本发明专利技术公开了与大豆抗疫病基因RpsQ紧密连锁的分子标记Insert144，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，该分子标记与大豆抗疫病基因RpsQ的遗传距离为0cM。检测分析表明该分子标记能准确跟踪所述大豆抗疫病基因RpsQ，预测大豆的抗疫病特性，进而方便进行分子设计育种。本发明专利技术还公开了一种鉴定大豆抗疫病基因RpsQ的方法，利用本发明专利技术所提供的方法可以实现对大豆抗疫病植株的快速鉴定检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业生物技术工程和农作物抗病遗传育种领域，具体涉及一种大豆抗 疫病基因RpsQ的分子标记Insertl44及其应用。
技术介绍
由大豆疫霉（PhytophthorasojaeKaufmann&Gerdemann)引起的大豆疫病是大豆 生产中的一种毁灭性病害。目前全世界每年因大豆疫病造成的经济损失大约为10亿美元 (Tyler,2007)〇 防治大豆疫病最为经济、有效且环境安全的方法是种植抗病品种。大豆对疫病的 抗性表现为质量性状抗性和数量性状抗性。质量性状抗性由单基因控制。目前已经有25 个抗性基因被定位到不同的染色体上。 大豆疫霉群体结构复杂，容易产生新的毒力型。大豆疫霉新毒力型的出现，导致单 基因抗性品种的抗性丧失。大量研究表明，大豆抗疫病被克服的速度正在加快。通常单基 因抗性品种的使用年限为8-15年，为了延长抗病品种的使用年限，育种策略是将不同的抗 性基因叠加，因此大力挖掘和鉴定新的抗性基因显得尤为必要。 大豆品种齐茶豆1号是山东省农业科学院作物研究所1995年审定通过的品种，原 代号济3045。该品种通过以鲁豆4号为母本，北京小黑豆为父本杂交选育而成，高抗大豆孢 囊线虫1、3号小种，抗病毒病，抗倒伏。前期研究结果表明，齐茶豆1号对大豆疫霉有广谱 的抗性。因此，为能够进一步验证和利用大豆品种齐茶豆1号的抗疫病特性，定位抗疫病基 因对提高育种效率和推进大豆抗疫病工作具有重要意义。 分子标记辅助检测，不依赖于表现型选择，即不受环境条件、基因间互作、基因型 与环境互作等多种因素的影响，而是直接对基因型进行选择，因而能大大提高大豆抗疫病 基因的检测效率，可见开发与齐茶豆1号抗疫病基因共分离的分子标记对提高育种效率， 加速抗疫病育种工作进程具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与大豆抗疫病基因RpsQ共分离的分子标记及其应 用。 为达到以上目的，本专利技术提供了 一种大豆抗疫病基因RpsQ的分子标记 Insertl44,其核苷酸序列如SEQIDNo. 1所示。 所述分子标记位于大豆3号染色体的SSR标记BARCS0YSSR_03_0165 (0. 6cM)和 BARCS0YSSR_03_0176(0. 9cM)之间。所述分子标记与大豆抗疫病基因RpsQ的遗传距离为 0cM〇 具体地，本专利技术中与大豆抗疫病基因RpsQ共分离的分子标记Insertl44通过如下 方法获得： 利用吉科豆2号X齐茶豆1号杂交组合衍生的F2:3为作图群体，研究齐茶豆1号 对大豆疫病抗性的遗传基础；利用已公布的大豆SSR标记，筛选在亲本和抗、感池上都具有 多态性的分子标记，将具有多态性的SSR标记进行群体验证并构建连锁图谱；利用定位区 间预测的候选基因序列，设计特异引物在吉科豆2号和齐茶豆1号上扩增测序，开发InDel 标记，并进行群体验证，获得与抗疫病基因RpsQ共分离的标记。从而为大豆抗疫病育种提 供辅助选择分子标记，提高育种效率，加速抗疫病育种工作进程。 本专利技术还提供了分子标记InSertl44的PCR引物，其中，上游引物序列如SEQID No. 2所示，下游引物序列如SEQIDNo. 3所示。 本专利技术还提供了一种鉴定大豆抗疫病基因RpsQ的方法，其中，以待测植株样品的 基因组DNA作为模板，用本专利技术所述的PCR引物进行PCR扩增，能扩增出SEQIDNo. 1所示 片段的植株样品为含有大S抗疫病基因RpsQ的植株。 可选的，所述方法包括以下步骤： 1)提取待测大?的基因组DNA; 2)以待测大豆的基因组DNA为模板，利用所述PCR引物进行PCR扩增反应； 其中，PCR扩增反应使用的扩增体系以10μ1计为：0. 5μ1浓度为50ng/μ1的大 豆基因组DNA模板，4μ1的2XPCRMasterMix，浓度为ΙΟμΜ的上、下游引物各0. 2μ1，用 ddH20 补足至 10μ1。 PCR扩增反应使用的反应条件为：94°C3分钟；94°C30秒，58°C30秒，72°C30秒， 共35个循环；72°C10分钟。 3)结果鉴定：能扩增出SEQIDNo. 1所示片段的植株样品为含有大豆抗疫病基因 RpsQ的植株。 其中，SEQIDNo. 1所示片段的的长度为581bp，如果能够扩增出581bp的产物，那 么判定待测的大?样品为抗疫病大?品种。 本专利技术还提供了用于PCR检测抗疫病大豆的试剂盒，所述试剂盒中含有权利要求 3所述的PCR引物。 可选的，所述试剂盒还包括dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg'PCR反应缓冲液和标准阳 性模板中的一种或多种。 本专利技术还提供了所述分子标记Insert144在鉴定抗疫病大豆品种中的应用。 本专利技术还提供了所述分子标记Insertl44在制备转基因植物中的应用，其中，所 述基因为大豆抗疫病基因RpsQ。 本专利技术还提供了所述鉴定大豆抗疫病基因RpsQ的方法在大豆育种改良中的应 用。 本专利技术首次公开了来自大豆品种齐茶豆1号的大豆抗疫病基因RpsQ，该基因位于 大豆3号染色体，该基因在大豆抗疫病育种中具有较高的应用价值。本专利技术还给出了RpsQ 的分子标记Insertl44,该分子标记与大豆抗疫病基因RpsQ极显著相关，呈共分离标记特 征，用于分子标记辅助选择的准确性高，可以实现对大豆抗疫病植株的快速鉴定检测。【附图说明】 图1为本专利技术实施例1中齐茶S1号和吉科S2号接种大疫霉菌株Ps41_l后 6天生长情况。 图2为本专利技术实施例1中大豆抗疫病基因RpsQ遗传连锁图谱。【具体实施方式】 以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例 中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。 实施例1 实施例1用于说明大豆抗疫病基因RpSQ的候选基因及其共分离的分子标记 Insertl44的获得 1、齐茶豆1号的抗性遗传分析 以抗病品种齐茶豆1号（山东省农业科学院作物研究所1995年审定通过的品种， 原代号济30)为父本，感病品种吉科豆2号（吉林省农业科学院生物技术室皂角DNA导入 吉林30号品种，从后代选出变异株，培育而成）作为母本，杂交产生匕代，Fi代自交产生F2 代，F2代自交产生的210个F2:3家系用作抗性遗传分析、抗病基因鉴定及作图群体。采用下 胚轴创伤接种方法，将每个家系鉴定20-25个植株对大豆疫霉菌株Ps41-1的反应。接种后 在23-25Γ，湿度为100%的条件下，保湿48小时，然后传入温室培养，7天后进行病情调查 (结果如图1所示）。参照Gordon等（2006)方法评价标准，规定植株死亡率小于20%的家 系为纯合抗病家系，死亡率大于80 %的为纯合感病家系，而死亡率为21% -79 %的家系为 抗性分1?家系，调查F2:3家系的抗、分尚、感病家系的分尚比，分析齐茶1号对大S疫病的 抗性遗传规律。 吉科豆2号和齐茶豆1号杂交组合衍生的210个F2:3家系对菌株Ps41_l的抗性 鉴定结果表明，纯合抗病家系为49个，纯合感病家系为49个，抗性分离家系为112个。经 X2检验符合期望的1:2:1的分离比例，表明齐茶豆1号对大豆疫病的抗性由一个显性单基 因控制，将该基因命名为RpsQ。 2、大豆基因组本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大豆抗疫病基因RpsQ的分子标记Insert144，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱振东，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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