【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于转染细胞的方法和产品优先权本申请要求2011年12月5日提交的美国临时申请号61/566,948、2011年12月12日提交的美国临时申请号61/569,595、2012年4月24日提交的美国临时申请号61/637,570、2012年5月7日提交的美国申请号13/465,490以及2012年6月26日提交的美国临时申请号61/664,494的优先权,所述申请都特此以引用的方式整体并入。专利
本专利技术部分涉及编码蛋白质的核酸;含有非规范核苷酸的核酸;包含核酸的治疗剂;用于诱导细胞表达蛋白质的方法、试剂盒和装置;用于转染、基因编辑和重新编程细胞的方法、试剂盒和装置;以及使用这些方法、试剂盒和装置产生的细胞、生物体和治疗剂。电子呈送的文本文件的描述由此电子呈送的文本文件的内容以引用的方式整体并入本文:序列表的计算机可读格式副本(文件名:FABI_001_0lffO_SeqList_ST25.txt ;记录日期:2012年12月4日;文件大小:18KB)。背景核酸转染 可以通过在体外和体内使核酸与带电的脂质、利匹哆异德(Iipidoid)、肽、其聚合物或混合物预先复合来将核酸递送至细胞。此类转染试剂为可商购的,并且广泛用于将核酸递送至培养的细胞。暴露于转染试剂-核酸复合物的细胞可以通过内吞作用或其它方式内化这些复合物。一旦在细胞里面,核酸可以进行它的预期的生物功能。在蛋白质编码RNA的情况下,例如,RNA可以通过细胞的核糖体翻译成蛋白质。无血清细胞培养动物血清如胎牛血清(FBS)通常用作细胞培养基中的补充剂以促进许多类型的细胞的生长。然而,血清的不确定性 ...
【技术保护点】
一种合成RNA分子,其包含三个或更多个非规范核苷酸,所述每个非规范核苷酸包括来自以下的一个或多个取代:嘧啶位置2C、嘧啶位置4C、嘧啶位置5C、嘌呤位置6C、嘌呤位置7N以及嘌呤位置8C。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.12.05 US 61/566,948;2011.12.12 US 61/569,595;1.一种合成RNA分子,其包含三个或更多个非规范核苷酸,所述每个非规范核苷酸包括来自以下的一个或多个取代:嘧啶位置2C、嘧啶位置4C、嘧啶位置5C、嘌呤位置6C、嘌呤位置7N以及嘌呤位置8C。2.如权利要求1所述的合成RNA分子,其中所述合成RNA分子由体外转录产生。3.如权利要求1所述的合成RNA分子,其中所述合成RNA分子进一步包含以下的至少一种:5’ -帽、5’ -帽I结构和3’ -聚(A)尾。4.如权利要求1所述的合成 RNA分子,其中至少两个所述非规范核苷酸为嘧啶。5.如权利要求1所述的合成RNA分子,其中所述非规范核苷酸包括以下的至少一种:假尿苷、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、5-氮杂尿苷、5-羟基尿苷、5-氨基尿苷、5-甲基尿苷、2-硫代假尿苷、4-硫代假尿苷、5-羟基假尿苷、5-甲基假尿苷、5-氨基假尿苷、假异胞苷、5-甲基胞苷、N4-甲基胞苷、2-硫代胞苷、5-氮杂胞苷、5-羟基胞苷、5-氨基胞苷、N4-甲基假异胞苷、2-硫代假异胞苷、5-羟基假异胞苷、5-氨基假异胞苷、5-甲基假异胞苷、N6-甲基腺苷、7-脱氮杂腺苷、6-硫代鸟苷、7-脱氮杂鸟苷、8-氮杂鸟苷、6-硫代-7-脱氮杂鸟苷、6-硫代-8-氮杂鸟苷、7-脱氮杂-8-氮杂鸟苷以及6-硫代-7-脱氮杂-8-氮杂鸟苷。6.如权利要求1所述的合成RNA分子,其中至少两个所述非规范核苷酸各包含小于20%的所述合成RNA分子。7.如权利要求1所述的合成RNA分子,其中所述非规范核苷酸包括: a.以下的至少一种:假尿苷、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、5-氮杂尿苷、5-羟基尿苷、5-氨基尿苷、5-甲基尿苷、2-硫代假尿苷、4-硫代假尿苷、5-羟基假尿苷、5-甲基假尿苷以及5-氨基假尿苷,以及 b.以下的至少一种:假异胞苷、5-甲基胞苷、N4-甲基胞苷、2-硫代胞苷、5-氮杂胞苷、5-羟基胞苷、5-氨基胞苷、N4-甲基假异胞苷、2-硫代假异胞苷、5-羟基假异胞苷、5-氨基假异胞苷以及5-甲基假异胞苷。8.如权利要求7所述的合成RNA分子,其中所述非规范核苷酸进一步包括以下的至少一种:N6-甲基腺苷、7-脱氮杂腺苷、6-硫代鸟苷、7-脱氮杂鸟苷、8-氮杂鸟苷、6-硫代-7-脱氮杂鸟苷、6-硫代-8-氮杂鸟苷、7-脱氮杂-8-氮杂鸟苷以及6-硫代-7-脱氮杂-8-氮杂鸟苷。9.一种合成RNA分子,其: a.包含非规范核苷酸,以及 b.编码基因编辑蛋白。10.一种治疗组合物,其包含如权利要求1至权利要求9中任一项所述的合成RNA分子。11.一种治疗组合物,其包含编码基因编辑蛋白的合成RNA分子和转染试剂。12.一种用于使用核酸转染细胞的方法,所述方法包括使所述细胞与如权利要求1至权利要求9中任一项所述的合成RNA分子接触。13.一种用于诱导哺乳动物细胞表达感兴趣的蛋白质的方法,所述方法包括使所述细胞与如权利要求1至权利要求9中任一项所述的合成RNA分子接触。14.一种用于重新编程细胞的方法,所述方法包括使所述细胞与如权利要求1至权利要求9中任一项所述的合成RNA分子接触。15.一种用于基因编辑细胞的方法,所述方法包括使所述细胞与如权利要求1至权利要求9中任一项所述的合成RNA分子接触。16.一种用于使用核酸转染细胞的方法,所述方法包括: a.使所述细胞与含有氢化可的松和/或白蛋白的培养基接触,其中所述白蛋白用离子交换树脂或木炭处理,以及 b.使所述细胞与所述核酸接触。17.如权利要求16所述的方法,其中所述白蛋白用短链脂肪酸处理。18.如权利要求16所述的方法,其中使所述白蛋白达到至少40°C的温度。19.如权利要求16所述的方法,其进一步包括使所述细胞与转染试剂接触。20.如权利要求16所述的方法,其中所述细胞为哺乳动物细胞,并且所述哺乳动物细胞被诱导表达感兴趣的蛋白质。21.如权利要求16所述的方法,其进一步包括在连续5天期间使步骤(b)重复至少两次。22.如权利要求16所述的方法,其中所述核酸编码重新编程蛋白。23.如权利要求16所述的方法,其中所述细胞被重新编程。24.如权利要求23所述的方法,其中所述细胞为皮肤细胞,并且所述方法进一步包括在支持以下的至少一种生长的条件下培养所述皮肤细胞:皮肤细胞、多能干细胞、葡萄糖反应性胰岛素产生细胞、造血细胞、...
【专利技术属性】
技术研发人员:M·安吉尔,C·罗德,
申请(专利权)人:菲克特生物科学股份有限公司,
类型:发明
国别省市:美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。