一种β-酪蛋白胶体金检测试纸条制造技术

本实用新型专利技术涉及生物技术领域，提供一种β-酪蛋白胶体金检测试纸条，技术方案为：该试纸条含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，其中：所述金标结合垫为吸附β-酪蛋白金标抗体的结合垫，所述纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，分别是含β-酪蛋白的检测带和羊抗鼠抗体的质控带。本实用新型专利技术提供的该种β-酪蛋白胶体金检测试纸条，对原料乳酪蛋白含量是否达标实现快速特异性检测，分辨率高，缩短检测时间。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术涉及生物
，提供一种β-酪蛋白胶体金检测试纸条，技术方案为：该试纸条含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，其中：所述金标结合垫为吸附β-酪蛋白金标抗体的结合垫，所述纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，分别是含β-酪蛋白的检测带和羊抗鼠抗体的质控带。本技术提供的该种β-酪蛋白胶体金检测试纸条，对原料乳酪蛋白含量是否达标实现快速特异性检测，分辨率高，缩短检测时间。【专利说明】—种β-酪蛋白胶体金检测试纸条
本技术涉及生物
，特别是涉及一种β -酪蛋白胶体金检测试纸条。
技术介绍
酪蛋白是指乳中一大类蛋白质的总称，占乳蛋白的76-86%。酪蛋白不是单一的蛋白质，而是由α-、β-、y-, κ-四种类型构成，它们各自都有相对分子质量和等电点不同的变异体。其中a-酪蛋白约占75%，酪蛋白约占22%，Y-酪蛋白约占3%，K-酪蛋白只占微量。目前，国内尚未有酪蛋白含量检测方法的国家标准和行业标准。申请号为200810007526.7《一种牛乳中酪蛋白含量的检测方法》的中国专利申请公开的一种酪蛋白含量的检测方法是向牛乳中加入酪蛋白沉淀剂，过滤去除牛乳中酪蛋白，通过测定去除酪蛋白前后的蛋白含量之差计算牛乳中酪蛋白含量，该方法操作复杂，不适合现场操作；申请号为200810146950.X《一种乳中β _酪蛋白含量的检测方法》的中国专利申请公开了一种利用毛细管电泳检测乳中酪蛋白含量的方法，该方法需要对乳样品进行处理，该方法的最低检出线为0.15ng，最低检出浓度为0.005mg/mL，精确度达90%以上，该方法需要预处理，且需特殊仪器设备，不适合现场操作；申请号为200910068653.2《a s1-酪蛋白和κ -酪蛋白特异性抗体及试剂盒和试纸条》的中国专利申请公开了 ct s1-酪蛋白和K-酪蛋白血清抗体及试剂盒和试纸 条的制备方法，该方法所针对的酪蛋白特异性较差，检验结果有效性较低。
技术实现思路
鉴于上述缺陷，本技术的主要目的是提供一种β -酪蛋白胶体金检测试纸条，以实现对原料乳中是否掺假及酪蛋白含量是否达标的快速检测。β_酪蛋白是原料奶中较为稳定的成分，也是乳的特征蛋白，所以其含量是否合格，不仅可以判断乳品蛋白含量和质量，而且可以有效避免用含氮化合物、其他非乳蛋白冒充如蛋白的掺杂使假。为了达到以上目的，本技术提供的该种β -酪蛋白胶体金检测试纸条，该试纸条含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，其中:所述金标结合垫为吸附β_酪蛋白金标抗体的结合垫，所述纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，分别是含β-酪蛋白的检测带和羊抗鼠抗体的质控带。本技术提供的该种β -酪蛋白胶体金检测试纸条是多层结构的窄条薄片，具体结构是:底层是衬板，衬板中部叠置粘贴纤维素膜，衬板一端部上叠置粘贴吸水垫，衬板另一端部上叠置粘贴样品垫，吸水垫内端与样品垫内端各自分别与纤维素膜一端搭接，在样品垫与纤维素膜的搭接处，两者之间夹置粘贴一段金标结合垫。进一步的，所述的衬板为不吸水的韧性材料；更进一步的，上述韧性材料用硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成。进一步的，所述的样品垫为玻璃纤维膜、尼龙膜、娶偏二氟乙烯膜或聚酯膜任意一种。进一步的，所述的结合垫为玻璃纤维膜、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜任意一种。进一步的，所述的纤维素膜为硝酸纤维素膜或羧化纤维素膜。进一步的，所述的吸水垫为吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸。上述试纸条中所涉及的酪蛋白单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤:1.动物免疫注射:将β_酪蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠，进行免疫以及加强免疫；2.制备杂交瘤细胞:取免疫效果最佳的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，以酪蛋白、a S1-酪蛋白和K-酪蛋白作为检测抗原，通过酶联免疫吸附试验检测杂交瘤细胞的上清进行筛选，保留阳性孔，经过亚克隆获得能稳定分泌抗β_酪蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株后；3.对小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，采集腹水以及对腹水纯化获得酪蛋白单克隆抗体。所述步骤I中各次的免疫注射剂量是50-100 μ g/只；所述步骤2中，将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按2-10:1的比例进行细胞融八口 ο上述β -酪蛋白胶体金检测试纸条的制备方法，包括以下步骤:1.胶体金颗粒的制备；2.胶体金标记β -酪蛋白单克隆抗体，并将标记后的β -酪蛋白金标抗体吸附于金标结合垫上；3.将β -酪蛋白和羊抗鼠抗体分别吸附于硝酸纤维素膜检测和质控线位置上；4.组装胶体金试纸条，将吸水垫、纤维素膜、金标结合垫和样品垫从上到下依次固定于衬板上，即成β_酪蛋白胶体金检测试纸条。本技术所提供的β -酪蛋白胶体金检测试纸条，其应用方法包括以下步骤:1、样品处理将原料奶用样品稀释液(ρΗ7.4，，lmmol PBST)进行10倍稀释后用于检测。2、利用上述β -酪蛋白胶体金检测试纸条检测样品将试纸条从铝箔袋中取出，放置室温，做好样品编号标记；用一次性滴管吸取样品,滴入加样孔中，每孔3滴，加样过程中勿使液体溢出加样孔；5分钟内观察结果。当检测线和质控线同时出现棕红色条带时，检测结果为阳性，表示被检测样品中β_酪蛋白含量低于正常值；当检测线不出线，只有质控线出线时，检测结果为阴性，表示被检测样品中β_酪蛋白含量等于或高于正常值；当检测线与质控线均不出线时，表示试纸条已失效。所述正常值为样品中β -酪蛋白含量不低于质量浓度0.5%。本技术具有以下有益成果:本技术是一种基于免疫学竞争法的原理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试纸，可快速特异地检测鲜乳中的β-酪蛋白。根据检测卡样品检测线(T)和质控线(C)的有无显色来判断原料奶是否掺假及样品β-酪蛋白含量是否达标。与现有相比，该检测卡具有操作简单、分辨率高、特异性好等优点，尤其是样品无需处理，无需特殊仪器设备，适合现场操作。【专利附图】【附图说明】图1为实施例4中β -酪蛋白胶体金检测试纸条的结构示意图；图2为实施例4中β -酪蛋白胶体金检测试纸条的显示印迹示意图。【具体实施方式】以下结合实施例及附图对本技术的技术方案进一步说明，但不作对其的限定:实施例1 β -酪蛋白单克隆抗体的制备动物程序:以β -酪蛋白作为抗原，100 μ g/只的免疫剂量用等体积的弗氏完全佐剂充分乳化后腹腔多点注射免疫2只Balb/c小鼠，每隔2?3周再用相同剂量抗原用弗氏不完全佐剂乳化后免疫2-3次，融合前三天加强免疫一次。细胞融合与克隆化:取免疫Balb/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5:1比例融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定分泌抗β-酪蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。细胞冻存和复苏:取处于对数生长期的单克隆杂交瘤细胞株用冻存液制成5 X IO6个/mL的细胞悬液，分装于冻存管，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37°C水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。单克隆抗体的制备与纯化:选择10周龄的Balb/c小鼠，腹腔注射杂交瘤细胞悬液，接种细胞7-10天后收集腹水,经辛酸-饱和硫酸胺法和Prot本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种β‑酪蛋白胶体金检测试纸条，该试纸条含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述金标结合垫为吸附β‑酪蛋白金标抗体的结合垫，所述纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，分别是含β‑酪蛋白的检测带和羊抗鼠抗体的质控带。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周坚，王黎丽，
申请(专利权)人：长沙安迪生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：湖南;43