The present invention relates to DC cells in serum-free medium and its preparation method, including the preparation methods to free fatty acid albumin on fatty acid load after adding albumin solution obtained to the basic culture medium, serum medium composition more stable without DC cells thus obtained, function better consistency, not because albumin species differences between different batches or processing.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种DC细胞无血清培养基,属于细胞培养
技术介绍
无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基,可以应用于培养免疫细胞,例如淋巴细胞(例如,T淋巴细胞、B细胞、NK细胞等)、树突状细胞(也称DC细胞)、单核/巨噬细胞等。通常来说,免疫细胞在体外存活和扩增所需要的营养物质包括:白蛋白、转铁蛋白、胰岛素、氨基酸、维生素、糖、脂质、无机盐、生长因子等。这些成分中,白蛋白对细胞生长和存活的影响最大,也是功能和组成最复杂的成分。而无血清培养基中,白蛋白所发挥的功能主要是由它所携带的脂肪酸和微量元素等成分决定的。不同来源的白蛋白,例如不同种属的牛白蛋白和人白蛋白,它们所携带的脂肪酸差异很大;例如,重组白蛋白与人血白蛋白所携带的脂肪酸不同;例如在重组白蛋白中,水稻胚乳提取的与酵母菌发酵生产的重组白蛋白所携带的脂肪酸不同;不同产地的,也有不同。另外,后期生产加工过程也会造成白蛋白所携带的脂肪酸差异,例如不同生产厂家生产的、不同的批次的白蛋白所携带的脂肪酸也有很大的不同。总之,以上这些差异就导致添加了白蛋白的无血清培养基的成分复杂、不稳定。无血清培养基中添加的白蛋白,其所携带的脂肪酸被细胞摄取后,用于构建细胞膜结构、信号传导分子、转化成能量、或者参与其它物质的合成等。因此,培养基中的白蛋白所携带的脂肪酸的差异会影响到免疫细胞的生长增殖、细胞功能等各个方面。特别是,往往某些脂肪酸含量过高或过低也会不利于免疫细胞的增殖及其杀伤活性,比如过高含量的亚麻酸或过低含量的亚油酸对免疫细胞增殖和杀伤活性不利。特别是,对于淋巴细胞 ...
【技术保护点】
一种应用于DC细胞的DC细胞无血清培养基,所述DC细胞无血清培养基包括基础培养基、适用于所述DC细胞无血清培养基的血清替代物、IL‑4和GM‑CSF,所述血清替代物包含白蛋白、人转铁蛋白、胰岛素和胆固醇,其特征在于:所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载脂肪酸而形成的;所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载特定的脂肪酸而形成的;所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸和亚油酸组成;按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4‑2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸,0.4‑2mmol的油酸和0.4‑2mmol的亚油酸的比例,将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成;或者,所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸、亚油酸和花生四烯酸组成,所述步骤二中,按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4‑2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸,0.4‑2mmol的油酸和0.4‑2mmol的亚油酸的比例,所述花生四烯酸与所述亚油酸的添加量的比值为1:6~1:1,将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成。
【技术特征摘要】
1.一种应用于DC细胞的DC细胞无血清培养基,所述DC细胞无血清培养基包括基础培养基、适用于所述DC细胞无血清培养基的血清替代物、IL-4和GM-CSF,所述血清替代物包含白蛋白、人转铁蛋白、胰岛素和胆固醇,其特征在于:所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载脂肪酸而形成的;所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载特定的脂肪酸而形成的;所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸和亚油酸组成;按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4-2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸,0.4-2mmol的油酸和0.4-2mmol的亚油酸的比例,将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成;或者,所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸、亚油酸和花生四烯酸组成,所述步骤二中,按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4-2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸,0.4-2mmol的油酸和0.4-2mmol的亚油酸的比例,所述花生四烯酸与所述亚油酸的添加量的比值为1:6~1:1,将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成。2.如权利要求1所述的无血清培养基,其特征在于:所述特定的脂肪酸由棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸组成,所述硬脂酸与所述棕榈酸的添加量的比值为1:6~1:1。3.如权利要求1所述的DC细胞无血清培养基,其特征在于:所述DC细胞无血清培养基,所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:武宁,谢志明,
申请(专利权)人:英普乐孚生物技术上海有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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