用于预测体外受精的成功的新方法和试剂盒技术

本发明专利技术包括一种基于比率确定成功怀孕的方法，所述比率表示为使用在受试者的样品，优选为尿液样品中存在的乳酸菌和葡萄球菌与存在的细菌总量之间的关系的公式。本发明专利技术还包括一种用于实施本发明专利技术的方法并且输出结果的试剂盒，优选为qPCR试剂盒。这种方法和试剂盒在正在经历或符合进行人工受精方法的条件(例如IVF或ICSI)的受试者中预测成功怀孕的可能性是尤其有利。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术包括一种基于比率确定成功怀孕的方法，所述比率表示为使用在受试者的样品，优选为尿液样品中存在的乳酸菌和葡萄球菌与存在的细菌总量之间的关系的公式。本专利技术还包括一种用于实施本专利技术的方法并且输出结果的试剂盒，优选为qPCR试剂盒。这种方法和试剂盒在正在经历或符合进行人工受精方法的条件(例如IVF或ICSI)的受试者中预测成功怀孕的可能性是尤其有利。【专利说明】用于预测体外受精的成功的新方法和试剂盒
本专利技术涉及人类生殖的领域，更具体地涉及人类生殖失败的状况。在这种情况中，人工方法被适当地用于协助妇女怀孕，但是这些治疗的成功比较低，并且更重要地是，这些治疗的成功是不可预测的。本专利技术现提供了一种更可靠的方法，用于预测体外受精中的成功的可能性。
技术介绍
在西方世界，生育能力低下影响10%至15%的夫妇。这种生育能力低下在一半情况中可归因于女性因素，在20%至26%的情况中可归因于男性因素，并且在25%至30%的情况中的因素是未知的(Evers，J.L.，2002，Lancet360:151-159)。许多夫妇转向体外受精(IVF)或胞浆内精子注射(ICSI)来满足他们想要孩子的愿望。这些技术的成功率约为每个起始周期的 25% (Andersen, A.等人.2007，Hum.Reprod.22:1513-1525)。如果能够提高该成功率，将具有极大的情感和经济效益。考虑到辅助的怀孕治疗的个人和社会的负担，可取的是识别具有非常低的成功可能性的夫妇和具有高自然怀孕可能性的夫妇。特别是不育的原因是未知的夫妇显示出高自然怀孕率，并且期待治疗对于他们是可取的(Brandes，Μ.等人.，2011，Hum.R印rod.26:360-368)。因此，为了改进该治疗并且为了确定个体情况中是否继续，就需要有能够准确预测妇女在IVF/ICSI之后是否会怀孕并且活产(livebirth)的模型。十多年来，已经获得了多种模型，这些模型基于临床数据(包括年龄、先前失败的IVF尝试的数目以及不育的可能原因)来预测活产的可能性(Templet0n，W.等人.，1996，Lancet348:1402-1406)。对于大规模的组来说，预测的活产与观测到的活产的比率为40%?60% (Nelson, S.Μ.和 Lawlor D.A.2011, PLOS Medicine8:1-10)。这些作者利用了更多年龄分层和不育的原因、(待)使用的程序、卵细胞的来源和想要孩子的愿望的持续时间，基于来自超过140000妇女的数据开发了一种改进的模型。当新模型的报告操作曲线(reporter operated curve)的曲线下的面积(AUROC)被用于指示该新模型功能如何时,报道了轻微但显著的增加(从0.6184增加至0.6335)。该模型似乎给出了对较大组(多于10000)的妇女的良好预测。然而，还未知的是该模型对于个体的预测怎么样。实现活产的途径可归纳为三个关键步骤:卵细胞的受精，受精卵被女性环境接受，以及受精卵进一步发育直到实现实际的活产。当第一步骤是人工进行(诸如IVF和ICSI)时，可以通过第二步骤的标记物描述成功获得活产的可能性。然而，影响受精卵的接受的因素几乎是未知的。因此，目前不可能在该第二步骤中建立预测成功的标准。因此，仍然需要一种能够基于个体更可靠地预测成功的IVF/ICSI治疗的可能性的模型。
技术实现思路
本专利技术人现已发现可以开发一种模型，该模型能够在个体基础上将成功的(或未成功的)IVF/ICSI治疗的可能性的预测增加至75%至100%。本专利技术包括一种预测受试者成功怀孕的可能性的方法，所述方法包括以下步骤:a.采集尿液样品；b.确定乳酸菌菌种和葡萄球菌菌种的量占所述样品中存在的细菌总量的百分比；c.基于所述细菌之间的比率预测成功怀孕的可能性。优选地，在所述方法中，所述受试者正在经历人工受精的方法或符合进行人工受精方法的条件，该人工受精的方法例如为IVF或ICSI。在另一优选的实施方案中，乳酸菌种为卷曲乳酸菌，并且所述葡萄球菌种为金黄色葡萄球菌。进一步优选地，通过PCR，更优选通过qPCR来进行所述细菌的量的测量。然后在该方法中，优选通过使用引物5’ -GAGTAACACGTGGATAACCTACCTATAAGAC-3’和5’ -GCATCGTTGCCTTGGTAAGC-3’来确定葡萄球菌，并且优选通过使用引物5’ -GAITTACTTCGGTAATGACGTTAGGA-3’ 和 5’ -AGCTGATCATGCGATCTGCTTTC-3’ 来确定乳酸菌。可替代地，通过质谱分析法，更优选通过MALD1-T0F质谱分析法来进行所述细菌的量的测量。更具体地，在根据本专利技术的方法中，通过以下公式确定成功怀孕的可能性:Y = a*(%乳酸菌)-b*(%葡萄球菌)-c,其中，a 具有 0.025 ?0.051 的值；b 具有 0.04 ?0.07 的值；c 具有-1.10 ?-0.66 的值；%乳酸菌为以占细菌总量的百分比的形式表示的乳酸菌细菌的量；%葡萄球菌为以占细菌总量的百分比的形式表示的葡萄球菌细菌的量；以及其中Y代表成功的可能性。优选地，在该公式中，a具有0.025?0.04的值；还优选地b具有0.04?0.06的值；并且进一步优选地c具有-1.06?-0.9的值，更优选具有-1.06?-1.01的值。在其中检测细菌的样品可为尿液样品，并且优选该细菌在中段尿液样品中检测，但是该样品也可为阴道样品，例如阴道涂片。本专利技术还包括一种用于预测成功怀孕的可能性的试剂盒，所述试剂盒包括:a.用于测量来自受试者的样品中的细菌总含量的构件；b.用于测量乳酸菌细菌的含量的构件；c.用于测量葡萄球菌细菌的含量的构件；d.根据上述限定的公式计算可能性的构件。优选地，在这样的试剂盒中，用于测量乳酸菌细菌的含量的构件包括引物5’ -GATTTACTTCGGTAATGACGTTAGGA-3’ 和 5’ -AGCTGATCATGCGATCTGCTTTC-3’，而用于测量葡萄球菌细菌的含量的构件包括引物5 ’ -GAGTAACACGTGGATAACCTACCTATAAGAC-3 ’和5’ -GCATCGTTGCCTTGGTAAGC-3’。还优选地，在这样的试剂盒中，用于测量来自受试者的样品中的细菌总含量的构件包括对细菌16s rDNA具有特异性的通用引物组，更优选地，所述通用引物组包括至少一个正向EUB引物和至少一个反向EUB引物。进一步优选地，在所述试剂盒中，用于计算可能性的构件包括处理器，所述处理器能够接收测量的细菌值作为输入，并且根据上述限定的式计算可能性，并且优选地，该处理器能够将可能性输出至信号构件，所述信号构件能够被使用所述试剂盒的人员读出。【具体实施方式】在下列描述和实施例中，使用了许多术语。为了提供对说明书和权利要求书(包括这些术语被给予的范围)的清楚且一致的理解，提供了以下限定。除非本文另有限定外，本专利技术使用的技术术语和科学术语具有本专利技术所属领域的普通技术人员的常规理解的含义。‘IVF’或体外受精为将卵细胞(卵子)移出妇女卵巢的过程。该卵细胞在实验室程序中经精子受精，并且随后将受精卵(胚胎)送回到妇女的子宫中。iI本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预测受试者成功怀孕的可能性的方法，所述方法包括以下步骤：a.采集尿液样品；b.确定乳酸菌菌种和葡萄球菌菌种的量占所述样品中存在的细菌总量的百分比；c.基于所述细菌之间的比率预测成功怀孕的可能性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：迪尔克·扬·郭克，约瑟夫·斯特凡努斯·伊丽莎白·莱文，戴尔杉德·玛玛·马格底德，妮科尔·赫耶尔杰·玛丽亚·贝克尔斯，
申请(专利权)人：鹿特丹伊拉斯谟大学医疗中心，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL