本发明专利技术公开了一种短小芽孢杆菌的培养方法，包括菌种活化，菌种发酵培养，菌种三角瓶培养，发酵罐培养的步骤。通过本发明专利技术所培养的短小芽孢杆菌的蛋白酶活力非常高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，包括菌种活化，菌种发酵培养，菌种三角瓶培养，发酵罐培养的步骤。通过本专利技术所培养的短小芽孢杆菌的蛋白酶活力非常高。【专利说明】
本专利技术属于生物
，具体涉及。
技术介绍
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6—0.7 μ mX 2.0一3.0 μ m,革兰氏阳性。B.pumilus存在半透明型和不透明型两种不同的菌落形态，对两种菌落分别进行传代，半透明菌落能产生半透明和不透明型菌落，且基本各占一半。而不透明菌落在传代过程中只产生少许的半透明菌落，且传至第4代时半透明型菌落消失。主要用于防治小麦根腐病和草莓灰霉病。通过培养短小芽孢杆菌可获得具有蛋白酶活力的菌液，而现有培养短小芽孢杆菌的方法所获得的菌液蛋白酶活力不高。
技术实现思路
为了克服现有
存在的上述缺陷，本专利技术的目的在于，提供一种，解决现有技术 培养短小芽孢杆菌的方法所获得的菌液蛋白酶活力不高的问题。本专利技术提供的，包括以下步骤: 一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37°C培养24h；二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入IOml种子发酵培养基中，37°C培养48h； 三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37°C培养48h； 四、将在三角瓶培养好的菌种接种于IOL种子发酵罐，37°C培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨,Ig酵母膏,0.1g磷酸高铁，20g琼月旨，适量海水经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.6 ;所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na2HPO4,0.1g CaCl2,801ml吐温经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.0 ;所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，IOg 干酪素，Ig KH2PO4 ,0.2 g MgSO4.7Η20，0.I g CaCl2.2H20 经 121°C灭菌 20min配置而成，pH值为7.0。本专利技术提供的，其有益效果在于，通过本专利技术所培养的短小芽孢杆菌的蛋 白酶活力非常高。 【具体实施方式】下面结合一个实施例，对本专利技术提供的进行详细的说明。实施例本实施例的，包括以下步骤: 一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37°C培养24h；二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入IOml种子发酵培养基中，37°C培养48h； 三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37°C培养48h； 四、将在三角瓶培养好的菌种接种于IOL种子发酵罐，37°C培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨,Ig酵母膏,0.1g磷酸高铁，20g琼脂,适量海水经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.6 ;所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na2HPO4,0.1g CaCl2,801ml吐温经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.0 ;所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，IOg 干酪素，Ig KH2PO4 ,0.2 g MgSO4WH2O ,0.1 g CaCl2CH2O 经 121°C灭菌 20min 配置而成，pH值为7.0。经蛋白酶活力检测,短小芽 孢杆菌的酶活力高达8000U/mL。【权利要求】1.一种，其特征在于:包括以下步骤: 一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37°c培养24h； 二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入IOml种子发酵培养基中，37°C培养48h； 三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37°C培养48h； 四、将在三角瓶培养好的菌种接种于IOL种子发酵罐，37°C培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。2.根据权利要求1所述的，其特征在于:所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨，Ig酵母膏，0.1g磷酸高铁，20g琼脂，适量海水经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.6。3.根据权利要求1所述的，其特征在于:所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na2HP04,0.1gCaC12,801ml 吐温经 121°C灭菌 30min 配置而成，pH 7.0o4.根据权利要求1所述的，其特征在于:所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，IOg干酪素，Ig KH2P04 ,0.2 g MgS04*7H20 ,0.1 gCaC12*2H20经121°C灭菌20`min配置而成，pH值为7.0。【文档编号】C12N1/20GK103881942SQ201210561071【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2012年12月21日 【专利技术者】张述智, 夏伟, 朱绍辉, 张 浩, 王晓丽, 徐权汗, 李之详, 许团辉 申请人:青岛中仁药业有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种短小芽孢杆菌的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37℃培养24h；二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入10ml种子发酵培养基中，37℃培养48h；三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37℃培养48h；四、将在三角瓶培养好的菌种接种于10L种子发酵罐，37℃培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张述智，夏伟，朱绍辉，张浩，王晓丽，徐权汗，李之详，许团辉，
申请(专利权)人：青岛中仁药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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