本发明专利技术涉及一种I型USHER综合征相关基因突变及应用此突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂。所述诊断试剂包括，1)DNA提取体系试剂盒：被测个体外周静脉血基因组DNA提取；2)PCR扩增体系试剂盒和3)DNA测序体系，其特征在于：所述PCR扩增体系：以外周静脉血提取的基因组DNA为模板，以(a)和(b)两组引物同时进行PCR扩增，所述DNA测序体系：将PCR扩增产物直接进行DNA测序，并与原MYO7A基因编码DNA序列对比；当扩增产物中c.73G＞A和c.462C＞A突变均存在时，为I型USHER综合征患者，当存在突变之一时，为I型USHER综合征携带者，当两突变均不存在时，为健康个体。本发明专利技术实现了临床上对USHER综合征患者方便快捷准确的基因筛查和诊断。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种I型USHER综合征相关基因突变及应用此突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂。所述诊断试剂包括，1)DNA提取体系试剂盒：被测个体外周静脉血基因组DNA提取；2)PCR扩增体系试剂盒和3)DNA测序体系，其特征在于：所述PCR扩增体系：以外周静脉血提取的基因组DNA为模板，以(a)和(b)两组引物同时进行PCR扩增，所述DNA测序体系：将PCR扩增产物直接进行DNA测序，并与原MYO7A基因编码DNA序列对比；当扩增产物中c.73G＞A和c.462C＞A突变均存在时，为I型USHER综合征患者，当存在突变之一时，为I型USHER综合征携带者，当两突变均不存在时，为健康个体。本专利技术实现了临床上对USHER综合征患者方便快捷准确的基因筛查和诊断。【专利说明】—种I型USHER综合征相关基因突变及应用此突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂
本专利技术涉及一种基因突变及应用此突变基因的诊断试剂，具体涉及一种I型USHER综合征相关基因突变及应用此突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂。
技术介绍
USHER综合征又称遗传性视网膜色素变性-感音神经性耳聋综合征。据统计，先天性重度-极重度感音神经性耳聋患者中约有10%为USHER综合征。临床上将USHER综合征分为3型，I型为先天性重度-极重度耳聋，伴前庭反射消失，10岁左右出现视网膜色素变性，为三种类型中最重的一型。由于该类患者出生后只表现为聋哑，10岁之后才出现视力障碍，因此单纯依靠临床听力检查极易漏诊。如能早期筛查出USHER综合征患者，并在视力障碍出现前进行人工耳蜗植入，则可以有效避免严重视力-听力-言语联合残疾的发生。以往由于人们缺乏对USHER综合征遗传病因学的深入认识以及诊断技术，大部分病例均无法明确分子病因，更无法预防其发生。近30年来，伴随耳聋遗传病因学及分子生物学技术的快速发展，至今已有5个I型USHER综合征基因被克隆，丰富了 USHER综合征基因谱。但在我国，尽管有众多的USHER综合征患者，其分子病因多不清楚，难以明确诊断，使得USHER综合征防治极其困难。研究证实MY07A基因突变可以引起I型USHER综合征及常染色体隐性遗传性耳聋,是最常见的I型USHER综合征致病基因，临床上约50%的I型USHER综合征患者均由该基因突变引起。MY07A基 因位于11号染色体长臂，包含49个外显子，编码2215个氨基酸，基因较大，传统的PCR、测序检测法耗时、耗力，因此在临床上很难常规检查。如能明确MY07A基因的致病突变位点，设计针对致病突变位点的检测芯片，则有望解决临床上I型USHER综合征患者基因筛查、诊断的难题。已有文献报道MY07A基因编码DNA的第73位碱基鸟嘌呤替换为腺嘌呤引起编码氨基酸的第25位甘氨酸突变为精氨酸(c.73G > A，p.G25R)，为一种I型USHER综合征相关基因突变，但只有2条等位基因同时携带该突变才致病，如果1条基因携带该突变不致病，此发现不足以解决临床上I型USHER综合征患者基因筛查、诊断的难题。寻找新的致病突变，丰富I型USHER综合征基因谱及突变谱将为临床上方便快捷的筛查和诊断I型USHER综合征患者提供重要的靶点及理论依据，是本领域研究工作者孜孜不倦的探究领域。专利技术目的有鉴于此，为了解决现有技术中的难题，本专利技术人经过艰辛的研究，发现了另一种I型USHER综合征相关基因突变，该突变与已知的73位碱基相关基因突变结合筛查，可有效解决上述难题。本专利技术还提供应用上述新发现的I型USHER综合征相关突变与已知相关突变结合的在临床上可有效快捷地筛查、诊断I型USHER综合征的分子病因学诊断试剂。本专利技术提供的一种I型USHER综合征相关基因突变，所述突变为MY07A基因编码DNA的第462位碱基胞嘧啶替换为腺嘌呤引起编码氨基酸的第154位半胱氨酸突变为终止码(c.462C > A, p.C154X)。本专利技术提供的一种含有上述I型USHER综合征相关突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂，所述诊断试剂包括，1)DNA提取体系试剂盒:被测个体外周静脉血基因组DNA提取；2)PCR扩增体系试剂盒和3)DNA测序体系，所述PCR扩增体系:以外周静脉血提取的基因组DNA为模板，以(a)和(b)两组引物同时进行PCR扩增，具中:(a)组引物为上游引物(5’ 一 3’):TTGTAGCAGAGGGATATAGGGC,下游引物(5’ — 3’):GGGGACTACTCACATTGTCTTCA,(b)组引物为上游引物(5，一 3，): CTGGTGGCTGTGAACCCCTA，下游引物(5，一 3，):GCTTGATGGCATTTCCGAC ；所述DNA测序体系:将PCR扩增产物直接进行DNA测序，并与原MY07A基因编码DNA序列对比:当扩增产物中c.73G >八和c.462C > A突变均存在时，为I型USHER综合征患者，当存在突变之一时，为I型USHER综合征携带者，当两突变均不存在时，为健康个体。MY07A蛋白为非常规肌球蛋白，在耳蜗毛细胞静纤毛的形成中发挥了重要作用。MY07A基因编码DNA的第462位碱基胞嘧啶替换为腺嘌呤引起编码氨基酸的第154位半胱氨酸突变为终止码(c.462C > A，p.C154X)是本【专利技术者】首次发现的引起常染色体隐性遗传性耳聋的突变，并首次证实了其为I型USHER综合征的分子病因之一，在219例中国正常听力人群中进行该位点的筛查，均为阴性。本研究丰富了 USHER综合征基因谱及突变谱，为开展USHER综合征分子诊断提供了基因学依据。在我国开展I型USHER综合征相关基因及其突变谱的研究为研发适用于中国人群的筛查工具提供了理论依据及筛查靶点。本专利技术的有益效果在于:1.本专利技术公开了一种已知I型USHER综合征(MY07A)的新突变，首次证实了其与第73位碱基突变(c.73G > A，p.G25R) 一起共同决定了 I型USHER综合征的分子病因，本研究丰富了 USHER综合征基因突变谱，为开展USHER综合征分子诊断提供了基因学依据和重要的靶点。2.本专利技术方法中MY07A基因的复合杂合突变:c.73G> A(p.G25R)错义突变和c.462C > A(p.C154X)无义突变经证实可引起I型USHER综合征，通过基因诊断可判断此家族中未发病的人群患病的可能性，将疾病的诊断及干预提前至未发病时，降低该家庭严重残疾的发生率。3.本专利技术提供了两突变位点同时扩增的有效PCR扩增引物及以此为基础的诊断试剂，易于筛查操作和诊断，当c.73G > A和c.462C > A突变均存在时，为I型USHER综合征患者，当存在突变其一时，为I型USHER综合征携带者，当两突变均不存在时为健康，从而解决了临床上USHER综合征患者基因筛查、诊断的难题。【专利附图】【附图说明】:图1家系图及MY07A突变在家系内的共分离结果。(9名直系亲属的基因型均进行了标记。)图2家系部分成员MY07A突变检测结果测序结果显示所有患者(II:1,I1:2,11:4,11:5)均携带MY07A基因c.73G > A，c.462C>本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种I型USHER综合征相关基因突变，其特征在于，所述突变为MYO7A基因编码DNA的第462位碱基胞嘧啶替换为腺嘌呤引起编码氨基酸的第154位半胱氨酸突变为终止码(c.462C＞A，p.C154X)。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高雪，戴朴，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：
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