树突状细胞子集CD103制造技术

本发明专利技术公开了树突状细胞子集CD103

Dendritic cell subset CD103

The invention discloses the subset of dendritic cells, CD103

【技术实现步骤摘要】
树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法及鉴定方法
本专利技术涉及细胞体外培养
，具体涉及树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法及鉴定方法。
技术介绍
树突状细胞(Dendriticcells，DCs)是目前所知功能最强的专职抗原提呈细胞，能高效地摄取、加工和提呈抗原。未成熟的DC具有较强的迁移能力，成熟的DC表面会形成树突样结构，它可刺激幼稚T细胞和B细胞的分化，在调节天然免疫与获得性免疫维持机体稳态方面起着重要作用。自加拿大学者Steinman于1973年发现树突状细胞以来，它的生物学活性作用一直是人们研究的热点，目前实验研究主要靠自主分离培养为主，成熟稳定的分离培养方法显得尤其重要。根据DCs表面分子表达情况可将其分为不同的子集，CD103+DC是其中一个重要的子集，是能够表达整合素分子αEβ7的α链CD103分子的树突状细胞。肠道CD103+DC不仅可以诱导调节性T细胞(Tregulatorycells,treg)的产生，而且可以指导T细胞表面归巢分子CCR9和α4β7的表达。研究发现，当机体处于稳态时，小肠固有层(Laminapropia,LP)中的CD10本文档来自技高网...

【技术保护点】
树突状细胞子集CD103

【技术特征摘要】
1.树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法，其特征在于，所述树突状细胞子集CD103+DC为小鼠骨髓源CD103+DC，体外培养方法包括以下步骤：1)配制完全培养基：完全培养基是由含有FLT3L、GM-CSF、FBS和双抗的RPMI-1640培养基配制而成，其中FLT3L的含量为200ng/mL，GM-CSF的含量为10ng/mL，FBS的含量按照质量百分比计为10％，双抗的含量按照质量百分比计为1％；2)小鼠骨髓源细胞的培养：取6-8周龄C57BL/6小鼠，脱颈处死，置于75％酒精中浸泡30min；用DPBS冲洗小鼠胫骨、腓骨腔以获得骨髓源细胞，获得的骨髓源细胞以离心力300g离心5min，弃上清；加入3倍体积的红细胞裂解液作用2min，以离心力300g离心5min，弃上清；加入DPBS悬浮细胞，用细胞筛过滤，滤液以离心力300g离心5min，弃上清；加入一定体积的完全培养基悬浮细胞，使细胞浓度最终为1.5×107个/mL，并移至6孔板中培养；培养至第5d，每孔加入1/2体积的完全培养基，继续培养；于第9d收集细胞，以离心力300g离心5min；加入完全培养基重悬，继续培养至第15d，收获细胞。2.根据权利要求1所述的树突状细胞子集CD103+DC的体外培养方法培养得到的小鼠骨髓源树突状细胞子集CD103+DC。3.根据权利要求2所述的小鼠骨髓源树突状细胞子集CD103+DC的鉴定方法，其特征在于，是在骨髓源细胞培养至第15d时，分别进行喷晶扫描电镜观察和荧光显微镜观察；在骨髓源细胞培养至第16d时，进行流式细胞术鉴定。4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述喷晶扫描电镜观察过程为：将培养至第15d的骨髓源细胞，加100ng/mLLPS处理24h；收集细胞至15mL离心管，以离心力300g离心5min；将细胞用完全培养基重悬，转入放置多聚赖氨酸包被无菌盖玻片的48孔细胞培养板中，培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建喜，张景艳，张凯，侯艳华，王磊，王学智，张康，王旭荣，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62