一种产气荚膜梭菌α毒素抗体捕获ELISA检测方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种产气荚膜梭菌α毒素抗体捕获ELISA检测方法
本专利技术涉及动物细菌学领域，本专利技术提供了一种产气荚膜梭菌α毒素抗体捕获ELISA检测方法。
技术介绍
产气荚膜梭菌(C.perfringens)又称魏氏梭菌(C.welchii)，广泛存在于自然环境中，并见于几乎所有温血动物的消化道内，属于人和动物肠道内正常菌群的成员。产气荚膜梭菌能引起羔羊痢疾和羔羊、牛犊、仔猪、家兔、雏鸡的坏死性肠炎、肠毒血症等疾病，发病急、死亡率高，是严重危害养殖业的重要疾病，是近年来我国家畜“猝死症”的主要病原，给各国畜牧业发展带来巨大经济损失。各型产气荚膜梭菌均产生α毒素(CPA)，本菌能引起人类气性坏疽及多种动物的肠毒血症和坏死性肠炎，当家畜被感染后其体内产生α毒素抗体，因此α毒素抗体是诊断产气荚膜梭菌病的重要依据之一。现有技术中小白鼠毒素中和试验是检测产气荚膜梭菌毒素抗体的经典方法,虽然准确可靠,但费时、费工。而卵磷脂水解抑制试验欠敏感,且重复性差,操作繁琐,难于推广应用。近年来随着生物技术的发展，国外已经出现多种检测产气荚膜梭菌毒素抗体的商品检测试剂盒，但价格昂贵，因此为了弥补...
【技术保护点】
一种产气荚膜梭菌α毒素抗体捕获ELISA检测方法，其特征在于：具体步骤为：(1)包被：将上述获得的产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体用抗原包被液稀释到0.3μg/ml,每孔100μL，加入到96孔酶标板，密封4℃过夜；(2)封闭：用PBST洗涤液洗涤上述酶标板3次，每次3min，洗涤完成后，加入含5wt％脱脂奶粉的PBST溶液作为封闭液，每孔200μL，4℃封闭过夜；(3)加抗原：用PBST溶液洗涤上述酶标板3次每次3min并拍干，每孔加入用PBS稀释至2ug/ml的捕获抗原100ul，37℃孵育1h；(4)加待检血清：用PBST溶液洗涤3次每次3min并拍干，每孔加入用PBS缓...
【技术特征摘要】
1.一种产气荚膜梭菌α毒素抗体捕获ELISA检测方法，其特征在于：具体步骤为：(1)包被：将上述获得的产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体用抗原包被液稀释到0.3μg/ml,每孔100μL，加入到96孔酶标板，密封4℃过夜；(2)封闭：用PBST洗涤液洗涤上述酶标板3次，每次3min，洗涤完成后，加入含5wt％脱脂奶粉的PBST溶液作为封闭液，每孔200μL，4℃封闭过夜；(3)加抗原：用PBST溶液洗涤上述酶标板3次每次3min并拍干，每孔加入用PBS稀释至2ug/ml的捕获抗原100ul，37℃孵育1h；(4)加待检血清：用PBST溶液洗涤3次每次3min并拍干，每孔加入用PBS缓冲液以1:160体积比稀释的被检血清，100μL/孔，同时设置阴阳性和空白对照，PBS缓冲液作为空白对照，37℃孵育1h；(5)加二抗：用PBST溶液洗涤3次每次3min并拍干，加入用PBS缓冲液按1:8000体积比稀释的HRP标记的羊抗兔IgG,37℃孵育1h；(6)显色：用PBST溶液洗涤3次每次3min并拍干，最后加入可溶性TMB底物显色液100μL/孔,37℃条件避光反应15min；(7)终止：每孔加100ul2MH2SO4溶液终止反应，450nm处读取吸光值；计算阴性样品平均值与标准差(SD)，求得为阳性临界值，为阴性临界值。运用建立的捕获ELISA方法测定OD450nm，为阳性，为阴性，为可疑样品；其中所述产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体获得方法如下：将产气荚膜梭菌α毒素的杂交瘤细胞株F12，保藏于中国微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号：CGMCCNo.88...
【专利技术属性】
技术研发人员：王海荣，楚国茹，柴同杰，钟召兵，李超，陈勇，林晓佳，王方山，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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