一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于医学标本检测技术领域，具体涉及一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用。所述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒，包括液化剂R1和液化剂R2，所述液化剂R1为氨水，所述液化剂R2为巯基还原剂的水溶液。本发明专利技术还提供了一种上述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒的应用，用于结核杆菌抗酸染色镜检和分离培养前痰标本的液化。本发明专利技术提供的技术方案与现有技术相比具有以下优点：有利于提高涂片质量，提高阳性检出率和读片效率；优化了现有痰标本的前处理技术，同时满足多种检测样品的要求；有利于痰标本涂片染色镜检和分离培养接种的自动化操作。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于医学标本检测
，具体涉及一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用。所述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒，包括液化剂R1和液化剂R2，所述液化剂R1为氨水，所述液化剂R2为巯基还原剂的水溶液。本专利技术还提供了一种上述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒的应用，用于结核杆菌抗酸染色镜检和分离培养前痰标本的液化。本专利技术提供的技术方案与现有技术相比具有以下优点：有利于提高涂片质量，提高阳性检出率和读片效率；优化了现有痰标本的前处理技术，同时满足多种检测样品的要求；有利于痰标本涂片染色镜检和分离培养接种的自动化操作。【专利说明】一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用
本专利技术属于医学标本检测
，具体涉及一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用。
技术介绍
常规的结核痰标本的检测要求是一个痰标本既要做直接涂片抗酸染色镜检也要作分离培养，涂片染色镜检可以马上出报告，而出报告时间很长的分离培养则用于标本的耐药性试验，目前涂片染色镜检的阳性检出率较低，部分原因是由于结核杆菌在痰标本内的分布是不均匀的，现有技术主要是经手工挑取脓样、干酪样的痰标本直接涂片然后染色镜检，因此在涂片时能不能挑选到含菌部分的痰标本对阳性检出率的高低至关重要，这里面存在着很大的随机误差，因此需要将痰标本液化后再涂片以减少随机误差。《中国防痨杂志》2013年2月，第35卷第2期，P.93和《结核病诊断实验室检验规程》，中国防痨协会基础专业委员会，中国教育文化出版社，2006年I月，P.34中介绍了现有结核痰标本的液化碱处理-直接法和N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠法。上述两种痰标本液化方法主要用于结核杆菌的分离培养而不能用于涂片，因为用强碱液化后痰标本的粘度会大幅降低，涂片做抗酸染色镜检时标本脱片严重。所以目前主要还是手工挑取痰标本直接涂片不作液化处理，只是涂片后需要作分枝杆菌的分离培养时才将痰标本液化，在这里氢氧化钠除了液化剂的作用外还有去除痰中杂菌的作用。如果要将氢氧化钠液化后的痰标本作涂片，那么就得将痰标本作4至10多倍体积比的中和稀释，离心沉淀后涂片。离心过程有可能使细菌扩散，造成环境污染，并且自动化实现的难度也较大，所以无法临床应用。综上所述，采用目前的液化方法处理的痰标本无法用于直接涂片抗酸染色镜检，涂片前痰标本是不作液化处理的，`另外从液化剂的作用机理来看，现有技术强碱是使痰标本中的粘蛋白变性增加水溶性，而巯基还原剂比如N-乙酰-L-半胱氨酸和二硫苏糖醇等是将粘蛋白间的二硫键打开增加水溶性，但是痰液中除了二硫键外还有大量的疏水性的氢键，现有技术并不能有效打开氢键，因此上述液化剂的液化效果并不好，还需要作一倍以上的等体积稀释和离心，多了实验步骤。临床上迫切需要一种能够临床推广，既能提高涂片质量和抗酸染色镜检的阳性检出率同时符合去污处理和分离培养要求，操作简便快捷的结核痰标本液化剂试剂盒及其使用方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是目前的结核杆菌痰标本液化剂无法在不离心的情况下制备出可用于高质量涂片的痰标本，为了克服以上不足，提供了一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是:所述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒，包括液化剂Rl和液化剂R2，所述液化剂Rl为氨水，所述液化剂R2为巯基还原剂的水溶液。液化剂Rl能快速高效地打开痰标本中粘蛋白间疏水性的氢键，而液化剂R2则能快速高效地打开粘蛋白间的二硫键，液化所需液化剂用量少，保证了单位体积细菌数量没有明显下降，省去了离心分离步骤，涂片后玻片上的痰膜不易脱落，作为优选，所述氨水为浓氨水或浓氨水的稀释液，所述浓氨水中氨的质量百分浓度为25~28%。作为优选，所述氨水为浓氨水或浓氨水和水的混合物，所述浓氨水中氨的质量百分浓度为25~28%,所述氨水由重量百分比为(10~100%): (90~0%)的浓氨水和水制备获得。作为优选，所述巯基还原剂选自β -巯基乙醇、N-乙酰-L-半胱氨酸和二硫苏糖醇中的一种或更多种。作为优选，所述液化剂R2中β -巯基乙醇的浓度为3.0-30.0mg/mL,所述N-乙酰-L-半胱氨酸的浓度为1.0-40.0mg/mL,所述二硫苏糖醇的浓度为5.0-50.0mg/mL。本专利技术还提供了一种上述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒的应用，用于结核杆菌抗酸染色镜检和分离培养前痰标本的液化。作为优选，所述结核杆菌痰标本包括干酪样痰、血液痰、粘液痰和唾液中的一种或更多种。作为优选，所述液化剂Rl与结核杆菌痰标本的体积比为(0.05~0.5): (3~5)，液化剂R2与结核杆菌痰标本的体积比为(0.05~0.5): (3~5)。作为优选，所述液化剂Rl、液化剂R2与结核杆菌痰标本通过旋涡震荡搅拌5-10分钟，实现结核杆菌痰标本的液化。作为优选，所述结核杆菌痰标本液化后涂布在玻片上制成涂片用于结核杆菌抗酸染色镜检。作为优选，所述结核杆菌痰标本液化后经去污处理接种于酸性改良罗氏培养基上分离培养。本专利技术提供的技术方案与现有技术相比存在以下优点:1.有利于提闻涂片质量，提闻检出率和读片效率。现有直接涂片技术对痰标本未作液化就直接涂片，随机误差大，不利于质量控制，抗酸染色镜检对于弱阳性标本检出率低。采用本专利技术提供的痰标本液化剂试剂盒能完全液化各种类型的痰标本，既能打开氢键也能打开二硫键，液化后痰标本流动性增加，标本内病菌分布趋于均相化，因此涂片后随机误差大幅降低。液化后痰核被打开，能释放出更多的病菌，大大提高了涂片染色镜检阳性检出率。特别是弱阳性的痰标本中病菌数量较少，容易发生随机误差，本专利技术提供的技术方案更显优势。先将痰标本液化后再涂片，相比较常规直接涂片，痰膜厚薄均匀，痰丝少，背景干净，有利于缩短操作员的显微镜读片时间，大幅降低劳动强度，提供工作效率。2.优化了现有痰标本的前处理技术，同时满足多种检测样品的要求。痰标本的前处理技术也就是液化技术，目前经前处理的痰标本易脱片从而无法用于抗酸染色镜检。并且目前的液化剂不能打开疏水性氢键，需将痰标本作一倍以上的稀释并通过离心分离处理，从而容易造成污染，机械化操作也困难。而本专利技术提供的液化剂的试剂盒可快速高效的打开粘蛋白间的氢键和二硫键，液化剂用量较现有技术大大减少，病菌量也没有明显减少，因此液化痰标本可以直接涂片，省去了离心浓缩，也克服了现有技术的脱片问题。最为突出的是，本专利技术的液化痰标本既可用于抗酸染色镜检的涂片，又可以经去污处理后用于结核杆菌的酸性改良罗氏培养基的分离培养，并不影响结核杆菌的活力，保证了同一标本可以既可用于涂片染色镜检又可用于分离培养。3.有利于痰标本涂片染色镜检和分离培养接种的自动化操作。目前痰标本直接涂片染色镜检只能采用手工操作，主要原因在于痰标本的液化问题，而能用于分离培养的前处理技术不能先用于涂片，这样全自动的涂片染色镜检就不能实现，人工操作的非规范化必然导致结果的较大误差。 本专利技术提供的技术方案解决了各种类型痰标本的液化问题，仅使用较少量的液化剂就能达到痰标本的完全液化，不需要离心步骤，在痰标本的流动性增加以后就可以用机械吸头吸取疲标本，完成涂片、染色和镜检的实验步骤，冋时在完成自动涂片后，也可以将去污剂加入已均相化的痰标本中去污，然后采用直接接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒，其特征在于，包括液化剂R1和液化剂R2，所述液化剂R1为氨水，所述液化剂R2为巯基还原剂的水溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：贺坚慧，
申请(专利权)人：上海微银生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：