【技术实现步骤摘要】
靶向的脂质体专利技术背景专利
本专利技术是在药物输送的领域，并且确切地讲，是基于阳离子脂质体的药物输送。在实施方案中，本专利技术提供了制备适用于将脂质体输送至肿瘤(包括脑肿瘤)的配体靶向的(例如，抗体或抗体片段靶向的)脂质体的方法。在实施方案中，脂质体输送替莫唑胺(temozolomide)越过血脑屏障以用于治疗原发性或转移性脑肿瘤。可以用脂质体来治疗的其它癌症包括:神经内分泌肿瘤、黑素瘤、前列腺癌、头颈部癌、卵巢癌、肺癌、肝癌、乳癌、泌尿生殖系统癌、胃癌、结肠直肠癌、宫颈癌、脂肉瘤、横纹肌肉瘤、绒毛膜癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、多发性骨髓瘤以及其它类型的癌症。在另一个实施方案中，脂质体输送美法仑(melphalan)用于治疗多发性骨髓瘤、血液的其它肿瘤、或其它实体肿瘤。在其它的实施方案中，脂质体可以输送其它药物如阿托品(atropine)、培美曲塞(pemetrexed)或伊立替康(irinotecan)越过血脑屏障。专利技术背景原发性脑肿瘤，并且特别是神经胶质瘤，是最难治疗的癌症之一。除了原发性肿瘤之外，一年会在超过150，000患者中诊断出来自多种原发性源[肺占多数(60%)、乳房(20%)和黑素瘤(10%)]的转移性脑癌(Newton H 和 Malkin M(2010) Neurologic Complicationsof Systemic Cancer and Antineoplastic Therapy.1nforma Healthcare)。因此，迫切需要用于脑癌的改进治疗，NCI已经将脑癌视为其前5项基金优先性中的一项就印证了这一点。...
【技术保护点】
一种制备靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物的方法，所述方法包括：(a)在乙醇中制备包含一种或多种阳离子脂质的脂质溶液；(b)制备替莫唑胺的溶液；(c)将所述脂质溶液与所述替莫唑胺的溶液混合；(d)将脂质与替莫唑胺的所述混合物注入水溶液中，从而形成替莫唑胺阳离子脂质体；(e)将所述替莫唑胺阳离子脂质体与配体混合以形成所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体，其中所述配体直接与所述阳离子脂质体复合，但不是与所述阳离子脂质体化学偶联。
【技术特征摘要】
2012.09.19 US 61/702,7961.一种制备靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制备包含一种或多种阳离子脂质的脂质溶液； (b)制备替莫唑胺的溶液； (C)将所述脂质溶液与所述替莫唑胺的溶液混合； (d)将脂质与替莫唑胺的所述混合物注入水溶液中，从而形成替莫唑胺阳离子脂质体； (e)将所述替莫唑胺阳离子脂质体与配体混合以形成所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体，其中所述配体直接与所述阳离子脂质体复合，但不是与所述阳离子脂质体化学偶联。2.如权利要求1所述的方法，其中所述配体是抗体、抗体片段或蛋白质，包括单链Fv抗体片段，如抗转铁蛋白受体单链Fv (TfRscFv)。3.如权利要求1所述的方法，其中在二甲亚砜(DMSO)中制备所述替莫唑胺的溶液。4.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质溶液包含1，2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)和1，2- 二油酰基-sn-甘油基_3_磷酰乙醇胺(DOPE)。5.如权利要求1所述的方法，其中在约ImM至约200mM、或约50mM至约200mM的浓度下制备所述替莫唑胺的溶液。6.如权利要求1所述的方法，其中脂质:替莫唑胺的所述摩尔比是约0.1:1至约5:1，更适合地约0.5:1至约2:1`或甚至更适合地约1:1。7.如权利要求1所述的方法,其中配体:脂质的所述重量比是约0.01:1至约0.5:1，更适合地约0.3:1至约0.4:1。8.如权利要求2所述的方法，其中TfRscFv:脂质的所述重量比是约0.33:1。9.一种制备靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制备包含1，2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)和1，2_二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)的脂质溶液； (b)制备替莫唑胺的溶液； (c)将所述脂质溶液与所述替莫唑胺的溶液混合； (d)将脂质与替莫唑胺的所述混合物注入水溶液中，从而形成替莫唑胺阳离子脂质体； (e)将所述替莫唑胺阳离子脂质体与抗转铁蛋白受体单链Fv(TfRscFv)混合以形成所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物，其中所述TfRscFv直接与所述阳离子脂质体复合，但不是与所述阳离子脂质体化学偶联。10.如权利要求9所述的方法，其中在二甲亚砜(DMSO)中制备所述替莫唑胺的溶液。11.如权利要求9所述的方法，其中在约ImM至约200mM、或约50mM至约200mM的浓度下制备所述替莫唑胺的溶液。12.如权利要求9所述的方法，其中脂质:替莫唑胺的所述摩尔比是约0.1:1至约5:1，更适合地约0.5:1至约2:1或甚至更适合地约1:1。13.如权利要求9所述的方法，其中TfRscFv:脂质的所述重量比是约0.01:1至约0.5:1,更适合地约0.3:1至约0.4:1,或甚至更适合地约0.33:1。14.靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物在制备用于治疗患者的癌症的药物中的用途，其中所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物包含:(a)阳离子脂质体，其包含1，2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)； (b)替莫唑胺；以及 (c)配体，其直接与所述阳离子脂质体复合，但不是与所述阳离子脂质体化学偶联。15.如权利要求14所述的用途，其中所述配体是抗体、抗体片段或蛋白质，包括单链Fv抗体片段，如抗转铁蛋白受体单链Fv (TfRscFv)。16.如权利要求14所述的用途，其中以约10mg/m2至约500mg/m2或约50mg/m2至约250mg/m2的剂量对所述患者施用所述替莫唑胺。17.如权利要求14所述的用途，其中所述阳离子脂质体中的脂质:替莫唑胺的所述摩尔比是约0.1:1至约5:1,更适合地约0.5:1至约2:1或甚至更适合地约1:1。18.如权利要求14所述的用途，其中配体:所述阳离子脂质体中的脂质的所述重量比是约0.01:1至约0.5:1，更适合地约0.3:1至约0.4:1。19.如权利要求15所述的用途，其中TfRscFv:所述阳离子脂质体中的脂质的所述重量比是约0.33:1。20.如权利要求14所述的用途，其中所述施用是静脉内的(IV)、瘤内的(IT)、病灶内的(IL)、舌下的(SL)、气溶胶的、经皮的、口服的、内窥镜的、局部的、肌肉内的(IM)、真皮内的(ID)、眼内的(10) 、腹膜内的(IP)、经真皮的(TD)、鼻内的(IN)、脑内的(1C)、器官内的(例如肝内的)、缓释植入、或皮下施用、或经由使用渗透泵或机械泵的施用。21.如权利要求14所述的用途，其中所述癌症是头颈部癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、神经内分泌癌、宫颈癌、肺癌、肝癌、脂肉瘤、横纹肌肉瘤、绒毛膜癌、黑素瘤、视网膜母细胞瘤、卵巢癌、泌尿生殖系统癌、胃癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤或血液的癌症，适合地，所述脑癌是神经胶质瘤、星形细胞瘤或成胶质细胞瘤。22.如权利要求14所述的用途，其进一步包括对所述患者施用与所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物组合的另一治疗，优选地，所述另一治疗包括施用化疗剂、小分子、放射治疗或基于核酸的治疗。23.如权利要求22所述的用途，其中所述基于核酸的治疗包括施用阳离子脂质体复合物，所述阳离子脂质体复合物包含表达野生型P53的质粒DNA。24.靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物在制备用于治疗患者的脑癌的药物中的用途，其中所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物包含: (a)阳离子脂质体，其包含1，2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酰乙醇胺(DOPE)； (b)替莫唑胺；以及 (c)抗转铁蛋白受体单链Fv(TfRscFv)，其直接与所述阳离子脂质体复合，但不是与所述阳离子脂质体化学偶联。25.如权利要求24所述的用途,其中以约10mg/m2至约500mg/m2或约100mg/m2至约250mg/m2的剂量对所述患者施用所述替莫唑胺。26.如权利要求24所述的用途，其中所述阳离子脂质体中的脂质:替莫唑胺的所述摩尔比是约0.1:1至约5:1,更适合地约0.5:1至约2:1或甚至更适合地约1:1。27.如权利要求24所述的用途，其中TfRscFv:所述阳离子脂质体中的脂质的所述重量比是约0.01:1至约0.5:1,更适合地约0.3:1至约0.4:1,或甚至更适合地约0.33:1。28.如权利要求24所述的用途，其中所述施用是静脉内的(IV)、瘤内的(IT)、病灶内的(IL)、气溶胶的、经皮的、口服的、内窥镜的、局部的、肌肉内的(頂)、真皮内的(ID)、舌下的(SL)、眼内的(10)、腹膜内的(IP)、经真皮的(TD)、鼻内的(IN)、脑内的(1C)、器官内的(例如肝内的)、缓释植入、或皮下施用、或经由使用渗透泵或机械泵的施用。29.如权利要求24所述的用途，其中所述脑癌是神经胶质瘤、星形细胞瘤或成胶质细胞瘤。30.通过权利要求1所述的方法来制备的靶向替莫唑胺阳离子脂质体复合物在制备用于治疗患者的癌症的药物中的用途。31.如权利要求30所述的用途，其中所述配体是抗体、抗体片段或蛋白质，包括单链Fv抗体片段，如抗转铁蛋白受体单链Fv (TfRscFv)。32.如权利要求30所述的用途，其中以约10mg/m2至约500mg/m2或约50mg/m2至约250mg/m2的剂量对所述患者施用替莫唑胺。33.如权利要求30所述的用途，其中脂质:替莫唑胺的所述摩尔比是约0.1:1至约5:1,更适合地约0.5:1至约2:1或甚至更适合地约1:1。34.如权利要求30所述的用途，其中配体:脂质的所述重量比是约0.01:1至约0.5:1，更适合地约0.3:1至约0.4:1。35.如权利要求30所述的用途，其中所述施用是静脉内的(IV)、瘤内的(IT)、病灶内的(IL)、气溶胶的、经皮的、口服的、内窥镜的、局部的、肌肉内的(頂)、真皮内的(ID)、舌下的(SL)、眼内的(10)、腹膜内的(IP)、经真皮的(TD)、鼻内的(IN)、脑内的(1C)、器官内的(例如肝内的)、缓释植入、或皮下施用、或经由使用渗透泵或机械泵的施用。36.如权利要求30所述的用途，其中所述癌症是头颈部癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、神经内分泌癌、宫颈癌、肺癌、肝癌、脂肉瘤、横纹肌肉瘤、绒毛膜癌、黑素瘤、视网膜母细胞瘤、卵巢癌、泌尿生殖系统癌、胃癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤或血液的癌症，适合地，所述脑癌是神经胶质瘤、星形细胞瘤或成胶质细胞瘤。37.如权利要求30所述的用途，其进一步包括对所述患者施用与所述靶向的替莫唑胺阳离子脂质体复合物组合的另一治疗，优选地，所述另一治疗包括施用化疗剂、小分子、放射治疗或基于核酸的治疗。38.如权利要求37所述的用途，其中所述基于核酸的治疗包括施用阳离子脂质体复合物，所述阳离子脂质体复合物包含表达野生型P53的质粒DNA。39.一种制备靶向的美法仑阳离子脂质体复合物的方法，所述方法包括: (a)在乙醇中制备包含一种或多种阳离子脂质的脂质溶液。 (b)制备美法仑的溶液； (C)将所述脂质溶液与所述美法仑的溶液混合； (d)将脂质与美法仑的所述混合物注入水溶液中，从而形成美法仑阳离子脂质体； (e)将所述美法仑阳离子脂质体与配体混合以形成所述靶向的美法仑阳离子脂质体，其中所述配体直接与所述阳离 子脂质体复合，但不是与所述阳离子脂质体化学偶联。40.如权利要求39所述的方法，其中所述配体是抗体、抗体片段或蛋白质，包括单链Fv抗体片段，如抗转铁蛋白受体单链Fv (TfRscFv)。41.如权利要求39所述的方法，其中在无水乙醇加盐酸中制备所述美法仑的溶液。42.如权利要求39所述的方法，其中所述脂质溶液包含1，2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷(DOTAP)和1，2- 二油酰基-sn-甘油基_3_磷酰乙醇胺(DOPE)。43.如权利要求39所述的方法，其中在约ImM至约200mM或约50mM至约200mM的浓度下制备所述美法仑的溶液。44.如权利要求39所述的方法，其中脂质:美法仑的所述摩尔比是约0.1:1至约5:1，更适合地约0.5:1至约2:1或甚至更适合地约1:1。45.如权利要求39所述的方法，其中配体:脂质的所述重量比是约0.01:1至约0.5:1，更适合地约0.3:1至约0.4:1。4...
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