一种强心中药制剂指纹图谱的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种中药组合物制剂指纹图谱测定方法。该中药组合物是由人参、黄精、苍术、苦参、茯苓、麦冬、制何首乌、地黄、山茱萸、黄连、佩兰等药味组成，可有效治疗糖尿病。该方法采用超高压液相色谱法，该方法具有良好的精密度、稳定性和重复性，符合药物制剂质量控制的要求，可有效控制该中药组合物的质量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到一种中药组合物制剂指纹图谱的测定方法。
技术介绍
ZL 02146570.3公开了一种以补气通络、辛温通络、活血通络、利水通络的药物组合物，该药物组合物具有治疗慢性充血性心力衰竭的作用，其组成包括黄芪或白术、附子、人参或党参、丹参、葶苈子、香加皮或南五加皮、泽泻、玉竹、桂枝、红花、陈皮组成，由于成分较为复杂，制成制剂以后，控制产品质量时，对该中药组合物中尽量多的成分进行鉴别，有利于该药品的安全有效，质量稳定可靠。超高效液相色谱(UPLC)是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC (高效液相色法)的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。超高效液相色谱仪尤其对中药研究领域的发展是一个极大的促进。中药的组分复杂，分离困难等问题都可以通过超高效液相色谱法逐渐解决。在同样条件下，UPLC能分离的色谱峰比HPLC多出一倍还多。在同样条件下，UPLC的分辨率能够认出更多的色谱峰。中药指纹图谱是指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材特性的共有峰的图谱。指纹图谱应该具备指纹性，即:(1)专属性强。指所制订的指纹图谱应该是该中药所独有的、能与其它中药相区别的，其反映的化学信息是具有高度的选择性的；(2)稳定性好。即中药的指纹图谱应该是从某中药的多批次中归纳出的共性，图谱中的共有峰或特征峰应相对稳定；(3)重现性好。所制订的指纹图谱在规定条件下应能再现指纹特征(如共有峰数目、大小、位置等)，其误差应在允许的范围内。只有这样，所制订的指纹图谱才具有实用价值，才可以有效控制药品的质量。采用UPLC指纹图谱方法控制药品质量具有灵敏、快速、简便、准确等特点，通过优选色谱条件测定药品制剂的指纹图谱，可以很好控制药品质量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种中药组合物制剂的指纹图谱测定方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成:黄芪150-450、附子40-120、人参或党参75-225、丹参75-225、葶苈子50-150、香加皮或南五加皮60-180、泽泻75-225、玉竹25-75、桂枝30-90、红花30-90、陈皮25-75 ;本专利技术指纹图谱测定方法采用超高压液相色谱法，色谱条件及测定方法如下: 色谱条件:色谱柱为C18柱，柱温20-50°C，流速0.2-0.8mL.mirT1，检测波长203nm，流动相B为乙腈，D为0.15%磷酸；梯度洗脱:0?Imin，1%?1%B, I?2.5min, 1%?5%B, 2.5?IOmin, 5% ?10%B, 10 ?13min, 10% ?12%B, 13 ?29min, 12% ?21%B, 29 ?42min, 21% ?40%B，42 ~55min，40% ~80%B，55 ~56min，80% ~80%B ； 供试品溶液的配制:取所述中药组合物制剂0.5-2.0g，精密称定，加入60-85%的甲醇25mL，称重，超声15-40min，放置室温，称重，用60-85%的甲醇补足重量，混匀后离心，移取上清液10-15mL蒸干，用IOmL去离子水混悬，上样至装有25mL大孔吸附树脂的层析柱，先用200mL去离子水洗脱，再用200mL95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液蒸干，干膏用80%甲醇溶解定容至25mL，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液； 测定法:精密吸取供试品溶 液0.5-1.5 μ L，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。本专利技术指纹图谱测定方法色谱条件优选如下:色谱柱优选为Acquity UPLC BEHC18,规格优选为2.1mmX 100mm, 1.7 μ m ;柱温优选为40 °C ;流速优选为0.5mL.mirT1 ;供试品溶液的配制:取所述中药组合物制剂1.(^，精密称定，加入80%的甲醇25!^，称重，超声30min,放置室温,称重,用80%的甲醇补足重量,混匀后在4500rpm离心15分钟,移取上清液13mL蒸干，用IOmL去离子水混悬，上样至装有25mL大孔吸附树脂XAD7HP的层析柱，先用200mL去离子水洗脱，再用200mL95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液蒸干，干膏用80%甲醇溶解定容至25mL，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液； 测定法:精密吸取供试品溶液I μ L，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。本专利技术中药组合物制剂的指纹图谱测定方法，适用的中药组合物制剂原料药的重量比例优选为: 黄芪450、附子112.5、人参或党参225、丹参225、葶苈子150、香加皮或南五加皮180、泽泻225、玉竹75、桂枝90、红花90、陈皮75。或者优选为: 黄芪150、附子40、人参或党参225、丹参225、葶苈子50、香加皮或南五加皮180、泽泻75、玉竹75、桂枝30、红花90、陈皮25。或者优选为: 黄芪250、附子112.5、人参或党参200、丹参120、葶苈子135、香加皮或南五加皮150、泽泻200、玉竹60、桂枝75、红花75、陈皮60。或者优选为: 黄芪255、附子115、人参或党参180、丹参115、葶苈子145、香加皮或南五加皮158、泽泻190、玉竹68、桂枝80、红花80、陈皮68。本专利技术中药组合物制剂的指纹图谱测定方法中，适用该中药组合物制剂的剂型优选为片剂、胶囊剂、口服液或颗粒剂。本专利技术中药组合物制剂的指纹图谱测定方法，适用的该中药组合物胶囊剂的制备方法优选为: (I)将黄芪、葶苈子、泽泻、人参或党参、香加皮或南五加皮按照比例量称取加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30 (60°C热测)的清膏，备用； (2 )桂枝、陈皮按照比例蒸馏提取挥发油，提油后的水溶液滤过，备用，残渣再加8倍量水煎煮I小时，滤过，合并水煎液，备用； (3)附子、丹参、玉竹、红花加水9倍量煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，与步骤(2)中桂枝、陈皮水煎液合并，浓缩至相对密度为1.25-1.30 (60°C热测)清膏，搅拌中加入乙醇，至醇浓度70%，4°C以下静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1.30 (60°C热测)清膏，与步骤(1)的醇提清膏混合，65_70°C烘干； (4)将步骤(3)所得干膏粉碎成100目粉，加70%乙醇适量制粒，喷入桂枝、陈皮挥发油，混匀，装胶囊，即得。上述中药组合物的其他剂型按比例称取原料药后，采用常规的制备方法制备，例如，范碧亭《中药药剂学》(上海科学出版社1997年12月第I版)记载的制备工艺，制成药剂学可接受的常规剂型。为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如:填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药组合物制剂指纹图谱测定方法，该中药组合物制剂是由如下重量份的原料药制成：黄芪?150?450、附子40?120、人参或党参75?225、丹参75?225、葶苈子50?150、香加皮或南五加皮60?180、泽泻75?225、玉竹25?75、桂枝30?90、红花30?90、陈皮25?75；其特征在于该方法采用超高压液相色谱法，色谱条件及测定方法如下：色谱条件：色谱柱为C18柱，柱温20?50℃，流速0.2?0.8mL.min?1，检测波长203nm，流动相B为乙腈，D为0.15%磷酸；梯度洗脱：0～1min，1%～1%B，1～2.5min，1%～5%B，2.5～10min，5%～10%B，10～13min，10%～12%B，13～29min，12%～21%B，29～42min，21%～40%B，42～55min，40%～80%B，55～56min，80%～80%B；供试品溶液的配制：取所述中药组合物制剂0.5?2.0g，精密称定，加入60?85%的甲醇25mL，称重，超声15?40min，放置室温，称重，用60?85%的甲醇补足重量，混匀后离心，移取上清液10?15mL蒸干，用10mL去离子水混悬，上样至装有25mL大孔吸附树脂的层析柱，先用200mL去离子水洗脱，再用200mL95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液蒸干，干膏用80%甲醇溶解定容至25mL，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液；测定法：精密吸取供试品溶液0.5?1.5μl，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。...

【技术特征摘要】
1.一种中药组合物制剂指纹图谱测定方法，该中药组合物制剂是由如下重量份的原料药制成:黄芪150-450、附子40-120、人参或党参75-225、丹参75-225、葶苈子50-150、香加皮或南五加皮60-180、泽泻75-225、玉竹25-75、桂枝30-90、红花30-90、陈皮25-75 ； 其特征在于该方法采用超高压液相色谱法，色谱条件及测定方法如下: 色谱条件:色谱柱为C18柱，柱温20-50°C，流速0.2-0.8mL.mirT1，检测波长203nm，流动相B为乙腈，D为0.15%磷酸；梯度洗脱:0~Imin，1%~1%B, I~2.5min, 1%~5%B, 2.5~IOmin, 5% ~10%B, 10 ~13min, 10% ~12%B, 13 ~29min, 12% ~21%B, 29 ~42min, 21% ~40%B, 42 ~55min, 40% ~80%B, 55 ~56min, 80% ~80%B ； 供试品溶液的配制:取所述中药组合物制剂0.5-2.0g，精密称定，加入60-85%的甲醇25mL，称重，超声15-40min，放置室温，称重，用60-85%的甲醇补足重量，混匀后离心，移取上清液10-15mL蒸干，用IOmL去离子水混悬，上样至装有25mL大孔吸附树脂的层析柱，先用200mL去离子水洗脱，再用200mL95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液蒸干，干膏用80%甲醇溶解定容至25mL，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤液，作为供试品溶液； 测定法:精密吸取供试品溶液0.5-1.5 μ 1，注入超高压液相色谱仪，记录色谱图，即得。2.如权利要求1所述的指纹图谱测定方法，其特征在于所述色谱柱为AcquityUPLCBEH C18,规格为 2.1mmX 100mm, 1.7 μ m ;柱温为 40°C ;流速为 0.5 mL.mirT1 ； 供试品溶液的配制:取所述中药组合物制剂1.0g，精密称定，加入80%的甲醇25mL，称重，超声30min，放置室温，称重，用80%的甲醇补足重量，混匀后在4500rpm离心15分钟，移取上清液13mL蒸干，用IOmL去离子水混悬，上样至装有25mL大孔吸附树脂XAD7HP的层析柱,先用200mL去离子水洗脱，再用200mL95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱液蒸干，干膏用80%甲醇溶解定容至25mL，0.22um微孔滤膜过滤，取续滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜新刚，李叶双，贾继明，乔莉，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：