本公开提供了包含部分成熟且经最佳活化的树突细胞的细胞群，其可用于施用于患有癌症和/或肿瘤的个体。部分成熟的树突细胞，即那些与树突细胞成熟剂接触了约10至约19小时的树突细胞，给药后在肿瘤部位区域有效提呈和处理肿瘤抗原，完成成熟化，随后可以迁移到被治疗的个体的淋巴结。一旦进入淋巴结，现已完全成熟的抗原呈递树突细胞分泌合适的细胞因子(例如TNFα、IL‑6、IL‑8和/或IL‑12)并接触T细胞，诱导实质性且最佳的临床和/或抗肿瘤免疫应答。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱发改善的或增加的抗肿瘤免疫应答的经最佳活化的树突细胞
技术介绍
抗原呈递细胞(antigenpresentingcells，APC)在引发有效的免疫应答中是重要的。它们不仅将抗原呈递给具有抗原特异性T细胞受体的T细胞，而且还提供T细胞活化所必需的信号。APC既呈递抗原又传递T细胞活化信号的能力通常被称为辅助细胞功能。虽然单核细胞和B细胞已被证明是有能力的(competent)APC，但其体外抗原呈递能力似乎仅限于先前致敏过的T细胞的再激活。因此，单核细胞和B细胞不能直接激活功能上初始的或未接触过抗原的T细胞群体，它们也不能传递可以使诱导的免疫应答或者诱导时产生的免疫应答极化的信号。树突细胞(dendriticcells，DC)是免疫系统中专门呈递抗原的细胞，其被认为能够激活初始和记忆T细胞。越来越多的树突细胞在体外被制备以用于免疫治疗，特别是癌症的免疫治疗。制备具有最佳免疫刺激性质的树突细胞需要理解和利用它们在体外培养的生物性质。已经描述了多种各自具有不同优点的用于培养这些细胞的方案。树突细胞的活化启动将表型类似于皮肤朗格汉斯(Langerhans)细胞的未成熟DC转化为成熟的可以迁移到淋巴结的抗原呈递细胞的过程。这个过程导致了表征未成熟树突细胞的强大的抗原提呈(antigenuptake)能力循序渐进的丧失，以及共刺激细胞表面分子和各种细胞因子的表达的上调。多种刺激可以启动DC的成熟。这个过程是复杂的，并且，取决于所使用的树突细胞成熟剂，至少单核树突细胞(monocyticdendriticcell)在体外的完全成熟可能需要长达48小时才能完成。成熟的另一个后果是细胞体内迁移性质的改变。例如，诱导未成熟树突细胞成熟则诱导了几种趋化因子受体，包括CCR7，其将细胞引导到引流淋巴结的T细胞区域，在此区域中，在I类和II类MHC分子存在的情况下，成熟的DC针对呈递于DC表面上的抗原活化T细胞。术语“活化/激活(activation)”和“成熟/成熟化(maturation)”以及“经活化的/经激活的(activated)”和“成熟的(mature)”描述了诱导和完成从未成熟DC(部分特征为提呈抗原(takeupantigen)的能力)到成熟DC(部分特征为有效刺激新生T细胞应答的能力)的过程。这些术语在本领域中通常可互换使用。已知的成熟方案基于其中据信在暴露于抗原期间或之后遭遇DC的体内环境。这种方法的早期示例是使用单核细胞条件培养基(MCM)作为细胞培养基。在体外培养单核细胞以产生MCM，并将其用作成熟因子的来源。(参见例如US2002/0160430，通过引用并入本文。)据报道，(促)炎性细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)是MCM中负责成熟的主要成分。因此，DC的成熟可以通过许多不同因子触发或启动，所述因子通过许多信号转导途径发挥作用。所以不存在单一的成熟途径或结果，而实际上DC的成熟有许多不同阶段，每个阶段都有其自己独特的功能特征。从概念上讲，这是有道理的，因为免疫系统需要不同的攻击策略来对身体面临的多方面的各种威胁做出应答。例如，尽管细菌感染最好通过补充有特异性抗体的活化巨噬细胞来清除，但病毒感染最好通过有效杀死病毒感染细胞的细胞毒性T细胞来攻击。杀死癌细胞通常涉及细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞和抗体的组合。因此可以设计DC的体外成熟以诱导免疫系统偏好一种类型的免疫应答超过另一种，即使得免疫应答极化。DC的定向成熟(directionalmaturation)描述了如下概念，即成熟过程的结果指示了经成熟的DC治疗所得的接踵而至的免疫应答的类型。在其最简单的形式中，定向成熟导致DC群体产生细胞因子，所述细胞因子引导了极化为Th1型或Th2型免疫应答的T细胞应答。DC表达多达9种不同的Toll样受体(TLR1至TLR9)，其中每一种都可以用于触发成熟。毫不意外的，细菌产物与TLR2和TLR4的相互作用导致DC的定向成熟，导致对于处理细菌感染最为适宜的极化反应。相反，通过TLR7或TLR9触发的成熟似乎导致更多的抗病毒类型反应。作为另一个示例，在大多数成熟方案中加入干扰素γ(IFN-γ)导致成熟DC产生白细胞介素12，这指示了Th1型免疫应答。相反，包含前列腺素E2具有相反的效果。完全成熟的树突细胞与未成熟的DC在定性和定量上不同。一旦完全成熟，DC表达更高水平的MHCI类和II类抗原，以及更高水平的T细胞共刺激分子，例如CD80和CD86。这些改变增加了树突细胞活化T细胞的能力，因为它们增加了细胞表面上的抗原密度，以及通过T细胞上的共刺激分子的对应物(例如CD28等)的T细胞激活信号的幅度。另外，成熟DC产生大量细胞因子，刺激和极化T细胞应答。这些细胞因子包括与Th1型免疫应答有关的白细胞介素12和与Th2型免疫应答有关的白细胞介素-10和白细胞介素-4。通常用于离体产生DC的方法包括：由受试者获得富含DC前体细胞的细胞群，然后在体外将DC前体细胞分化成完全成熟的DC，再将完全成熟的DC回输至受试者。通常在该过程中，成熟中的DC与抗原接触以提呈并随着DC成熟而处理抗原。有些人认为DC必须终末分化(terminallydifferentiated)，否则会分化回单核细胞/巨噬细胞，从而失去大部分免疫增强能力。用单核细胞产生的DC的离体成熟已经用本领域熟知的方法和试剂成功完成。树突细胞(DC)被认为是癌症主动免疫治疗的选择载体。动物实验已经证实了基于DC的免疫疗法在保护小鼠免于肿瘤形成和消除已存在的肿瘤中的潜力。在小型临床试验于人类中至少部分地重复了这些成功。如上所述，DC制备的繁琐性质阻碍了其从小规模的安全性或概念证明实验转变为可以证明其活性或功效的大型实验。因此，尽管这些产品具有巨大的潜在治疗价值，但很少有公司对开发基于DC的癌症疫苗感兴趣。DC的瘤内(Intratumoral，IT)注射是基于DC的免疫疗法的特殊形式。在注射后，DC从体内(例如凋亡或濒临死亡的肿瘤细胞)提呈抗原，并在迁移到淋巴结后将抗原呈递(present)给T细胞。事实上，发现这种治疗在动物模型中的功效与肿瘤的凋亡程度相关(Candido等人，CancerRes.61:228-236,2001)，这表明这种方法与在注射DC之前用化学治疗剂或辐射治疗肿瘤完全兼容。此外，几个研究小组已经证实，这样的联合疗法对于已存在的肿瘤是特别有效的(Nikitina等人，Int.J.Cancer94:825-833,2001；Tanaka等人，Int.J.Cancer101:265-269,2002；Tong等，CancerRes.61:7530-7535,2001)。由于体内肿瘤细胞是抗原的来源，所以IT注射不需要肿瘤抗原的选择和制造，即使它们目前用于大多数基于体外DC的治疗方法中。肿瘤抗原的选择通常是由公司取得专利权地位(proprietaryposition)的需求所驱动，并且迄今为止鉴定的少数肿瘤抗原尚未被证明具有显著的临床益处。另外，使用这样的肿瘤抗原经常导致单价疫苗，如果肿瘤细胞下调免疫中使用的抗原的表达，则其会丧失效力。当然，在良好生产规范(GMP)要求的条件下生产肿本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于生产分离的部分成熟且经最佳活化的人树突细胞的方法，包括：i)从外周血分离包含人PBMC的细胞群；ii)使所述包含人PBMC的细胞群富含人单核树突细胞前体；iii)用补充有有效量的树突细胞分化剂的组织培养基培养富含人单核树突细胞前体的细胞群，培养的时间足以使人单核树突细胞前体分化成未成熟的人树突细胞；iv)用有效量的树突细胞成熟剂培养富含未成熟的人树突细胞的细胞群约10至约19小时，以活化所述未成熟的人树突细胞；和v)分离并清洗经活化的人树突细胞。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.30 US 62/187,0861.用于生产分离的部分成熟且经最佳活化的人树突细胞的方法，包括：i)从外周血分离包含人PBMC的细胞群；ii)使所述包含人PBMC的细胞群富含人单核树突细胞前体；iii)用补充有有效量的树突细胞分化剂的组织培养基培养富含人单核树突细胞前体的细胞群，培养的时间足以使人单核树突细胞前体分化成未成熟的人树突细胞；iv)用有效量的树突细胞成熟剂培养富含未成熟的人树突细胞的细胞群约10至约19小时，以活化所述未成熟的人树突细胞；和v)分离并清洗经活化的人树突细胞。2.用于生产分离的部分成熟且经活化的人树突细胞的方法，包括：i)分离包含人单核树突细胞前体的细胞群；ii)用补充有有效量的树突细胞分化剂的组织培养基培养富含人单核树突细胞前体的细胞群，培养的时间足以使人单核树突细胞前体分化成未成熟的人树突细胞；iii)用有效量的树突细胞成熟剂培养富含未成熟的人树突细胞的细胞群约10至约19小时，以活化所述未成熟的人树突细胞；和iv)分离并清洗经活化的人树突细胞。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述单核树突细胞前体获自皮肤、脾脏、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血或外周血。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述单核树突细胞前体细胞是未经活化的单核树突细胞前体。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述单核树状细胞前体从待治疗的个体受试者获得。6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述单核树突细胞前体从与待治疗个体受试者HLA匹配的健康个体受试者获得。7.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是不含任何其他细胞因子的GM-CSF或者是与IL-4、IL-7、IL-13或IL-15组合的GM-CSF。8.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是灭活卡介苗(BCG)、干扰素γ(IFNγ)、脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、咪唑并喹啉化合物、合成的双链多聚核糖核苷酸、Toll样受体(TLR)激动剂、已知会诱导树突细胞成熟的含有未甲基化的CpG基序的核酸序列，或其任何组合。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述灭活的BCG包含完整的BCG、BCG的...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·L·博希，
申请(专利权)人：西北生物治疗药物公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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