一种小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法技术

本发明专利技术提供一种小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，包括步骤：(a)腹腔注射戊巴比妥钠处死小鼠，剪刀取下小鼠的双下肢股骨，去除毛皮后及多余的肌肉，将剥除肌肉后的股骨置于酒精中浸泡消毒；(b)冲洗髓腔收集骨髓悬液，连续筛网过滤，Ficoll分离，离心获取细胞沉淀；(c)完全培养基1重悬细胞沉淀，接种，差速贴壁法结合半量更换完全培养基2获得骨髓源树突状细胞；(d)特异性免疫磁珠分选得到纯化的骨髓源树突状细胞。本发明专利技术提供了一种简单、高效、稳定的分离纯度及存活率高的髓源树突状细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法
本专利技术属于细胞生物学领域，具体涉及一种小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法。
技术介绍
树突状细胞(Dendriticcells，DC)作为机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigenpresentingcells，APC)，能够高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，启动特异性免疫应答。本专利技术旨在提供一种高效分离培养纯度及存活率高的髓源树突状细胞的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种简单、稳定、高效，且获得纯度高，存活率高的小鼠髓源树突状细胞分离培养的方法。为了解决上述所涉及到的问题，本专利技术采取如下方法获得小鼠髓源树突状细胞：小鼠髓源树突状细胞分离方法的步骤包括：(a)腹腔注射戊巴比妥钠处死小鼠，剪刀取下小鼠的双下肢股骨，去除毛皮后及多余的肌肉，将剥除肌肉后的股骨置于酒精中浸泡消毒；(b)冲洗髓腔收集骨髓悬液，连续筛网过滤，Ficoll分离，离心获取细胞沉淀；(c)完全培养基1重悬细胞沉淀，接种，差速贴壁法结合半量更换完全培养基2获得骨髓源树突状细胞；(d)特异性免疫磁珠分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，包括步骤：(a)腹腔注射戊巴比妥钠处死小鼠，剪刀取下小鼠的双下肢股骨，去除毛皮后及多余的肌肉，将剥除肌肉后的股骨置于酒精中浸泡消毒；(b)冲洗髓腔收集骨髓悬液，连续筛网过滤，Ficoll分离，离心获取细胞沉淀；(c)完全培养基1重悬细胞沉淀，接种，差速贴壁法结合半量更换完全培养基2获得骨髓源树突状细胞；(d)特异性免疫磁珠分选得到纯化的骨髓源树突状细胞。

【技术特征摘要】
1.一种小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，包括步骤：(a)腹腔注射戊巴比妥钠处死小鼠，剪刀取下小鼠的双下肢股骨，去除毛皮后及多余的肌肉，将剥除肌肉后的股骨置于酒精中浸泡消毒；(b)冲洗髓腔收集骨髓悬液，连续筛网过滤，Ficoll分离，离心获取细胞沉淀；(c)完全培养基1重悬细胞沉淀，接种，差速贴壁法结合半量更换完全培养基2获得骨髓源树突状细胞；(d)特异性免疫磁珠分选得到纯化的骨髓源树突状细胞。2.根据权利要求1所述的小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，所述的小鼠为6-8周龄，体重22-28g的小鼠。3.根据权利要求1所述的小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤b中筛网过滤的方法为将收集的悬液依次通过80目、100目、200目的筛网。4.根据权利要求1所述的小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤b中收集的细胞滤液经Ficoll分离的方法获得小鼠髓源树突状细胞。5.根据权利要求1所述的小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤c中完全培养基1为含5％FCS和5％FBS的RPMI-1640培养基。6.根据权利要求1所述的小鼠髓源树突状细胞分离及培养方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清，张亚洲，蒋敏，齐来俊，
申请(专利权)人：江苏齐氏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32