检测疟原虫感染的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测患者血液样本中疟原虫感染的方法，其中对样本中的多形核嗜中性粒细胞进行示差分析，并且测定细胞体积和细胞密度的分布、样本中的血小板数量以及样本中血小板细胞密度的分布。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测疟原虫感染的方法专利
本专利技术涉及一种用于检测患者血液样本中疟原虫感染的方法。
技术介绍
疟原虫感染，例如，由病原体恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)、卵形疟原虫(Plasmodiumovale)、三日疟原虫(Plasmodiummalariae)以及诺氏疟原虫(plasmodiumknowlesi)引起的疟疾，是导致全球每年数百万新发病例的元凶。根据世界卫生组织(WHO)的数据显示,每年计算的新发病例的范围为3至5亿人。鉴于对现有治疗疟原虫感染的药物的抗药性的不断发展，因此越来越需要可靠的、价格实惠并迅速可行的诊断方法，此外，该方法能基本上排除假阳性和假阴性的结果。例如，在疟疾感染发病率较低的区域将需要高度敏感的诊断方法来检测这样的少数患者。然而，在有高患病率/发病率的世界各地区，通常也视为世界的贫困地区，非常需要具有高特异性的测试方法，以排除假阳性的结果。(即，要把健康的人作为健康来识别)。一般情况下，也存在问题，不仅要分析数量非常大的患者样本，而且，-如上所述-也必须迅速地执行。因为诊断结果应在不到2小时之内是可用的。如果无法做到这一点，可能需要依据表面性的临床评估来治疗患者。错误的或假阴性/阳性的疟疾诊断的后果是多方面的：对于假阳性的诊断，(无意义的)药物的使用会带来可避免的副作用，就更不用说对卫生系统造成的财政负担，以及由疟原虫形成抗药性的可能性。从2006年的一项研究得出结论，各具95％的敏感度和特异性的诊断测试，仅要求最低限度的基础设施，就可以避免超过10万人死亡以及节省超过4亿的不必要的治疗。(RafaelME,TaylorT,MagillAetal.ReducingtheburdenofchildhoodmalariainAfrica:Theroleofimproveddiagnosis.Nature.2006；444(suppl1):39-48)实际上，一个主要问题出现在寄生虫病如疟疾的诊断，其中，只有当临床怀疑患者实际上患有这种感染，才进行实验室诊断。这会导致特别是在低患病率/发病率的地区，患病的人不能或不能及时得到治疗。例如，据加拿大的一项研究报道(Kainetal,1998,ClinicsinInfectiousDiseases27,142-149)，对于59％的感染疟疾的返港旅客最初不能做出正确的诊断。平均在做出正确诊断以及开始治疗恶性疟原虫之前要经过7.6天，对于间日疟原虫要5.1天。这种延误可导致显著的并发症以及死亡率的提高。(Humareetal,1997,CanadianMedicalAssociationJournal156,1165-1167)对于疟原虫感染的诊断，有多种方法可用：最安全的方法是显微血液检查，但是这种方法耗废人力、时间和设备。受过专门训练的人员用通常的显微方法可以可靠地确定感染的类型和阶段。此外，还存在所谓的快速诊断测试(RapidDiagnosticTests＝RDT)。例如，这里会使用单克隆抗体来检测寄生虫抗原。该测试通常用于识别恶性疟原虫感染。一种诊断疟疾的明显更敏感的方法是聚合酶链反应，然而由于高耗材和耗时对于急性病例不是很合适。同时也把自动化方法算作快速诊断测试(RDT)这一组，该自动化方法由于其高物料通过量出色地适合于覆盖性的测试方法。对此可参见：HanscheidT,PintoBG,PereiraI,ChristinoJM,ValadasE(1999)Avoidingmisdiagnosisofmalaria:anovelautomatedmethodallowsspecificdiagnosis,evenintheabsenceofclinicalsuspicion.EmergingInfectiousdiseases[1999,5(6):836-838]。对于自动化应用，所谓的“自动化细胞计数器”(Automatisierte)被越来越成功地应用。其例子为：Advia2120、SysmexXE-2100以及CellaVisionDM96设备。这种自动化设备，除了它们的物料通过量高之外，还提供了一些优点，如客观性高(不存在取决于观测者的可变性)、消除统计性变化，其通常与人工计数有关(计算较高的细胞数量)、以及确定许多参数，其在人工计数时是不可使用的，以及如前所述的更加高效并且具有成本效益的运用。这些设备可以每小时处理120到150个患者样本。自动化单细胞计数的技术原理不是基于阻抗(电阻)测量就是基于光学系统(散射光测量或吸收测量)。对于阻抗法来说，细胞计数以及它们尺寸的确定是基于对电导率(电阻)变化的检测和测量，该变化是由微粒移动通过小的开口而引起的。微粒，例如血细胞，本身是不导电的，不过却悬浮在导电的稀释剂中。当这种细胞的悬浮液被引导通过开口时，在单个个体细胞通过的时候，两个电极之间的电路的阻抗(电阻)会暂时增加，其中该电极的每一侧都有开口。例如，在WO2005/088301以及在文章"DevelopmentofanAutomatedMalariaDiscriminantFactorUsingVCSTechnology",BriggsCetal.AmJClinPathol2006中描述了通过这样的阻抗测量(见实验部分)来检测疟疾和其它寄生虫感染的方法。有别于阻抗法，光学法包括引导激光束通过稀释的血液样本，该样本在连续的激光束流中被检测。每个经过流通细胞检测区的细胞散射聚焦的光线。然后，经散射的光线由光电探测器检测并且被转换成电脉冲。这里产生的脉冲数量直接与细胞数成正比，其在一段特定的时期内经过检测区。在光学法中，从不同的角度来测量经过检测区的个体细胞的散射光。据此记录有关细胞结构、形状和反射率的信息。这些属性可用于区分不同类型的血细胞，并使用所导出的参数诊断血细胞的与正常值的偏差。通过这两种测量方法获得的数值可借助于鉴别诊断与有意义的诊断结果相结合。诊断方法的敏感度和特异性在鉴别诊断的过程中起着重要的作用，因此，要不断致力于改善这些属性。例如，在WO2005/088301中，关于淋巴细胞和单核细胞的细胞体积的测量值被记录并用作疟疾疾病的参数。具体来说，在此评估了单核细胞群和淋巴细胞群的体积标准偏差，即，它们的异质性。但是，人们已经发现，这些参数对于寄生虫感染的诊断没有足够的特异性，因为其它任何的传染性疾病(例如，感冒)可能也会导致淋巴细胞和单核细胞的体积的改变。此外，血液样本的阻抗测量经验证是容易出错的，例如，测量结果(例如通过所要测试的悬浮液粘度的改变)可能会被更改。同样地，在“DevelopmentofanAutomatedMalariaDiscriminantFactorUsingVCSTechnology”(见上文)中描述到，当存在疟疾感染时，淋巴细胞和单核细胞的体积标准偏差明显不同于正常值。该文的表3中示例性地给出了使用自动化血液测试设备的不同的敏感度和特异性，其中，一部分的敏感度仅为48.6或52％。这使得用常用的测试方法不能达到足够的程度，就要提供具有高敏感度和特异性的方法，即，检测疟原虫的方法能识别生病的患者亦是得这种病的，以及另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测患者血液样本中疟原虫感染的方法，包括a)对样本中的多形核嗜中性粒细胞进行示差分析并且测定细胞体积和细胞密度的分布；b)测定样本中的血小板数量；c)测定样本中血小板细胞密度的分布；d)从在a)到c)中实施的测定中获取样本参数；以及e)相对于预定标准对所述参数进行评估，其中在满足该标准的情况下存在疟原虫感染。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于检测患者血液样本中疟原虫感染的自动化血液分析设备，该设备包括：a)对样本中的多形核嗜中性粒细胞进行示差分析并且测定细胞体积和细胞密度的分布的模块；b)测定样本中的血小板数量的模块；c)测定样本中血小板细胞密度的分布的模块；d)测定通过BASO裂解剂特异性裂解后的非特异性的比例的模块；e)从在a)到d)中实施的测定中获取样本参数的模块；以及f)相对于预定标准对所述参数进行评估的模块，其中在满足该标准的情况下存在疟原虫感染，其中在着色后测定所述嗜中性粒细胞的细胞体积分布，其中所述相对于预定标准对所述参数进行评估的模块f)为疟疾患病率高的国家提供以下的算法1：PLTxMPC/100<47以及PMNx+0.1635x(PLTxMPC/100)<33其中任选地引入子算法：PLT模式-30x％Baso噪音<27以及PeroxYSigma+12/70x％异常>12；和/或为疟疾发病率较低的国家提供以下的算法2：2a.PMN峰+14/140x(PLTxMPC)/l00<342b.Baso噪音>0.0742c.PLT模式+25x％Baso噪音<452d.PeroxYSigma>6.6其中PLT为样本中的血小板数量，MPC为血小板细胞密度的分布，PMNx为多形核嗜中性粒细胞的密度分布；以及Baso噪音为通过BASO裂解剂特异性裂解后的非特异性的比例，PLT模式为ADVIA2120i的仪器设置，以及PeroxYSigma为着色后所测定的嗜中性粒细胞的细胞体积分布，并且其中所述疟原虫感染涉及恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、间日疟原虫(Pl...

【专利技术属性】
技术研发人员：J范登博加特，O海登，
申请(专利权)人：西门子公司，
类型：
国别省市：