SUCLA2基因突变体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸、分离的多肽、筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的方法、筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的系统以及用于筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的试剂盒。其中，分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸，与SEQ?ID?NO：1相比，具有c.C308A突变。通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感线粒体DNA耗竭综合征。

【技术实现步骤摘要】
SUCLA2基因突变体及其应用
本专利技术涉及SUCLA2基因突变体及其应用。具体地，本专利技术涉及分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸、分离的多肽、筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的方法、筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的系统以及用于筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的试剂盒。
技术介绍
线粒体呼吸链复合酶(Multiplemitochondrial respiratory chain, MRC)缺陷是导致线粒体疾病的重要原因，受多种分子遗传机制影响，如线粒体DNA(mtDNA)缺失，线粒体tRNA点突变，线粒体RNA翻译缺陷，线粒体DNA(mtDNA)耗竭，呼吸链亚基组装或调节功能缺陷，线粒体蛋白质输入受损。儿童期发病的线粒体疾病主要由mtDNA耗竭导致(mitochondrial DNA depletion syndromes, MDS1MIM 251880,线粒体 DNA 耗竭综合征)，MDS不同于其他线粒体疾病,它是一数量上出现缺陷的疾病而非质量上的问题,表现为mtDNA拷贝数减少，而线粒体本身数目可能正常，缺失或是增多，导致细胞中呼吸链复合体的合成与ATP合成下降，降低了线粒体的能量代谢功能，为常染色体隐性遗传，具有遗传和临床上的异质性。临床上可分为肝脑病变型、肌肉病变型、其他型如Alpers综合征等三种类型。研究表明，许多核基因编码的基因突变与上述疾病相关。然而，现阶段对线粒体DNA耗竭综合征的研究仍有待深入。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出线粒体DNA耗竭综合征·(有时也称为“MDS”)的致病基因上的新突变。本专利技术是基于专利技术人的下列工作而完成的:专利技术人通过高通量外显子组测序联合候选基因突变验证的方法确定了线粒体DNA耗竭综合征的致病基因上的新突变(SUCLA2，c.C308A)。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸(即SUCLA2基因突变体)。根据本专利技术的实施例，该核酸与SEQ ID Ν0:1相t匕，具有C.C308A突变。根据本专利技术的实施例，专利技术人确定了 SUCLA2基因突变体，该突变体与MDS的发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感线粒体DNA耗竭综合征。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种分离的多肽。根据本专利技术的实施例，该多肽与SEQ ID N0:2相比，具有p.Alal03Asp突变。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易感线粒体DNA耗竭综合征。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括以下步骤:从生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID NO:1相比，具有c.C308A突变是所述生物样品易感线粒体DNA耗竭综合征的指示。通过根据本专利技术实施例的筛选易感线粒体DNA耗竭综合征(即MDS)的生物样品的方法，可以有效地筛选易感MDS的生物样品O根据本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的系统。根据本专利技术的实施例，该系统包括:核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列与SEQID NO:1相比，是否具有c.C308A突变，判断所述生物样品是否易感线粒体DNA耗竭综合征。利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的方法，从而可以有效地筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品。根据本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种用于筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒含有:适于检测SUCLA2基因突变体的试剂，其中与SEQ ID N0:1相比，所述SUCLA2基因突变体具有C.C308A突变。利用根据本专利技术的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。 【附图说明】本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:图1显示了根据本专利技术实施例的筛选易感MDS的生物样品的系统及其组成部分的示意图，其中，A为根据本专利技术实施例的筛选易感MDS的生物样品的系统的示意图，B为根据本专利技术实施例的核酸提取装置的示意图，C为根据本专利技术实施例的核酸序列确定装置的示意图；图2显示了根据本专利技术实施例的对患者PI的SUCLA2基因c.C308A突变位点的Sanger测序验证峰图；图3显示了根据本专利技术实施例的对患者PII的SUCLA2基因c.C308A突变位点的Sanger测序验证峰图；以及图4和图5分别显示了根据本专利技术实施例的对患者PI和PII的父母的SUCLA2基因c.C308A突变位点的Sanger测序验证峰图。【具体实施方式】下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。SUCLA2基因突变体根据本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸。根据本专利技术的实施例，与SEQ ID Ν0:1相比，该核酸具有C.C308A突变。在本文中所使用的表达方式“编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸”，是指与编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的基因相对应的核酸物质，即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的编码基因(即SUCLA2基因突变体)相对应的脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本专利技术的一个具体示例，前面所述的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸为DNA。根据本专利技术的实施例，专利技术人确定了 SUCLA2基因的突变体，该突变体与线粒体DNA耗竭综合征的发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感线粒体DNA耗竭综合征，也可以通过检测该突变体在生物体中是否存在，可以有效地预测生物体是否易感线粒体DNA耗竭综合征。 该编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸，是本申请的专利技术人通过高通量外显子组测序联合候选基因突变验证的方法确定的线粒体DNA耗竭综合征的致病基因上的新突变。并且，在现有技术中并未见SUCLA2基因上的c.C308A突变与MDS相关的报道。[0021 ] 野生型SUCLA2基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列:ATGGCGGCCTCCATGTTCTACGGCAGGCTAGTGGCCGTGGCCACCCTTCGGAACCACCGGCCTCGGACGGCCCAGCGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸，其特征在于，与SEQ?ID?NO：1相比，所述核酸具有c.C308A突变，任选地，所述核酸为DNA。

【技术特征摘要】
1.一种分离的编码琥珀酸辅酶A连接酶β亚基突变体的核酸，其特征在于，与SEQ IDNO:1相比，所述核酸具有c.C308A突变， 任选地，所述核酸为DNA。2.一种分离的多肽，其特征在于，与SEQ ID Ν0:2相比，所述分离的多肽具有p.Alal03Asp 突变， 任选地，所述多肽是由权利要求1所述的核酸编码的。3.一种筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的方法，其特征在于，包括以下步骤: 从所述生物样品提取核酸样本； 确定所述核酸样本的核酸序列； 所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0:1相比，具有C.C308A突变是所述生物样品易感线粒体DNA耗竭综合征的指示， 任选地，所述生物样品为选自人体血液、皮肤、毛发和肌肉的至少一种， 任选地，所述核酸样本为全基因组DNA。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，从所述生物样品提取核酸样本进一步包括: 从所述生物样品提取RNA样本，优选所述RNA样本为mRNA ；以及 基于所述RNA样本，通过反转录反应，获得cDNA样本，所述cDNA样本构成所述核酸样本。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，确定所述核酸样本的核酸序列进一步包括: 针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及 对所述核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果，任选地，采用选自Hiseq2000、S0LiD、454和单分子测序装置的至少一种对所述核酸测序文库进行测序， 任选地,针对所述核酸样本,构建核酸测序文库进一步包括: 利用SUCLA2基因外显子特异性引物，对所述核酸样本进行PCR扩增；以及 针对所得到的扩增产物，构建所述核酸测序文库， 任选地，所述SUCLA2基因外显子特异性引物具有如SEQ ID NO:3_4所示的核苷酸序列。6.一种筛选易感线粒体DNA耗竭综合征的生物样品的系统，其特征在于，包括: ...

【专利技术属性】
技术研发人员：方明艳，刘轩竹，王海荣，王俊，汪建，杨焕明，
申请(专利权)人：深圳华大基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：