注射骨髓源细胞和培养基用于血管生成制造技术

本发明专利技术提供了方法，用于增强受损骨髓细胞导入患者的缺血部位时促进血管生成的能力，通过用促进血管生成的转基因转染来自培养中的骨髓的早期附着细胞实施。也提供了方法，利用来自自体骨髓的这样的早期附着细胞，或当细胞培养生长时（不必来自自体细胞）、来自这些细胞的培养基，以向患者输送促进血管生成的转基因或蛋白质。转染的早期附着细胞，或当这些细胞培养生长时、来自这些细胞的培养基，被导入缺血组织如心脏，以增强侧支血管形成。细胞或培养基也可以被注射入血流（供应缺血组织的动脉或任何其它血管或静脉）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及注射自体骨髓和骨髓细胞的方法。更具体地，本专利技术涉及心肌内注射自体骨髓和转染的骨髓细胞，和/或来源于这些细胞培养生长时(其不是必需从自体细胞得到)的培养基，以增强侧支血管形成(血管生成(angiogenesis))和组织灌注。
技术介绍
应用重组基因或生长因子增强心肌侧支血管(collateral bloodvessel)功能，代表了治疗心血管疾病的一种新方法。Komowski，R.等人，“Delivery strategies for therapeutic myocardial angiogenesis，”Circulation 2000；101454-458。此观点的证据显示于心肌缺血动物模型中，临床试验正在进行中。Unger，E.F.等人，“Basic fibroblast growthfactor enhances myocardial collateral flow in a canine model，”Am JPhysiol 1994；266H1588-1595；Banai，S.等人，“Angiogenic-inducedenhancement of collateral blood flow to ischemic myocardium by vascularendothelial growth factor in dogs，”Circulation 1994；83-2189；Lazarous，D.F.等人，“Effect of chronic systemic administration of basic fibroblastgrowth factor on collateral development in the canine heart，”Circulation1995；91145-153；Lazarous，D.F.等人，“Comparative effects of basicdevelopment and the arterial response to injury，”Circulation 1996；941074-1082；Giordano，F.J.等人，“Intracoronary gene transfer of fibroblastgrowth factor-5 increases blood flow and contractile function in anischemic region of the heart，”Nature Med 1996；2534-9。Guzman，R.J.等人，“Efficient gene transfer into myocardium by direct injection ofadenovirus vectors，”Circ Res 1993；731202-7；Mack，C.A.等人，“Biologic bypass with the use of adenovirus-mediated gene transfer of thecomplementary deoxyribonucleic acid for VEGF-121，improvesmyocardial perfusion and function in the ischemic porcine heart，”J ThoracCardiovasc Surg 1998；115168-77。在心肌缺血动物模型中，已经研究了直接术中心肌内注射(direct intra-operative intramyocardial injection)血管生成因子(angiogenicfactor)对侧支功能(collateral function)的效应。开胸、经心外膜给予腺病毒载体，导致侧支功能增强，所述腺病毒载体含有编码血管生成肽的转基因(transgene)(Mack等人，见上)。也报道，在患者的开心脏手术期间直接心肌内注射血管生成肽或质粒载体时，发生血管生成。Schumacher，B.等人，“Induction of neoangiogenesis in ischemicmyocardium by human growth factors.First clinical results of a newtreatment of coronary heart disease，”Circulation 1998；97645-650；Losordo，D.W.等人，“Gene therapy for myocardial angiogenesisinitialclinical results with direct myocardial injection of phVEGF 165 as soletherapy for myocardial ischemia，”Circulation 1998；982800。我们不希望将本专利限制为心肌内注射，—我们应该省略本段吗？ 尽管治疗性血管生成(therapeutic angiogenesis)作为一种新形式，对治疗患有冠状动脉疾病的患者是大有希望的，但是在关于哪种具体策略将最佳促进临床上相关的治疗性血管生成反应上，仍然存在着巨大差距。而且，不清楚多种血管生成生长因子(angiogenic growthfactor)中的哪一个(或更多个)可能和有益的血管生成反应相关。此外，应用不同的组织输送平台，例如，蛋白质、腺病毒或“裸”DNA(nakedDNA)促进最佳的血管生成反应，仍然是悬而未决的问题。专利技术概述 本专利技术基于这样的前提多种复杂的过程涉及几十个基因的差异表达，如果不是数百个基因的话，而所述过程对于最适的侧支发育是必要的。基于此概念，随之是，侧支血管的最适发育和组织灌注不能通过给予单一的基因而得到，已知所述基因的编码产物和血管生成相关；或者由于血管生成过程的复杂性，也不能通过给予血管生成相关基因的一个组合而得到。本专利技术依赖于骨髓细胞分泌参与血管生成的生长因子和细胞因子的能力，所述分泌是时问和浓度依赖性的协调的和合适的顺序进行的。绝大多数当前处于试验中的治疗方法集中于，将单一的血管生成生长因子(例如，VEGF、FGF、血管生成素-1(angiopoietin-1))输送至缺血组织。这可以通过输送终产物(例如，蛋白质)或应用不同载体通过基因转移来完成。然而，认为在几种生长因子体系中的复杂相互作用，对于起始和维持新血管形成可能是必需的。更具体地，认为用各种血管生成细胞因子(angiogenic cytokines)诱导特异定位的血管生成环境(specific localized angiogenic milieu)是重要的，所述细胞因子以协调一致的和时间适当的方式(in concert and in a time-appropriate manner)相互作用，从而起始和维持新血管的形成和功能。因此，在一种实施方案中，本专利技术提供了方法，用于在需要的患者中增强受损骨髓细胞促进侧支血管发育的能力。受损骨髓细胞(impaired bone marrow cells)是从患者得到的，并且在合适的培养条件下在合适的培本文档来自技高网...

【技术保护点】
增强受损骨髓细胞在需要的患者中促进侧支血管发育能力的方法，所述方法包括：使受损的骨髓细胞在合适的培养基中，在合适的培养条件下生长一段时期，所述时期足以促进早期附着细胞从骨髓细胞产生；用载体转染至少一部分早期附着细胞，所述载体 包括编码一种或多种因子的多核苷酸，所述因子选自血管生成细胞因子、生长因子和哺乳动物血管生成促进因子，和培养转染的早期附着细胞，以致于使一种或多种因子产生，从而增强受损骨髓细胞和／或当这些细胞培养生长时、来自这些细胞的培养基促 进患者侧支血管发育的能力，细胞和／或培养基被输送至所述患者，所述增强作用是和非转染的细胞或从培养生长的非转染细胞得到的培养基的作用相比而言的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：S爱泼斯坦，S富赫斯，R科尔诺维斯基，MB列昂，KW卡彭特，
申请(专利权)人：心肌治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]