本发明专利技术公开了一种快速检测食品中黄曲霉毒素的新方法，研究食品中黄曲霉毒素的提取、净化及富集新方法，结合高效液相色谱‑在线柱后光化学衍生‑荧光检测器检测食品中黄曲霉毒素。该法采用分散磁固相微萃取与分散液液微萃取技术结合，进行样品中黄曲霉毒素的分离、净化及富集。与现有标准中黄曲霉毒素测方法相比，该法具有检测所用有机溶剂量少，分析时间短，操作简单、检测成本低、准确等特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种快速检测食品中黄曲霉毒素的新方法。属于食品检测领域。
技术介绍
黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素(Aflatoxin,，简称AFT)是20世纪60年代初发现的一种剧毒的真菌代谢产物，主要由黄曲霉菌(Aspergillus flaws)和寄生曲霉菌(Aspergillus parasiticus)等侵染农产品之后产生，是目前已知最强的致癌物之一，毒性极强。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织癌症研究机构划定为一级致癌物。随着国际上和我国黄曲霉毒素污染事件的频频发生，各国在食品领域的监控越来越严格。目前，普遍采用的检测方法包括酶联免疫吸附法(ELASA)、免疫亲和柱－荧光分光光度计法(SFB)、免疫亲和柱－高效液相色谱法(IAC－HPLC)以及HPLC－MS/MS法等。其中高效液相色谱(HPLC)方法测定准确，分辨率高，可同时测定多种黄曲霉毒素成分，完成定性、定量测定而被广泛应用。由于食品样品中含有大量化合物，需要对测量样品进行净化处理以及对毒素进行富集，才能进行检测分析。国家标准GB/T 18979-2003采用的食品中黄曲霉毒素测定的样品
净化方法是免疫亲和柱净化法，采用该方法国标做实验一批检品实验成本约需160元，实验前处理耗时约1.5h完成一批检品。专利技术专利CN 104914196A虽然也进行了改进，用HC-C18+PSA作净化材料，但不明确所用材料，且存在分离困难及净化效果差的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测成本低，样品萃取净化效果好，检测时间短的食品中黄曲霉毒素的测定方法。一种快速检测食品中黄曲霉毒素的新方法，包括以下步骤：(1)食品样品中待测黄曲霉毒素提取液的制备①对于大米、玉米、小麦、花生、核桃、杏仁及其制品提取方法为：准确称取粉碎均质后的样品2～5g，精确至0.0001g，加入体积分数为70～80％的甲醇水溶液20～50mL，剧烈振荡1min，50±2℃水浴超声提取20～30min，以3500～5000r/min离心5～10min，取出上层溶液，重复提取2～3次，合并上清液，待用；②对于酱油、食醋、植物油脂提取方法为：准确称取5.00～10.00g样品，加入2～5g NaCl和体积分数为70～80％的甲醇水溶液20～50mL，涡旋混合1～3min，定量滤纸过滤，准确吸取5.00mL滤液，加入10mL超纯水稀释，混匀，待用。(2)提取液净化往步骤(1)提取液中加入50～100μL离子液体，涡旋混合1～2min，形成均相溶液，加入2～5倍体积的超纯水，加入本专利技术制备的有机酸包覆磁性纳米材料2.0～10.0mg，涡旋混合1～3min，放置10～20min，
外加磁场作用下分离，收集磁性聚合物；加入5～10mL超纯水，涡旋混合1min，外加磁场作用下分离，收集磁性聚合物；加入洗脱剂，涡旋混合1～3min，外加磁场作用下分离，重复2～3次，合并洗脱液，洗脱液经0.45μm滤膜过滤，得到待测样品溶液；(3)测定各取标准工作液和待测样品溶液50μL，在设定的液相色谱条件下进样，采用高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光检测器检测，得到待测样品中黄曲霉毒素含量。步骤(1)所述的有机酸包覆磁性纳米材料的制备包括以下步骤：称取适量二价铁盐和三价铁盐，用100mL去离子水溶解，配制成Fe2+和Fe3+的混合溶液，惰性气体保护下，水浴加热机械搅拌10～15min，加入有机酸的丙酮或甲醇溶液，继续搅拌5min后，再加入沉淀剂浓氨水，同时搅拌30min后，自然冷却至室温；外加磁场作用下固液分离，产物用去离子水/甲醇各洗涤2～3次除去多余的有机酸的丙酮或甲醇溶液，在60～80℃真空干燥24～48h即得有机酸包覆磁性纳米材料。所述的食品样品中待测黄曲霉毒素包括：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。所述的有机酸包覆磁性纳米材料中有机酸为蓖麻油酸、棕榈油酸、油酸、正壬酸、正癸酸中之一种。所述的提取净化中离子液体包括1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐、1-戊基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐、1-己基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐、1-
庚基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐、1-辛基-3-甲基-咪唑六氟磷酸盐之一种。所述的提取净化中洗脱剂为乙腈，用量为0.5～1mL。所述的设定的液相色谱条件为：C18色谱柱(4.6mm×250mm，5.0μm)，流动相甲醇-水(45∶55)，流速1.0mL/min，进样量50μL，柱温箱30℃。检测器为荧光检测器，激发波长360nm，发射波长440nm；高效液相色谱仪(配备荧光检测器)；光化学衍生器。所述的有机酸包覆磁性纳米材料的制备中所述Fe2+和Fe3+的混合溶液中，Fe2+与Fe3+的摩尔比为1:1～5。所述的有机酸包覆磁性纳米材料的制备中所述惰性气体为氮气，机械搅拌速度为600～1000rpm，水浴加热温度为70～85℃。所述的有机酸包覆磁性纳米材料的制备中所述含有机酸的丙酮或甲醇溶具体为，5mL丙酮或甲醇中含100～400μg有机酸，沉淀剂浓氨水的用量为10～20mL。本专利技术采用分散磁固相微萃取与分散液液微萃取技术结合，分散液液微萃取中离子液体及制备的磁性纳米材料对黄曲霉毒素有萃取及吸附的双重作用，使其既有好的萃取效果又有好的净化效果；由于制备材料为纳米级，材料用量少，只需几毫克，成本低廉，只需几元钱；材料具有的超顺磁性，在外加磁场可以快速分离，样品净化时间短，只需几分钟。这些特点都本专利技术所用的技术在黄曲霉毒素测定中具有巨大的优势。本专利技术的优点在于：1.本专利技术采用分散磁固相微萃取与分散液液微萃取技术结合，
分散液液微萃取中离子液体及制备的磁性纳米材料对黄曲霉毒素有萃取及吸附的双重作用，使其既有好的萃取效果又有好的净化效果。2.本专利技术制备的有机羧酸改性磁性纳米材料对黄曲霉毒素有特异性吸附，同时由于比表面大，在使用时用量低，同时洗脱时，先用水洗除极性成分，再用乙腈洗脱黄曲霉毒素，净化效果明显。3.利用制备材料的超顺磁性，用外磁场收集萃取目标物的萃取剂，分离操作简单、快速，有机溶剂用量极小。4.结合高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光检测器检测食品中黄曲霉毒素，检测限低，灵敏度高，加标回收率高。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步地说明，但本专利技术的保护范围并不限于此。实施例1利用本专利技术检测花生中黄曲霉毒素的含量，步骤为：1、有机酸包覆磁性纳米材料的制备：称取4.10g硫酸亚铁铵((NH4)2Fe(SO4)2·6H2O)，13.52g氯化铁(FeCl3·6H2O)，用100mL去离子水溶解后，转到于250mL三颈瓶中，在氮气保护下，水浴加热至80℃，机械搅拌10min(转速为1000rpm)，然后加入5mL含200μL正壬酸的甲醇溶液，继续搅拌5min，加入10mL浓氨水，混合液继续反应30min后，自然冷却至室温后，用外加磁场收集产物弃去反应液，磁性材料用100mL去离子水洗涤2次，100mL甲醇洗涤2次，100mL去离子水洗涤3次，在60℃真空干燥48h即得正壬酸包覆磁性纳米材料。2、取适量黄曲霉毒素对照品储备液，用70％甲醇稀释得浓度分别为0.02、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测食品中黄曲霉毒素的新方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)食品样品中待测黄曲霉毒素提取液的制备①对于大米、玉米、小麦、花生、核桃、杏仁及其制品待测样进行提取方法为：准确称取粉碎均质后的待测样样品2～5g，精确至0.0001g，加入体积分数为70～80％的甲醇水溶液20～50mL，剧烈振荡1min，50±2℃水浴超声提取20～30min，以3500～5000r/min离心5～10min，取出上层溶液，重复提取2～3次，合并上清液，待用；或者②对于酱油、食醋、植物油脂待测样提取方法为：准确称取5.00～10.00g待测样样品，加入2～5g NaCl和体积分数为70～80％的甲醇水溶液20～50mL，涡旋混合1～3min，定量滤纸过滤，准确吸取5.00mL滤液，加入10mL超纯水稀释，混匀，待用。(2)提取液净化往步骤(1)提取液中加入50～100μL离子液体，涡旋混合1～2min，形成均相溶液，加入2～5倍体积的超纯水，加入本专利技术制备的有机酸包覆磁性纳米材料2.0～10.0mg，涡旋混合1～3min，放置10～20min，外加磁场作用下分离，收集磁性聚合物；加入5～10mL超纯水，涡旋混合1min，外加磁场作用下分离，收集磁性聚合物；加入洗脱剂，涡旋混合1～3min，外加磁场作用下分离，重复2～3次，合并洗脱液，洗脱液经0.45μm滤膜过滤，得到待测样品溶液；(3)测定各取标准工作液和待测样品溶液20μL，在设定的液相色谱条件下进样，采用高效液相色谱‑在线柱后光化学衍生‑荧光检测器检测，得到待测样品中黄曲霉毒素含量。...
【技术特征摘要】
1.一种快速检测食品中黄曲霉毒素的新方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)食品样品中待测黄曲霉毒素提取液的制备①对于大米、玉米、小麦、花生、核桃、杏仁及其制品待测样进行提取方法为：准确称取粉碎均质后的待测样样品2～5g，精确至0.0001g，加入体积分数为70～80％的甲醇水溶液20～50mL，剧烈振荡1min，50±2℃水浴超声提取20～30min，以3500～5000r/min离心5～10min，取出上层溶液，重复提取2～3次，合并上清液，待用；或者②对于酱油、食醋、植物油脂待测样提取方法为：准确称取5.00～10.00g待测样样品，加入2～5g NaCl和体积分数为70～80％的甲醇水溶液20～50mL，涡旋混合1～3min，定量滤纸过滤，准确吸取5.00mL滤液，加入10mL超纯水稀释，混匀，待用。(2)提取液净化往步骤(1)提取液中加入50～100μL离子液体，涡旋混合1～2min，形成均相溶液，加入2～5倍体积的超纯水，加入本发明制备的有机酸包覆磁性纳米材料2.0～10.0mg，涡旋混合1～3min，放置10～20min，外加磁场作用下分离，收集磁性聚合物；加入5～10mL超纯水，涡旋混合1min，外加磁场作用下分离，收集磁性聚合物；加入洗脱剂，涡旋混合1～3min，外加磁场作用下分离，重复2～3次，合并洗脱液，洗脱液经0.45μm滤膜过滤，得到待测样品溶液；(3)测定各取标准工作液和待测样品溶液20μL，在设定的液相色谱条件下进样，采用高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光检测器检测，得到待测样品中黄曲霉毒素含量。2.根据权利要求1所述的一种快速检测食品中黄曲霉毒素的新方法，其特征在于步骤(1)所述有机酸包覆磁性纳米材料的制备包括以下步骤：称取适量二价铁盐和三价铁盐，用100mL去离子水溶解，配制成Fe2+和Fe3+的混合溶液，在惰性气体保护下，水浴加热机械搅拌10～15min，加入沉淀剂浓氨水，同时加入有机酸的丙酮或甲醇溶液，搅拌30min后，自然冷却至室温；在外加磁场作用下固液分离，产物用去离子水/甲醇洗...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦扬，杨亚玲，赵娇，
申请(专利权)人：云南健牛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。