一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及酶联免疫技术领域，公开了一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒及其制备方法。本发明专利技术所述组合物包括封闭液和酶标稳定稀释液；所述封闭液含有BSA、甜菜碱、甘露醇、叠氮钠、磷酸氢二钠和柠檬酸，所述酶标稀释液含有Tris、柠檬酸、BSA、阿拉伯树胶、甜菜碱和Proclin300。本发明专利技术从酶联免疫试剂盒的封闭液和酶标稀释液入手，通过选择适宜成分，使得酶联免疫试剂盒能够较长时间保持检测的稳定性。同时，以所述组合物制备的幽门螺旋杆菌检测试剂盒在具有较佳稳定性的基础上，还能够对不同亚型的幽门螺旋杆菌分型，具备较高的敏感性和特异性。

Composition for enzyme linked immunosorbent kit and detection kit for Helicobacter pylori antibody spectrum and preparation method thereof

The invention relates to the field of enzyme linked immune technology, and discloses a composition for the ELISA kit and a kit for detecting the antibody spectrum of Helicobacter pylori and the preparation method. The composition comprises a closed liquid and an enzyme labeled stable diluent; the closed liquid contains BSA, betaine, mannitol, sodium azide, sodium hydrogen phosphate two and citric acid, and the diluents of the enzyme label contain Tris, citric acid, BSA, Arabia gum, betaine and Proclin300. The invention starts with the sealing solution of the ELISA box and the diluent of the enzyme label, and by selecting the suitable component, the ELISA kit can keep the stability of the detection for a long time. At the same time, on the basis of better stability, the Helicobacter pylori detection kit prepared by the composition can also have high sensitivity and specificity for the typing of different subtypes of Helicobacter pylori.

【技术实现步骤摘要】
一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及酶联免疫
，具体涉及一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是一种定植于胃黏膜的病原菌，世界范围内约有高达50-70％的感染率。该菌可以引发多种消化道疾病，而且可能与某些消化道以外的疾病有着某种联系，如贫血、消化不良和一些自身免疫疾病。H.pylori致病力和致癌性取决于其毒力因子，目前已知的毒力因子主要有细胞毒素相关蛋白A(CytotoxinassociatedproteinA,CagA)、空泡毒素A(VacuolatingtoxinA，VacA)、尿素酶A(UreaseA，UreA)、尿素酶B(UreaseB,UreB)、热休克蛋白60(HeatShockProtein60,HSP60)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,gGT)、鞭毛钩相关蛋白(Flagellarhook-associatedprotein2,FliD)、高温热激需求蛋白(HightemperaturerequirementA,HtrA)、幽门螺杆菌鞭毛粘附素(helicobacterpyloriadhesin,HpaA)、细胞转运蛋白激酶(Celltranslocatingkinase，CtkA)、中性白细胞激活蛋白(Neutrophil-activatingprotein,NapA)、假设蛋白(HP231)，胃癌相关因子(JHP940)，外膜蛋白(Omp)，富含半胱氨酸蛋白C(HcpC)，过氧化氢酶(Catalase)，依赖铁的载体转运蛋白(TonBProtein)。但并非所有H.pylori都存在上述毒力因子，而不同H.pylori菌株所具有的不同的毒力因子及数量也决定了菌株本身的毒力和致病力及致癌风险，已有的研究结论表明CagA、VacA和GroEL(HSP60)为识别患者感染高风险H.pylori菌株的潜在标志物，与胃癌的发生有关，能够作为一项H.pylori胃癌发生风险分层指标。携带有不同毒力因子的H.pylori菌株感染导致机体产生针对不同的毒力因子的相应抗体，因此分析感染者血清中的抗体构成及滴度，有助于反映感染者所感染的H.pylori菌株所具有的毒力因子种类和数量，从而预测H.pylori的毒力和致病力以及临床后果，选择适宜的治疗方案，体现精准医疗的精神，降低治疗风险及费用。针对幽门螺杆菌的诊断已经有许多的临床检测方法，包括侵入性和非侵入性。但无论是哪一种方法，都只能诊断幽门螺杆菌感染的存在与否，对于H.pylori的分类、毒力判断、临床后果预测以及治疗方案的制定都无法提供进一步的帮助，而临床迫切需要一种方便、快捷、准确、敏感的检测方法不仅可以确定H.pylori感染，还可以判断H.pylori感染的类型、毒力强弱以及致病、致癌风险，从而更有效和精准地指导治疗和进行预后判断。ELISA(酶联免疫吸附试验)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法，是酶免疫测定技术中应用最广的技术。中国专利CN102721815A提供了一种幽门螺旋杆菌毒力蛋白抗体检测试剂盒，其基于ELISA原理，以6种幽门螺旋杆菌毒力蛋白作为抗原对患者血清进行检测，以此判断菌株毒力强弱和实现半定量检测。但是，该试剂盒的稳定性并不好，这也是所有类型酶联免疫试剂盒所面临的共同问题，此外，该试剂盒仍然无法区分各亚型的幽门螺旋杆菌，检测特异性和敏感性也不尽如人意。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，使得所述组合物用于制备酶联免疫试剂盒时能够显著提高试剂盒在低温和室温下的稳定性，保存时间延长；本专利技术的另外一个目的在于提供上述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用，特别是用于检测幽门螺旋杆菌的相关试剂盒；本专利技术的另外一个目的在于提供一种包含上述组合物的幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒及其制备方法，使得所述试剂盒在低温和室温下具有较长时间的稳定性，同时检测结果具有较高的特异性和敏感性。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有BSA、甜菜碱、甘露醇、叠氮钠、磷酸氢二钠和柠檬酸，所述酶标稀释液含有Tris、柠檬酸、BSA、阿拉伯树胶、甜菜碱和Proclin300。针对现有酶联免疫试剂盒稳定较差、保存时间较短的缺陷，本专利技术意外发现了从制备试剂盒的封闭液和酶标稀释液(用于稀释酶标抗原或抗体用)入手，通过选择合适的组分完善两者的组成，能够显著提高酶联免疫试剂盒的稳定性和保存时间。作为优选，所述封闭液含有0.6％-1％BSA，0.8％-1.5％的甜菜碱、0.8％-1.5％甘露醇、0.02％叠氮钠、0.01M磷酸氢二钠和1.5％-2.5％柠檬酸，pH值为7.4，余量为水，所述百分比为质量百分比(w/v)；在本专利技术具体实施方式中，所述封闭液含有0.9％BSA，1％的甜菜碱、1％甘露醇、0.02％叠氮钠、0.01M磷酸氢二钠和2％柠檬酸，pH值为7.4，余量为超纯水。作为优选，所述酶标稀释液含有0.1M的Tris、0.05M的柠檬酸、2％-3％的BSA、1.8％-2.4％的阿拉伯树胶、0.8％-1.5％的甜菜碱以及0.05％的Proclin300，余量为水，所属百分比中除Proclin300是体积百分比之外，其余都是质量百分比(w/v)；在本专利技术具体实施方式中，所述酶标稀释液含有0.1M的Tris、0.05M的柠檬酸、2.5％的BSA、2％的阿拉伯树胶、1％的甜菜碱以及0.05％的Proclin300。本专利技术利用上述组合物进行幽门螺旋杆菌酶联免疫试剂盒的制备，与采用常规的封闭液和酶标稀释液幽门螺旋杆菌酶联免疫试剂盒相比，在低温(2-8℃)下，本专利技术试剂盒在放置24个月后仍然能够保持制备完成时的稳定性，而对照的试剂盒在放置18个月后就已经出现很大程度的不稳定性；在室温(18-28℃)下，本专利技术试剂盒在放置12个月后仍然能够保持制备完成时的稳定性，而对照的试剂盒在放置6个月后就已经出现很大程度的不稳定性。基于上述优异的技术效果，本专利技术提出了所述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用，特别是在制备幽门螺杆菌酶联免疫检测试剂盒中的应用。同时，本专利技术还提供一种幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒，包括以下组分：包被有幽门螺旋杆菌毒力蛋白抗原的蛋白芯片、用酶标稀释液稀释的酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液；其中，所述蛋白芯片包被幽门螺旋杆菌毒力蛋白抗原后采用封闭液封闭，所述封闭液含有BSA、甜菜碱、甘露醇、叠氮钠、磷酸氢二钠和柠檬酸，所述酶标稀释液含有Tris、柠檬酸、BSA、阿拉伯树胶、甜菜碱和Proclin300，所述封闭液和酶标稀释液与前述组合物方案相同。作为优选，所述幽门螺旋杆菌毒力蛋白抗原选自CagA、VacA、UreA、UreB、HSP60、gGT、FliD、HtrA、HpaA、CtkA、NapA、HP231，JHP940，Omp，HcpC，Catalase，TonB中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，其特征在于，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有BSA、甜菜碱、甘露醇、叠氮钠、磷酸氢二钠和柠檬酸，所述酶标稀释液含有Tris、柠檬酸、BSA、阿拉伯树胶、甜菜碱和Proclin300。

【技术特征摘要】
1.一种用于酶联免疫试剂盒的组合物，其特征在于，包括封闭液和酶标稀释液；所述封闭液含有BSA、甜菜碱、甘露醇、叠氮钠、磷酸氢二钠和柠檬酸，所述酶标稀释液含有Tris、柠檬酸、BSA、阿拉伯树胶、甜菜碱和Proclin300。2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述封闭液含有0.6％-1％BSA，0.8％-1.5％的甜菜碱、0.8％-1.5％甘露醇、0.02％叠氮钠、0.01M磷酸氢二钠和1.5％-2.5％柠檬酸，pH值为7.4，余量为水。3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述酶标稀释液含有0.1M的Tris、0.05M的柠檬酸、2％-3％的BSA、1.8％-2.4％的阿拉伯树胶、0.8％-1.5％的甜菜碱以及0.05％的Proclin300，余量为水。4.权利要求1-3任意一项所述组合物在制备酶联免疫试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒为幽门螺杆菌酶联免疫检测试剂盒。6.一种幽门螺旋杆菌抗体谱检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被有幽门螺旋杆菌毒力蛋白抗原的蛋白芯片、用酶标稀释液稀释的酶标抗体、样品稀释液、洗涤液和显色液；其中，所述蛋白芯片包被幽门螺旋杆菌毒力蛋白抗原后采用封闭液封闭，所述封闭液含有BSA、甜菜碱、甘露醇、叠氮钠、磷酸氢二钠和柠檬酸，所述酶标稀释液含有Tris、柠檬酸、BSA、阿拉伯树胶、甜菜碱和Proclin300。7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述封闭液含有0.6％-1％BSA，0.8％-1.5％的甜菜碱、0.8％-1.5％甘露醇、0.02％叠氮钠、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪涛，张永顶，马伟民，
申请(专利权)人：深圳市伯劳特生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44