黄曲霉毒素G1酶联免疫检测试剂盒的制备及检测方法技术

本发明专利技术是一种用于检测花生、谷物以及奶制品中黄曲霉毒素G1的酶联免疫检测试剂盒。本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被黄曲霉毒素G1抗原。检测时，加入标准品或样品溶液，黄曲霉毒素G1抗体及酶标记物，包被抗原和加入样本中的黄曲霉毒素G1竞争性地与黄曲霉毒素G1抗体结合，洗去未结合的抗原抗体，已结合的抗原-抗体复合物再与酶标记物结合，洗去未结合的抗原、抗体，经TMB底物显色；加入反应终止液，在450/630nm双波长酶标仪下进行检测，样品中的黄曲霉毒素G1浓度与吸收光强度成反比，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素G1的含量。

【技术实现步骤摘要】

一种检测黄曲霉毒素G1的酶联免疫分析试剂盒及检测方法，属于生物及食品安全检测
，可用于对花生、谷物、奶制品中黄曲霉毒素G1（AFG1）含量的检测。 
技术介绍
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是一种能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。黄曲霉毒素（AFT）目前已发现20 余种，其中黄曲霉毒素B1为毒性及致癌性最强的物质。黄曲霉毒素G1的毒性仅次于黄曲霉毒素B1，是一种强致癌物质。有研究表明，它比AFB1 具有更强的诱发肾脏肿瘤的潜力。它是我国太行山南部食管癌、肺癌高发区（如河北省磁县）居民饮食中的主要污染真菌毒素之一，其检出率和含量均相当高。     黄曲霉毒素G1结构式 黄曲霉毒素超标是我国食品出口频繁遇到的问题，我国每年食品出口因黄曲霉毒素超标而遭受通报扣留屡屡发生。控制黄曲霉毒素在各类食品中的含量越来越受到国家的重视。各国对黄曲霉毒素在食品中的残留限量均有规定。欧盟在委员会条例(EC) No 629/2008、委员会条例(EC) No 1881/2006中对黄曲霉素在花生、谷类、坚果等食品中的限量作出明确规本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测黄曲霉毒素G1的酶联免疫试剂盒，是由96或48孔的包被板（1），黄曲霉毒素G1标准品（2），AFG1‑BSA（3），抗黄曲霉毒素G1的单克隆抗体（4），酶标记的羊抗兔抗体（5），洗涤液（6），显色液A （7），显色液B（8）和终止液（9）所组成。

【技术特征摘要】
1.用于检测黄曲霉毒素G1的酶联免疫试剂盒，是由96或48孔的包被板（1），黄曲霉毒素G1标准品（2），AFG1-BSA（3），抗黄曲霉毒素G1的单克隆抗体（4），酶标记的羊抗兔抗体（5），洗涤液（6），显色液A （7），显色液B（8）和终止液（9）所组成。
2.所述的酶标记的羊抗兔抗体为辣根过氧化物酶标记的抗体冻干品，洗涤液为含有吐温的Tris-HCL缓冲液，显色液A为含有过氧化氢的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，显色液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液，终止液为2 M的硫酸溶液。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中的包被板（1）包被固相抗原，用50 mmol/LpH9.6 Na2CO3-NaHCO3的缓冲液将AFG1-BSA稀释至10 mg/L作为包被液，96孔或48孔微孔板各加入100 μL，37 ℃下避光孵育2 h，弃去包被液，洗涤2次，加入150 μL含3 %BSA的上述Na2CO3-NaHCO3缓冲液封闭，37 ℃下避光孵育1.5 h，弃去封闭液，晾干，板条密封后置-20 ℃冷冻保存。
4.根据权利要求书1所述的试剂盒，其中的黄曲霉毒素G1标准品（2），从AFG1纯品中稀释得到，稀释液为甲醇：水体积比为4：6，共6瓶，AFG1 浓度分别为 0 ng/mL，0.025 ng/mL，0.1 ng/mL，0.25 ng/mL，0.5 ng/mL，1.5 ng/mL。
5.根据权利要求书1所述的试剂盒检测黄曲霉毒素G1的方法，其特征是取包被的有AFG1-BSA的微孔包被板，加入AFG1标准品和处理好的样品到各自的微孔中，加HRP-羊抗兔抗体，再加入AFG1抗体，轻轻振荡反应，洗涤液洗涤，加显色液A...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜道林，王永美，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32