本发明专利技术提供了通过抗原体内靶向于树突细胞调节免疫的组合物。组合物包含：在其上具有多个金属螯合基团的含抗原膜囊泡或含抗原脂质体的制备物；以及树突细胞上受体的配体，经由配体上金属亲和标记连接于金属螯合基团的配体。组合物进一步包含免疫调节因子。也提供制备组合物的方法。本发明专利技术进一步提供了调节免疫紊乱的方法和治疗肿瘤和感染的方法。
【技术实现步骤摘要】
此处描述的本专利技术一般涉及为了疾病预防或为了治疗目的调节免疫反应而将膜相关抗原(Ag)靶向于树突细胞(DC)的制备物的组合物。更加特别地，本专利技术涉及修饰含 Ag膜的方法，以实现了靶向分子和免疫调节因子的嫁接(engraftment)和/或掺入，允许经修饰的膜体内靶向子DC，并且有效地诱导或抑制免疫反应。甚至更加特别地，本专利技术涉及能够用于修饰含Ag膜结构的组合物，例如脂质体或质膜囊泡(PMV)，以实现所述膜体内有效地靶向DC，因而调节免疫性，并且使它们在免疫治疗中能够用作疫苗或疫苗样试剂以预防或治疗人类和动物疾病。背景领域树突细胞(DC)是一个罕见的抗原递呈细胞(APC)群，能够独特地刺激原发免疫反应，它们在癌症免疫治疗中的用途引发了很强的兴趣。1迄今，利用DC刺激有效免疫反应的尝试主要集中在涉及离体(ex vivo)DC操作的过程。这个方法通常要求从患者分离DC，数量扩增，荷载抗原(Ag)(参考文献2-5)，然后重新引入患者。虽然这个过程在原理上很简单，但是有与分离和培养这类罕见细胞群相关的种种困难。6’7显然，体内将Ag直接递送到 DC并且引发适当免疫反应的策略具有巨大的临床潜能。DC源自骨髓中的祖细胞，作为未成熟细胞迁移到外周组织，在那里它们内吞Ag并进行复杂的成熟过程。Ag经由很多表面分子被内吞，包括补体受体(例如，CDllc/CD18)和内吞受体(例如，DEC-205、DC-SIGN和I10Il样受体)。在Ag获得过程中，未成熟DC也接受例如细菌细胞壁脂多糖(LPS)的病原体相关分子形式的“危险信号”，或者经由例如IFN-Y 的细胞因子的炎性刺激。然后DC迁移到次级淋巴器官，成熟成为感受态APC8。受体例如 CDllc/CD18、DEC-205、DC-SIGN和I10Il样受体在Ag捕获和递呈过程中扮演关键角色，并且主要表达在DC上。因此可以想象这些受体也能够用于体内Ag直接靶向DC。与这个观念一致，已经显示由C，当与炎性刺激剂(例如抗CD40抗体)共同给予时诱导T细胞激活9’ 10O相反，在没有这样的炎性刺激剂存在下，经由&FV靶向DC的抗原诱导了 T细胞的无应答性。合成脂质体具有递送大量Ag至DC的潜能(参考文献11)，但是至今在实践中很难完成它们靶向特异性DC表面分子12’13。显然，体内联合脂质体Ag运输能力和分子识别直接靶向DC有或没有“危险信号”的多重Ag的特异性之有效策略将在简化DC免疫治疗特别是对于癌症、感染和自身免疫疾病具有巨大的潜能。国际申请号PCT/AU00/00397(公开号WO 00/64471)中描述了当体内给予修饰的生物或合成膜或脂质体时，为了改变免疫的目的或者为了将药物和其它试剂靶向特异细胞类型或组织而修饰生物或合成膜或脂质体的方法。通过金属螯合基团的掺入或附着完成了所述膜或脂质体的修饰，因而允许拥有金属亲和标记的一个或多个靶向分子的嫁接。然而，通过将Ag靶向DC诱导的免疫反应的性质关键性地依赖于特异性免疫调节因子，例如细胞因子或“危险”信号，的存在，在PCT/AU00/00397中没有公开或提示体内引发合适的免疫反应要求膜的修饰或需要免疫调节因子。专利技术概要 本专利技术的目的，这个申请的主题，是通过修饰所述膜提供将含有Ag的脂质体和 PMV体内靶向DC的组合物，其中所述膜的修饰是经由适当免疫调节因子或“危险信号”的掺入以及能够将修饰膜靶向DC表面受体从而引发适当免疫反应的配体的嫁接。为了增强免疫以预防或治疗例如各种癌症和感染的疾病，或者为了以能够用于治疗或预防移植排斥的方式抑制对特定自体Ag的免疫，或抑制自身免疫疾病例如I型糖尿病、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和多发性硬化症的影响，所述组合物能够用作疫苗或用于免疫治疗。进一步地本专利技术的目的是提供制备合适的组合物的方法以及利用所述组合物治疗的方法。根据本专利技术的第一个实施方案，提供了通过将抗原体内靶向于树突细胞调节免疫的组合物，所述组合物包含其表面具有多个金属螯合基团的含抗原膜囊泡或含抗原脂质体的制备物；以及所述树突细胞上受体的配体，所述配体经由所述配体上金属亲和标记连接于所述金属螯合基团；其中，所述含抗原囊泡或脂质体包括免疫调节因子。根据本专利技术的第二个实施方案，提供了通过将抗原体内靶向于树突细胞制备调节免疫反应的组合物的方法，所述方法包括如下步骤i)制备含抗原膜囊泡或含抗原脂质体；ii)通过至少一种免疫调节因子的掺入修饰所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体；iii)通过两性分子的掺入进一步修饰所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体，其中所述两性分子当掺入于其中时包含处于所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体表面的螯合基团； 以及iv)将步骤(iii)的产物与所述树突细胞上受体的配体接触，其中所述配体包括结合于所述螯合基团的金属亲和标记。根据本专利技术的第三个实施方案，提供了调节受试者免疫反应的方法，所述方法包括给予所述受试者根据第一个实施方案的组合物。根据本专利技术的第四个实施方案，提供了预防或治疗受试者肿瘤的方法，所述方法包括给予受试者根据第一个实施方案的组合物，其中包含在所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体内的所述抗原是肿瘤抗原。根据本专利技术的第五个实施方案，提供了预防或治疗受试者感染的方法，所述方法包括给予受试者根据第一个实施方案的组合物，其中包含在所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体内的所述抗原是来自引起感染的物质(agent)的抗原。根据本专利技术的第六个实施方案，提供了根据第一个实施方案的组合物制备调节受试者免疫反应的药剂的用途。根据本专利技术的第七个实施方案，提供了根据第一个实施方案的组合物制备预防或治疗受试者肿瘤的药剂的用途。根据本专利技术的第八个实施方案，提供了根据第一个实施方案的组合物制备预防或治疗受试者感染的药剂的用途。通过阅读下面本专利技术的详述，本专利技术其它的实施方案将显而易见，其中那里的描述将是之后简要描述的附随图例的参考。附图说明图1显示了新型螯合脂质(NTA)3-DTDA的结构。图IB是掺入进由棕榈酰-油酰-磷酸卵磷脂(POPC)和磷脂酰-乙醇胺-聚乙二醇2_(PE-PEG2tlJ组成的含抗原(Ag)隐形脂质体(SL)的(NTA)3-DTDA脂质图示。相似地，图IC是与图IB的那些组成相似但是没有能与荷抗原的肿瘤细胞来源的质膜囊泡(PMV)融合的PE-PEG·的脂质体图示。SL(B)和修饰的PMV(C)两个例子中，也能包括脂质示踪物PC-B0DIPY (未显示)以促进脂质体或修饰的PMV的追踪。(NTA)3-DTDA允许组氨酸标记的抗DEC-205和⑶Ilc的kFv Ab嫁接在脂质体上或修饰的PMV表面，从而，将这些分子靶向DC的表面分子例如DEC-205和⑶11c。图2显示了嫁接了 CDlldcFv和DEC-2054cFv的PMV和SL结合于DC。至于图 2A，源于B16-0VA细胞的PMV与由POPC、(NTA) 3_DTDA和PC-B0DIPY组成的脂质体融合。然后PMV在与LTC-DC孵育和流式细胞仪定量分析细胞结合的BODIPY荧光之前，嫁接对照肽 (PMV-L2)、CDl Ic-ScFv (PMV-CDllc)或 DEC-205-ScFv (PMV-DEC-205)。图 2B 显示了结合于相似嫁接的由POP本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种通过抗原体内靶向于树突细胞调节免疫的组合物，所述组合物包含：在其表面上具有多个金属螯合基团的含抗原膜囊泡或含抗原脂质体的制备物；以及所述树突细胞上受体的配体，所述配体经由所述配体上金属亲和标记连接于所述金属螯合基团；其中，所述含抗原囊泡或脂质体包括免疫调节因子。
【技术特征摘要】
2003.08.21 AU 20039045131.一种通过抗原体内靶向于树突细胞调节免疫的组合物，所述组合物包含在其表面上具有多个金属螯合基团的含抗原膜囊泡或含抗原脂质体的制备物；以及所述树突细胞上受体的配体，所述配体经由所述配体上金属亲和标记连接于所述金属螯合基团；其中，所述含抗原囊泡或脂质体包括免疫调节因子。2.根据权利要求1的组合物，其中所述含抗原膜囊泡选自肿瘤衍生的质膜囊泡、淋巴细胞衍生的质膜囊泡、白细胞衍生的质膜囊泡以及细菌、原生动物、病毒或真菌的膜制备物。3.根据权利要求1的组合物，其中所述含抗原脂质体是隐性脂质体。4.根据权利要求1的组合物，其中所述含抗原的膜囊泡或脂质体的抗原包含多个不同抗原。5.根据权利要求1的组合物，其中所述配体选自抗体、抗体片段和结构域抗体。6.根据权利要求5的组合物，其中所述抗体片段是单链抗体片段。7.根据权利要求1的组合物，其中所述配体上的所述金属亲和标记是六组氨酸。8.根据权利要求1的组合物，其中所述免疫调节因子选自危险信号、细胞因子、趋化因子、激素或生长因子样分子以及编码前述任何分子的DNA。9.根据权利要求8的组合物，其中所述危险信号是细菌脂多糖。10.根据权利要求8的组合物，其中所述细胞因子选自干扰素-Y，白细胞介素-2、白细胞介素_4、白细胞介素-10、白细胞介素-12和转化生长因子-β。11.制备通过抗原体内靶向于树突细胞调节免疫反应的组合物的方法，所述方法包含如下步骤i)制备含抗原膜囊泡或含抗原脂质体； )通过至少一种免疫调节因子的掺入修饰所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体；iii)进一步通过两性分子的掺入修饰所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体，其中所述两性分子包括当掺入在其中时处于所述含抗原膜囊泡或含抗原脂质体表面的螯合基团；以及iv)将步骤(iii)的产物与所述树突细胞上受体的配体接触，其中所述配体包括用于结合于所述螯合基团的金属亲和标记。12.根据权利要求11的方法，其中步骤(i)中制备的所述含抗原膜囊泡选自肿瘤衍生的质膜囊泡、淋巴细胞衍生的质膜囊泡、白细胞衍生的质膜囊泡以及细菌、原生动物、病毒或真菌的膜制备物。13.根据权利要求11的方法，其中步骤(i)中制...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·奥尔廷，C·R·帕里什，
申请(专利权)人：利普泰克有限公司，
类型：发明
国别省市：AU
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