本发明专利技术公开了包含重组艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase，IDS)的组合物。所述IDS组合物的糖基化模式和甲酰甘氨酸含量不同于Elaprase，并且所述IDS组合物具有更好的药效且与常规药剂相比更安全，因此可有效地用于治疗亨特综合征(Hunter?syndrome)。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗亨特综合征(Hunter syndrome)的组合物(其包含重组人艾杜糖醒酸-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,下文中称为“ IDS”))、包含所述组合物的制剂、以及用于制备所述组合物和制剂的方法。更特别地，根据本专利技术的用于治疗亨特综合征的组合物包含具有SEOID NO:1所示氨基酸序列的IDS作为活性成分，其中位于SEO ID NO:1之IDS氨基酸序列中第59位的半胱氨酸残基以65%或更高的摩尔比、优选以75%或更高的摩尔比、更优选以80%或更高的摩尔比转化为甲酰甘氨酸(FGly:2_氨基-3-氧代丙酸)。此外，包含在用于治疗亨特综合征的组合物中的IDS含有量为2.0至4.0摩尔(优选量为2.3至3.5摩尔，更优选量为2.5 至 3.0 摩尔)/ 摩尔 I DS 的甘露糖-6-憐酸(mannose-6-phosphate)。用于制备根据本专利技术的用于治疗亨特综合征之组合物的方法包括:(I)对用编码由SEO ID NO:1所示之IDS的基因转化的重组细胞株进行培养，并获得培养物；和(2)通过阴离子交换色谱、疏水色谱、阳离子交换色谱和亲和色谱对该培养物进行，其特征在于，所述重组细胞株是在水解产物存在下进行培养，并且所述阳离子交换色谱使用PH4.0 至6.0的洗脱缓冲液来进行。由于与常规产品相比在安全性和药效方面具有优势，所以包含IDS的治疗组合物以及包含所述组合物的制剂可有效地用于治疗亨特综合征。
技术介绍
亨特综合征或黏多糖忙积症II型(mucosaccharidosis type II)是溶酶体忙积症(lysosomal storage disease, LSD),其中黏多糖(也称为糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAG))因IDS缺乏而未正确分解并在身体内累积。随着GAG继续在身体各处细胞中累积，亨特综合征的多种征兆变得更加明显。患有亨特综合征的一些人的身体表现包括明显的面部特征和大的头部。亨特综合征中具有代表性的症状是由于肝肿大或脾肿大而增大的腹部、耳聋、瓣膜性心脏病(valvular heart disease)、阻塞性呼吸道疾病(obstructive airway disease)以及睡眠呼吸暂停。此外，亨特综合征可影响主要关节,导致关节僵硬和运动受限。在亨特综合征的一些病例中，中枢神经系统受牵连导致发育延缓和神经系统问题。已知亨特综合征的发生率为I / 162，000并且是染色体X-连锁的隐性形式的遗传病，因此给患者及家人带来极大痛苦。因此，关于亨特综合征的治疗已经进行了多种试验，包括骨髓移植、酶替代和基因治疗。虽然骨髓移植能够终止大多数症状，但是难以找到与所有患者匹配的HLA(人白细胞抗原)。此外，骨髓移植是伴随有若干副作用的外科大手术，这样的副作用包括如果HLA不是匹配的，则患者的生命将处于高风险中。用于亨特综合征的基因治疗借助于病毒载体(例如腺病毒或反转录病毒)或非病毒载体将正常的IDS基因递送到体内。然而,基因治疗仍只是实验技术，并没有在临床上应用。至于用于亨特综合征的酶替代治疗，其施用在外部产生的IDS并且优势是简单。然而，酶替代必须持续进行，这会带来高费用。使用重组DNA技术生产的Elaprase? (shire Pharmaceuticals Group)被FDA批准作为用于亨特综合征的酶替代治疗剂。然而，该药物非常昂贵且存在效果和安全性差的缺点。如上所述，尽管已经开发了多种用于亨特综合征的治疗，但是仍迫切需要表现出高疗效及高安全性的新治疗和药剂(agent)。
技术实现思路
技术问题本专利技术的一个目的是克服现有技术中遇到的问题并提供用于治疗亨特综合征的组合物和包含该组合物的制剂，所述组合物包含作为活性成分的重组IDS，所述重组IDS保证高的疗效和安全性并通过改进的培养和纯化过程来生产。本专利技术的另一个目的是提供用于制备用于治疗亨特综合征之组合物和包含所述组合物之制剂的方法。问题的解决方案为了实现上 述目的，本专利技术提供用于治疗亨特综合征的组合物，其包含具有SEOID NO:1所示氨基酸序列的重组IDS作为活性成分，其中在59位的半胱氨酸残基以65%或更高的摩尔比、优选以75%或更高的摩尔比、更优选以80%或更高的摩尔比转化为甲酰甘氨酸(FGly)。IDS (在本文中还称为艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶或I2S)在从人的肝、肾或胎盘分离和纯化时具有 56kDa 的分子大小(Bielicki, J 等(1990)Biochem, J.,271:75 ~86)。IDS作为550个氨基酸的单体蛋白质而表达，并且在切割掉25个氨基酸的信号肽之后作为525个氨基酸的成熟活性蛋白质而分泌到培养基中。IDS的分子量随着糖基化而变化，并且发现在用内切糖苷酶F处理后范围为约60至90kDa，如通过SDS-PAGE所测量的。IDS包含两个二硫键和八个N-连接的糖基化位点，并且在经过翻译后修饰之后作为糖蛋白而产生，在上述翻译后修饰中，N-连接的糖基化位点在真核生物中被复合的、杂合的和高甘露糖型寡糖链所占据。IDS 一旦分泌到培养基中，就可以在经过典型分离和纯化过程之后作为药物使用。IDS可以是具有多种糖基化模式的糖蛋白形式，这取决于多种因素，包括例如，IDS基因重组、转化(例如，所使用的细胞系)、培养和纯化技术。在本专利技术中，公开了甘露糖-6-磷酸(M6P)的含量和CyS-59向FGly的转化率对IDS的疗效和安全性具有重大影响。甘露糖-6-磷酸(M6P)残基的存在允许酶与细胞表面的M6P受体特异性结合，导致酶的细胞内化，溶酶体的靶向和积聚的GAG的后续分解代谢。IDS的生物活性还取决于保守的半胱氨酸(第59位)向甲酰甘氨酸的后修饰。除非另有说明，否则本文使用的术语“IDS”是指与碳水化合物相连的IDS蛋白质，SP，糖基化IDS。本专利技术的IDS优选地具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列，但不限于此。对于本领域中具有普通知识的那些人(下文中称为“普通技术人员”)而言应显而易见的是，只要使IDS保留期望的活性，那么其中在SEQ ID NO:1的氨基酸序列的一些氨基酸残基上发生突变(例如插入、缺失和替换)的任何氨基酸序列均落入本专利技术的范围内。本文使用的术语IDS的“糖基化模式”是指与所得IDS的8个糖基化位点结合的寡糖的特征(例如，寡糖的糖基化位点和种类)。在一个实施方案中，包含在根据本专利技术用于治疗亨特综合征之组合物中的IDS具有与已知的(SEQ ID NO:1)相同的氨基酸序列，但是具有不同的糖基化模式和不同的第59位半胱氨酸向甲酰甘氨酸的转化率，如上所述(参照实施例1-5和1-6)。换言之，在根据本专利技术的用于治疗亨特综合征之组合物中使用的IDS具有SEQ IDNO:1的氨基酸序列，其在第59位的半胱氨酸以65%或更高的摩尔比、优选以75%或更高的摩尔比、更优选以80%或更高的摩尔比向甲酰甘氨酸(FGly)转化，而Elaprase的转化率为约50% (Genet Med2006:8(8):465-473)。已知甲酰甘氨酸密切参与IDS降解底物的能力(即IDS的活性)。因此，因为本专利技术的组合物不同于常规药剂Elaprase，所以根据本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于治疗亨特综合征的组合物，其包含具有SEQ?ID?NO：1的氨基酸序列的IDS作为活性成分，其中在所述IDS氨基酸序列中第59位的半胱氨酸残基以65％或更高的摩尔比转化为甲酰甘氨酸(FGly)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.08 KR 10-2012-0012718;2011.06.24 US 61/501.用于治疗亨特综合征的组合物，其包含具有SEQID NO:1的氨基酸序列的IDS作为活性成分，其中在所述IDS氨基酸序列中第59位的半胱氨酸残基以65 %或更高的摩尔比转化为甲酰甘氨酸(FGly)。2.权利要求1所述的组合物，其中在所述IDS氨基酸序列中第59位的半胱氨酸残基以75%或更高的摩尔比转化为FGly。3.权利要求1所述的组合物，其中所述具有SEQID NO:1氨基酸序列的IDS含有量为2.0至4.0摩尔/摩尔IDS的甘露糖-6-磷酸。4.权利要求3所述的组合物，其中所述具有SEQID NO:1氨基酸序列的IDS含有量为2.5至3.0摩尔/摩尔IDS的甘露糖-6-磷酸。5.用于治疗亨特综合征的制剂，其包含权利要求1至4中任一项所述的组合物。6.权利要求5所述的制剂，其包含: 可药用载体；和 选自以下的物质:缓冲剂、碳水化合物、稳定剂、抗氧化剂、抑菌剂、螯合剂、辅药、助悬剂、增稠剂和防腐剂。7.用于制备用于治疗亨特综合征之组合物的方法，其包括: (1)对用编码SEOID NO:...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈东奎，郑尧景，白相勋，朴裕昌，徐辰旭，崔龙云，孙锺文，金龙哲，
申请(专利权)人：株式会社绿十字，株式会社医用基因生物，
类型：
国别省市：
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