一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增核酸检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增核酸检测方法，包括如下步骤：S1.根据目标核酸序列设计特异性扩增引物和带有切刻酶识别位点的Taqman探针；S2.将样本核酸经酶处理得到单链目标核酸模板；S3.将S1所得Taqman探针与S2所得单链目标核酸模板特异性结合，得到特异性结合产物，使用切刻酶酶切特异性结合产物，并实时检测荧光信号。本发明专利技术将解旋酶与切刻酶联合使用，设计带有切刻酶切割位点的Taqman探针，无需扩增出大量核酸产物，只需要产生适量单链模板，然后用切刻酶不断切割与靶位点结合的探针即可进行检测，可以避免等温扩增容易造成实验室污染的缺点，操作简便、快速，适用于现场快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增核酸检测方法及试剂盒
本专利技术涉及分子生物学核酸检测
，具体地，涉及一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增核酸检测方法及试剂盒。
技术介绍
核酸检测技术已广泛应用于食品检测、环境检测及疾病的预防和控制等方面。其中聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)的高灵敏度使其成为目前使用最广泛的DNA扩增方法，然而现有的常规PCR技术需要反复的热变性以解开DNA双链，在应用上依赖于高质量的热循环，且扩增效果易受多因素影响、反应时间长等。等温扩增技术是核酸体外扩增技术，其反应过程始终维持在恒定的温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物来达到快速核酸扩增的目的。等温扩增技术对仪器要求大大简化，反应时间相比PCR技术大大缩短，且特异性高、成本低廉，更能满足快速检测的需求。常用的核酸等温扩增技术有环介导等温扩增技术(LAMP)、链置换扩增(SDA)、依赖解旋酶的等温扩增技术(HAD)、滚环扩增技术(RCA)等。环介导的恒温扩增(LAMP)法虽然扩增效率高，特异性强，但是该方法对引物设计的要求特别高，引物设计复杂，需要四条能够识别靶序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.根据目标核酸序列设计特异性扩增引物和带有切刻酶识别位点的Taqman探针；S2.将样本核酸经酶处理得到单链目标核酸模板；S3.将S1所得Taqman探针与S2所得单链目标核酸模板特异性结合，得到特异性结合产物，使用切刻酶酶切特异性结合产物，并实时检测荧光信号。

【技术特征摘要】
1.一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.根据目标核酸序列设计特异性扩增引物和带有切刻酶识别位点的Taqman探针；S2.将样本核酸经酶处理得到单链目标核酸模板；S3.将S1所得Taqman探针与S2所得单链目标核酸模板特异性结合，得到特异性结合产物，使用切刻酶酶切特异性结合产物，并实时检测荧光信号。2.根据权利要求1所述等温扩增核酸检测方法，其特征在于，步骤S2所述酶为解螺旋酶、链置换酶、重组酶中的一种或多种。3.根据权利要求2所述等温扩增核酸检测方法，其特征在于，步骤S2所述酶为UvrD解旋酶和链置换DNA聚合酶。4.根据权利要求1所述等温扩增核酸检测方法，其特征在于，步骤S2所述酶为逆转录酶和RNaseH。5.根据权利要求2或3所述等温扩增核酸检测方法，其特征在于，所述步骤S2中通过将特异性扩增引物与单链目标核酸模板结合，在聚合酶和步骤S2所述酶交替作用下使得单链目标核酸模板不断扩增。6.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述检测的条件为反应温度50～60℃，检测时间90min。7.一种基于解旋酶和切刻酶的等温扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞，陈杰，
申请(专利权)人：深圳市赛哲生物有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44