虫蛋白的表达浓度有关。转基因作物会通过食物链和食物网影响更高营养级昆虫的生长发育及繁殖，影响以植食类昆虫为食的捕食或者寄生性天敌，进而影响整个营养层级的节肢动物种类组成和种群动态，引起农田群落结构的变化。刺吸式害虫，特别是蚜虫是大多数农田中广泛存在的一种食草动物，由于其是许多常见的捕食性和寄生性天敌昆虫(比如草蛉、食蚜蝇和瓢虫等)的主要甚至是专一的食物，因此蚜虫经常被作为指示性生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种判断转基因水稻韧皮部汁液中是否含有Bt杀虫蛋白方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)将经过浸种、催芽处理的转基因水稻种子平铺到塑料托盘中，加入清水使其没过上述水稻种子，然后将塑料托盘放置于人工气候箱；所述放置条件是：温度28℃、湿度75％、先光照14小时后黑暗10小时，且所述光照的照度为22000LX，当水位低于水稻根系位置时从塑料托盘边缘加入清水进行补充，以保证水位没过水稻根系；待到水稻芽变绿，加入以没过水稻根系用量的营养液；(2)当步骤(1)中的水稻种子出苗5天后，每天早晨使用移液枪收集水稻苗叶尖部吐出的水珠，然后存放于离心管中，每份样品标记好时间、样品名称，并放置于‑20℃冰箱内...

【技术特征摘要】
1.一种判断转基因水稻韧皮部汁液中是否含有Bt杀虫蛋白方法，其特征在于，具体包括如下步骤: (1)将经过浸种、催芽处理的转基因水稻种子平铺到塑料托盘中，加入清水使其没过上述水稻种子，然后将塑料托盘放置于人工气候箱；所述放置条件是:温度28°C、湿度75%、先光照14小时后黑暗10小时，且所述光照的照度为22000LX，当水位低于水稻根系位置时从塑料托盘边缘加入清水进行补充，以保证水位没过水稻根系；待到水稻芽变绿，加入以没过水稻根系用量的营养液； (2)当步骤(1)中的水稻种子出苗5天后，每天早晨使用移液枪收集水稻苗叶尖部吐出的水珠，然后存放于离心管中，每份样品标记好时间、样品名称，并放置于_20°C冰箱内储存，所述每个水稻品系至少收集3毫升的样品； (3)待样品收集完毕，将冋一水稻品系每天收集到的样品混合在一起，振汤均勾，然后每个水稻品系设定 三个重复，每个重复取I毫升样品加入500微升PBS/0.55% Tween-20并且振荡均匀；(4)将Bt 纯蛋白用 PBS/0.55% Tween-20 分别稀0.2pp0.4ppb、.0.8ppb、.l.6ppb、.3.2ppb和6.4ppb的浓度用作标准曲线的取样点； (5)然后先加50微升CrylAb酶结合物到酶标板的每个孔中，接着加入50微升的PBS/0.55% Tween-20到第一个孔作为空白对照，加入50微升的CrylAb阳性对照到第二个孔，根据待测样品数量在酶标板剩下的孔中依次加入50微升的样品； (6)将酶标板放在桌面上并以画圈的方式摇匀20~30秒钟，然后放入摇床以200rpm、室温条件放置90分钟； (7)取出上述酶标板，将其翻转把孔里的液体倒进水槽中，然后加入PBS/0.05%Tw...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学新，任少鹏，时敏，杨帆，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33