本发明专利技术公开了一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，属于药物分析领域，由供试样品溶液的制备、色谱条件、连翘叶指纹图谱这三步骤制成。本发明专利技术分析速度快、精密度高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，属于药物分析领域，由供试样品溶液的制备、色谱条件、连翘叶指纹图谱这三步骤制成。本专利技术分析速度快、精密度高。【专利说明】一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及指纹图谱的测定方法。
技术介绍
连翘是清热解毒的中药，主治急性风热感冒、发热、心烦、咽喉肿痛、急性肾炎等，在临床上广为应用。连翘叶不仅入药，在民间作为一种茶饮，具有较好的保健作用。连翘叶中含有的主要成分芦丁、连翘酯苷A、连翘苷，连翘苷具有清热、解毒、散结排脓等功效，主治温热、疮疡、丹毒、斑疹、流感；连翘酯苷具有抗氧化、清除自由基、抗感染的作用；芦丁具有抗炎、抗病毒等功效，为了选择质量较高的连翘叶，通过对不同加工方法、不同部位、不同地点、不同时间采集的连翘叶中芦丁、连翘酯苷A、连翘苷含量的进行对比，确定最佳的采摘时期、加工方法以及采集部位和地点。而目前的检测方法主要是HPLC方法，但是分析速度慢，精密度不是很高；同时用HPLC测定连翘叶中活性成分的含量时，准确度不高、重复性较差，在实际检测工作中，不仅增加了工作量，效率还低下。
技术实现思路
本专利技术需要解决的技术问题是提供一种分析速度快、精密度高的连翘叶指纹图谱的测定方法。本专利技术通过UPLC对连翘叶进行检测，提供了更好的检测连翘叶的质量方法，更加科学、完善的选择质量好的连翘叶。一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，由以下步骤组成: A、供试样品溶液的制备:精密称取连翘叶粉碎样品0.5-2.0g，加入50-100%甲醇50ml，然后称重，超声提取10-60min，放冷后称重，甲醇补足减失重量，摇匀过滤，即得供试样品溶液； B、色谱条件:色谱柱为C18，柱温为15-50°C;流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液，梯度洗脱:0-5min, 14%-23% 乙腈；5_12.5min, 23%-23% 乙腈；12.5_14min, 23%-30% 乙腈；14-19min, 30%_40% 乙腈；19_20min，40%_40% 乙腈；流速 0.2-0.6mL/min;检测波长为252_254nm ； C、连翘叶指纹图谱:精密吸取供试样品溶液0.5-3.0 μ I注入超高效液相色谱仪中，在步骤B色谱条件下分析，得到连翘叶的指纹图谱。作为优选方式:色谱柱为Acquity UPLC BEH C18,规格为 2.1 X 100mm, 1.7 μ m。作为优选方式:步骤A中用0.22 μ m微孔滤膜过滤。作为优选方式:步骤B中柱温为40°C。作为优选方式:步骤B中流速为0.4 mL/min。作为优选方式:步骤A中甲醇浓度为80%。根据连翘叶指纹图谱测定连翘叶中芦丁、连翘酯苷A、连翘苷含量的方法，包括以下步骤:对照品溶液的制备:分别精密称取连翘酯苷A、连翘苷、芦丁对照品适量，分别用甲醇配制成对照品溶液，连翘酯苷A对照品溶液的浓度为0.33 mg.mL-1连翘苷对照品溶液的浓度为0.19 mg.ml/1、芦丁对照品溶液的浓度为0.10 mg.mL—1 ； 用UPLC分析对照品溶液并制定标准曲线:分别精密吸取连翘酯苷对照品溶液、连翘苷对照品溶液、芦丁对照品溶液各 0.5μ 1、1.0μ 1、1.5μ 1、2.Ομ 1、2.5μ 1、3.Ομ 1，用 UPLC进行测定，以进样量为横坐标，峰面积分值为纵坐标，绘制连翘酯苷Α、连翘苷、芦丁的标准曲线，分别计算得到连翘酯苷A、连翘苷、芦丁的回归方程； 测定连翘酯苷A、连翘苷、芦丁的含量:将连翘叶指纹图谱中的连翘酯苷A、连翘苷、芦丁的峰面积值分别代入连翘酯苷A、连翘苷、芦丁的回归方程中，计算出连翘叶中连翘酯苷A、连翘苷、芦丁的含量。方法学考察 1、标准曲线及线性关系考察 分别按照0.5μ 1、1.0μ 1、1.5μ 1、2.Ομ 1、2.5μ 1、3.0 μ I精密吸取连翘酯苷Α、连翘苷、芦丁对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中，进行测定。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表1。表1标准曲线及线性关系【权利要求】1.一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于由以下步骤组成: A、供试样品溶液的制备:精密称取连翘叶粉碎样品0.5-2.0g，加入50-100%甲醇50ml，然后称重，超声提取10-60min，放冷后称重，甲醇补足减失重量，摇匀过滤，即得供试样品溶液； B、色谱条件:色谱柱为C18，柱温为15-50°C;流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液，梯度洗脱:0-5min, 14%-23% 乙腈；5_12.5min, 23%-23% 乙腈；12.5_14min, 23%-30% 乙腈；14-19min, 30%_40% 乙腈；19_20min，40%_40% 乙腈；流速 0.2-0.6mL/min;检测波长为252_254nm ； C、连翘叶指纹图谱:精密吸取供试样品溶液0.5-3.0 μ I注入超高效液相色谱仪中，在步骤B色谱条件下分析，得到连翘叶的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于:色谱柱为 Acquity UPLC BEH C18,规格为 2.1 X 100mm, 1.7 μ m。3.根据权利要求1所述的一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于:步骤A中用0.22 μ m微孔滤膜过滤。4.根据权利要求1所述的一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于:步骤B中柱温为40 C。5.根据权利要求1所述的一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于:步骤B中流速为0.4 mL/min。6.根据权利要求1所述的一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于:所述步骤A中甲醇浓度为80%。【文档编号】G01N30/02GK103940917SQ201310023351【公开日】2014年7月23日 申请日期:2013年1月23日 优先权日:2013年1月23日 【专利技术者】姜新刚, 刘敏彦, 赵韶华, 王玉峰, 粘立军, 朱慧明 申请人:河北以岭医药研究院有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种连翘叶的UPLC指纹图谱测定方法，其特征在于由以下步骤组成：A、供试样品溶液的制备：精密称取连翘叶粉碎样品0.5‑2.0g，加入50‑100%甲醇50ml，然后称重，超声提取10‑60min，放冷后称重，甲醇补足减失重量，摇匀过滤，即得供试样品溶液；B、色谱条件：色谱柱为C18，柱温为15‑50℃；流动相为乙腈‑0.2％甲酸溶液，梯度洗脱: 0‑5min, 14%‑23%乙腈；5‑12.5min, 23%‑23%乙腈; 12.5‑14min, 23%‑30%乙腈; 14‑19min, 30%‑40%乙腈; 19‑20min, 40%‑40%乙腈; 流速0.2‑0.6mL/min;检测波长为252‑254nm；C、连翘叶指纹图谱：精密吸取供试样品溶液0.5‑3.0μl注入超高效液相色谱仪中，在步骤B色谱条件下分析，得到连翘叶的指纹图谱。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姜新刚，刘敏彦，赵韶华，王玉峰，粘立军，朱慧明，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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