The invention discloses a combination of RPA detection primers and probes, a reagent kit and a detection method of transgenic rice TT51 1. The primer group consisted of two specific primers. The nucleotide sequence was shown as SEQ ID No:1-2 and the probe sequence was shown as SEQ ID No.3. The detection kit included detection primers and probe solutions, Buffer A, Buffer B and positive controls. Specific primers and probes were used to amplify the DNA template of the sample at 37-42 C under the action of recombinant enzymes, single-stranded DNA binding protein (SSB), strand displacement DNA polymerase and nucleic acid exonuclease. By collecting the fluorescent signals of the probe, the samples were judged to contain TT51_1 of transgenic rice. The invention does not need special instruments, has the characteristics of fast, high efficiency, simple operation, high sensitivity and strong specificity, and is suitable for on-site detection.
【技术实现步骤摘要】
一种检测转基因水稻TT51-1的引物、探针及试剂盒和方法
本专利技术属于分子生物学
,涉及转基因植物及其产品的检测方法,具体涉及一种利用重组酶聚合酶扩增技术(RecombinasePolymeraseAmplification,RPA)快速检测转基因水稻TT51-1的引物与探针组合、试剂盒和检测方法。
技术介绍
转基因抗虫水稻TT51-1品种由华中农业大学研发,目前该品种获得我国农业部颁发的安全证书,同时也获得了在美国的食用许可。针对转基因水稻TT51-1开展快速精准的检测方法研究,是转基因生物安全管理相关法律法规顺利实施的技术支撑和保障。转基因成分检测技术主要分为两大类:一类以外源DNA为检测对象,如PCR、基因芯片等,另一类以外源基因表达的蛋白质为检测对象,如ELISA、免疫试纸条等。在上述方法中,目前PCR技术应用最为广泛,但基于PCR的转基因检测方法需要PCR仪、凝胶成像系统等专业仪器设备,且扩增和产物检测时间较长(约3~4h),难以达到现场快速检测目的,因此,在实际工作中需要一种更加便捷、准确、且适用于现场操作的转基因检测新技术。RPA技术是一种新型的基因扩增技术,主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37℃左右。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应并在链置换DNA聚合酶作用下启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增,被替换的DNA链与SS ...
【技术保护点】
1.一种转基因水稻TT51‑1的RPA检测引物,其特征在于,所述的引物包括正向引物F和反向引物R,所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
【技术特征摘要】
1.一种转基因水稻TT51-1的RPA检测引物,其特征在于,所述的引物包括正向引物F和反向引物R,所述的正向引物F的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示,所述的反向引物R的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.权利要求1所述的RPA检测引物在检测转基因水稻TT51-1种质资源中的应用。3.一种RPA检测转基因水稻TT51-1种质资源的探针,其特征在于,所述的探针与权利要求1所述的引物配合使用,所述的探针核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。4.一种转基因水稻TT51-1的RPA检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的正向引物F和反向引物R。5.根据权利要求4所述的一种转基因水稻TT51-1的RPA检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求3所述的探针。6.一种转基因水稻TT51-1的RPA检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1)提取待测样品的基因组DNA;2)配制待测样品的RPA检测反应体系:在200μLPCR反应管内加入模板DNA2μL、检测正反引物溶液各1...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐俊锋,汪小福,陈笑芸,彭城,徐晓丽,魏巍,
申请(专利权)人:浙江省农业科学院,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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