一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法及试剂盒，通过对金属钌配合物性质进行考察，优化LAMP扩增及荧光检测的条件，最终建立了一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法及相应的试剂盒。利用该检测方法，可以收集到实时荧光曲线，实现样品中特异核酸序列的定性检测，进一步建立标准工作曲线可以实现定量检测，并且通过熔解曲线的分析可以验证扩增反应的特异性和实现多重LAMP检测。本发明专利技术具有灵敏度高、操作简单、快速、准确、适用范围广等特点，可进行大面积推广及应用。

【技术实现步骤摘要】
一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法及试剂盒
本专利技术涉及分子生物学核酸检测领域，具体涉及将金属钌配合物用作环介导等温核酸扩增(LAMP)的实时荧光检测染料，实现对目标核酸的快速、闭管定性和定量分析。
技术介绍
核酸是生命遗传物质的携带者和传递者，在食品安全、环境监测等领域，对核酸分子的检测具有至关重要的作用。环介导等温核酸扩增(loop-mediatedisothermalamplificationofDNA)简称LAMP，是2000年由Notomi等人专利技术的一种核酸扩增技术，该技术主要利用特异性识别靶基因的六个区域的两对引物和具有链置换活性的聚合酶，大大节省反复升降温的时间，实现在恒温条件下高效扩增，其灵敏度和扩增产物量比传统PCR高出1个数量级。由于环介导等温核酸扩增是由两对引物针对靶基因上六个区域进行识别，使其扩增反应具有极高的特异性；BstDNA聚合酶在高温持续链置换扩增反应，大大节省扩增时间，具有高效快速的特点。LAMP产物检测主要分为定性和定量两大类，定性检测较为直观且不需要大型仪器，但无法实现对核酸的定量以及扩增产物假阳性的判断。实时荧光LAMP的基本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：将核酸样品加入到包含有特异性引物的实时荧光LAMP反应体系中，以金属钌配合物作为所述实时荧光LAMP反应体系中的染料组分；以核酸样品作为所述实时荧光LAMP反应体系中的扩增模板组分，按预设的反应程序进行实时荧光LAMP的扩增反应和熔解反应，反应结束后分析扩增曲线和熔解曲线，根据循环阈值定性判别核酸样品中是否存在扩增的靶序列，并根据熔解温度识别非特异扩增产物及区分不同的扩增靶序列。

【技术特征摘要】
1.一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：将核酸样品加入到包含有特异性引物的实时荧光LAMP反应体系中，以金属钌配合物作为所述实时荧光LAMP反应体系中的染料组分；以核酸样品作为所述实时荧光LAMP反应体系中的扩增模板组分，按预设的反应程序进行实时荧光LAMP的扩增反应和熔解反应，反应结束后分析扩增曲线和熔解曲线，根据循环阈值定性判别核酸样品中是否存在扩增的靶序列，并根据熔解温度识别非特异扩增产物及区分不同的扩增靶序列。2.根据权利要求1所述一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括以下步骤：以核酸样品拷贝数不同的多个标准品以及未知拷贝数的核酸样品分别作为所述实时荧光LAMP反应体系中的扩增模板组分，按所述反应程序分别进行针对标准品中特定靶序列片段的扩增反应，反应结束后根据各标准品的循环阈值绘制标准曲线，根据所述标准曲线以及未知拷贝数的核酸样品的循环阈值计算该样品的核酸拷贝数。3.根据权利要求1或2所述一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于：所述金属钌配合物在实时荧光LAMP反应体系中的浓度为0.5-5μM。4.根据权利要求1或2所述一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于：所述金属钌配合物选自[Ru(bpy)2(dppz)]2+，或选自对钌多吡啶配合物的配体进行结构修饰获得的其它具有核酸分子光开关行为的金属钌配合物中的一种。5.根据权利要求1或2所述一种基于金属钌配合物的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于：所述扩增反应中，利用一定的荧光通道采集信号，荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐秦峰，董菁，景烨，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61