抗H7N9全人源单克隆抗体2L11及其制法与应用制造技术

本发明专利技术涉及抗H7N9全人源单克隆抗体2L11及其制法与应用，该抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；和/或该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本发明专利技术所述抗体2L11可靶向结合H7N9病毒的血凝素HA；相比鼠源抗体，全人源抗体的基因完全来源于人的基因，没有其他种属的成分，在人体内不发生抗鼠抗抗体等毒副作用，具有更好的生物相容性，更适合和更有潜力成为治疗流感病毒的大分子药物。

【技术实现步骤摘要】
抗H7N9全人源单克隆抗体2L11及其制法与应用
本专利技术属于免疫学领域，具体地涉及抗H7N9全人源单克隆抗体2L11及其制法与应用。
技术介绍
在2015年全球十大畅销药中，有6个是全人源或人源化单克隆抗体药物。排名第一的是艾伯维公司治疗关节炎的抗TNFa单克隆抗体Humira，这是一个全人源单克隆抗体，已经是连续3年销售额100亿以上的药王。从1986年第一个单克隆抗体药物上市开始，单抗药物经历了鼠源单抗药物(如OrthocloneOKT3)、嵌合单抗药物(Rituximab)、人源化单抗药物(Herceptin)和全人源单抗药物(Humira)等阶段。由于人体出现抗鼠抗体反应(HAMA)，鼠源单抗药物、嵌合单抗药物已经逐渐被淘汰，目前占据市场的单克隆抗体药物全都是人源化单克隆抗体药物。与国际先进的人源抗体生产技术相比，深圳乃至全中国都有很大差距，主要表现在人源抗体药物领域的创新能力薄弱，自主研发的品种少，目前还没有原创人源化单克隆抗体药物上市的报道，庞大的抗体药物市场被国外药企占领。我国要改变落后局面，争夺消费潜力巨大的国内外抗体药物市场，亟需攻克人源化单克隆抗体技术。人源单克隆抗体在治疗炎症、癌症特别是流行性感冒方面具有高特异性的显著疗效。流行性感冒是由流感病毒引起的传染性疾病，严重威胁人类健康。全球每年约有10亿人受季节性流感病毒感染，其中有25-50万人死亡。H7N9病毒是一种流感病毒，对传统的抗病毒药amantadine和rimantadine有耐药性，目前尚没有有效治疗手段。H7N9病毒在入侵细胞时需要依赖病毒自身表达的特定分子与人细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和病毒的人源抗体是人B淋巴细胞产生的某些特异抗体，能够与病毒表面的抗原结合，从而阻止该病毒黏附靶细胞受体，防止病毒侵入细胞，能够高效防治H7N9流行性感冒。因此，提供一种抗H7N9全人源单克隆抗体及其制法是本领域亟待解决的技术问题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段。本专利技术的另一目的在于提供编码所述抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段的基因及含该基因的载体或细胞。本专利技术的另一目在于提供产生所述抗H7N9全人源单克隆抗体2L11的方法。本专利技术的另一目在于提供包所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段的药物组合物。本专利技术的另一目的在于提供本专利技术所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段或所述的药物组合物的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种检测H7N9病毒的试剂盒。为实现上述目的，一方面，本专利技术提供抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段，其中，该抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；和/或该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。在本专利技术的一具体实施方式中，该抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNO:6所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；和/或该抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNO:8所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。经ELISA实验验证，本专利技术所述抗H7N9全人源单克隆抗体2L11可以靶向结合H7N9病毒的血凝素HA。本专利技术所述抗体为全人源性单克隆抗体，相比鼠源抗体，全人源抗体的基因完全来源于人的基因，没有其他种属的成分，在人体内不发生抗鼠抗抗体等毒副作用，具有更好的生物相容性，更适合和更有潜力成为治疗流感病毒的大分子药物。另一方面，本专利技术提供编码本专利技术所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11的基因。优选地，所述基因包含编码具有SEQIDNO:2所示的氨基酸的核苷酸序列，更优选地，该核苷酸序列的如SEQIDNO:1所示；和/或所述基因包含编码具有SEQIDNO:4所示的氨基酸的核苷酸序列，优选地，该核苷酸序列的如SEQIDNO:3所示。在本专利技术一具体实施方式中，所述基因包含编码具有SEQIDNO:6的氨基酸的核苷酸序列，优选地，该核苷酸序列的如SEQIDNO:5所示；和/或所述基因包含编码具有SEQIDNO:8所示的氨基酸的核苷酸序列，优选地，该核苷酸序列的如SEQIDNO:7所示。另一方面，本专利技术提供含如上所述基因的载体。再一方面，本专利技术提供含如上所述基因或如上所述载体的细胞。再一方面，本专利技术提供一种产生所述抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段的方法，该方法是采用单个B细胞法制备所述抗H7N9全人源单克隆抗体2L11。现有技术中存在采用噬菌体展示技术制备抗H7N9病毒人源单克隆抗体的方法，尽管该方法具有生产成本低、不经过免疫和细胞融合等繁琐工作的优点，但是其缺点也比较明显，从非免疫抗体库中获得的抗体往往亲和力不足、受外源基因转化率的限制、抗体库的库容量不足以涵盖动物的抗体多样性等。本专利技术采用单个B细胞PCR技术，从病人的血液中分离分泌功能抗体的B细胞，然后提取RNA和合成cDNA，从中克隆分泌目的抗体的基因，最后重组和表达全人源单克隆抗体。该技术操作简单快捷，生产的人源抗体具有高亲和力和特异性，此外，可进一步采用改进的从记忆B细胞中分离具有中和病毒功能或杀伤肿瘤功能的本专利技术所述单克隆抗体技术，更是大大减少了繁琐操作和成本。另一方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含本专利技术所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段。另一方面，本专利技术提供本专利技术所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段或所述的药物组合物在制备用于治疗由H7N9病毒引起的疾病的药物中的应用。另一方面，本专利技术提供一种检测H7N9病毒水平的试剂盒，其含有本专利技术所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段；优选所述的试剂盒还含有第二抗体和用于检测的酶或荧光或放射标记物，以及缓冲液；优选所述第二抗体为抗权利要求1所述单克隆抗体2L11的抗抗体。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术所述抗H7N9全人源单克隆抗体2L11可以靶向结合H7N9病毒的血凝素HA。(2)相比鼠源抗体，全人源抗体的基因完全来源于人的基因，没有其他种属的成分，在人体内不发生抗鼠抗抗体等毒副作用，具有更好的生物相容性，更适合和更有潜力成为治疗流感病毒的大分子药物。(3)相较于现有技术提供的噬菌体展示技术制备抗H7N9病毒人源单克隆抗体的方法，本专利技术采用的单个B细胞PCR技术具有操作简单快捷，生产的人源抗体具有高亲和力和特异性等优点。附图说明图1为实施例1NTH-3T3表达CD40本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段，其中，该抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；和/或该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段，其中，该抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；和/或该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段，其中，该抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNO:6所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；和/或该抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNO:8所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。3.编码权利要求1或2所述的抗H7N9全人源单克隆抗体2L11或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合H7N9的生物活性片段的基因；优选地，所述基因包含编码具有SEQIDNO:2所示的氨基酸的核苷酸序列，更优选地，该核苷酸序列的如SEQIDNO:1所示；和/或所述基因包含编码具有SEQIDNO:4所示的氨基酸的核苷酸序列，优选地，该核苷酸序列的如SEQIDNO:3所示。4.根据权利要求3所述的基因，其中，所述基因包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，李俊鑫，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44