The invention discloses a primer, probe and reagent kit and method for detecting transgenic soybean A2704 12. The primer group consists of two specific primers whose nucleotide sequence is shown as SEQ ID No:1-2 and probe sequence is shown as SEQ ID No.3. The detection kit includes detection primers and probe solutions. The detection method is to amplify DNA template of the sample at 37-42 ~C by using specific primers and probes under the action of recombinant enzyme, single stranded DNA binding protein (SSB), strand displacement DNA polymerase and nucleic acid exonuclease. By collecting fluorescent signals of the probe, we can determine whether the sample contains the component of transgenic soybean A2704 12. The invention does not need special instruments, has the characteristics of fast, high efficiency, simple operation, high sensitivity and strong specificity, and is suitable for on-site detection.
【技术实现步骤摘要】
一种检测转基因大豆A2704-12的引物、探针及试剂盒和方法
本专利技术属于分子生物学
,涉及转基因植物及其产品的检测方法,具体为一种利用重组酶聚合酶扩增技术(RecombinasePolymeraseAmplification,RPA)快速检测转基因大豆A2704-12的引物与探针组合、试剂盒和检测方法。
技术介绍
2016年全球转基因作物种植面积高达1.851亿公顷,比1996年商业化初期增长了100余倍。目前商业化种植的转基因作物主要有大豆、玉米、棉花、油菜,其中全球种植面积最大的为转基因大豆,2016年达到9140万公顷,占全球转基因作物总面积的50%。转基因大豆A2704-12是拜耳公司研发的一种抗除草剂转基因大豆,已被我国政府批准进口用作加工原料。针对转基因大豆A2704-12开展快速精准的检测方法研究,是转基因生物安全管理相关法律法规顺利实施的技术支撑和保障。转基因成分检测技术主要分为两大类:一类以外源DNA为检测对象,如PCR、基因芯片等,另一类以外源基因表达的蛋白质为检测对象,如ELISA、免疫试纸条等。在上述方法中,目前PCR技术应用最为广泛,但基于PCR的转基因检测方法需要PCR仪、凝胶成像系统等专业仪器设备,且扩增和产物检测时间较长(约3~4h),难以达到现场快速检测目的,因此,在实际工作中需要一种更加便捷、准确、且适用于现场操作的转基因检测新技术。RPA技术是一种新型的基因扩增技术,主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最 ...
【技术保护点】
1.一种转基因大豆A2704‑12的RPA检测引物,其特征在于,所述的引物包括正向引物F和反向引物R,所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
【技术特征摘要】
1.一种转基因大豆A2704-12的RPA检测引物,其特征在于,所述的引物包括正向引物F和反向引物R,所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示,所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.权利要求1所述的RPA检测引物在检测转基因大豆A2704-12种质资源中的应用。3.一种RPA检测转基因大豆A2704-12种质资源的探针,其特征在于,所述的探针与权利要求1所述的引物配合使用,所述的探针核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。4.一种转基因大豆A2704-12的RPA检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的正向引物F和反向引物R。5.根据权利要求4所述的一种转基因大豆A2704-12的RPA检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求3所述的探针。6.一种转基因大豆A2704-12的RPA检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1)提取待测样品的基因组DNA;2)配制待测样品的RPA检测反应体系:在200μLPCR反应管内加入模板DNA2μL、检测正反...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐俊锋,汪小福,陈笑芸,彭城,徐晓丽,魏巍,
申请(专利权)人:浙江省农业科学院,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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