一种抗DERLIN‑1人源化抗体的制备制造技术

本发明专利技术涉及一种抗DERLIN‑1人源化抗体的制备，进一步，本发明专利技术涉及一种抗癌细胞表面表达的DERLIN‑1蛋白的人源化抗体，编码该抗体的多核苷酸，包含该多核苷酸的表达载体以及含有所述表达载体的宿主细胞，以及它们在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种抗DERLIN-1人源化抗体的制备
本专利技术所涉及的是生物制药
本专利技术涉及一种抗癌细胞表面表达的DERLIN-1蛋白的人源化抗体，编码该抗体的多核苷酸，包含该多核苷酸的表达载体以及含有所述表达载体的宿主细胞，以及它们在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
技术介绍
肿瘤是对人类威胁最大的恶性疾病之一，其死亡率在世界和我国的各种疾病中分别排在第二位和第三位，严重影响着人类的健康。临床治疗癌症的方法主要是手术切除和放、化疗，但这三大常规治疗手段并没有明显的降低肿瘤的死亡率，其5年生存率仅达10-30％。近年来肿瘤的靶向治疗在临床中取得了令人鼓舞的结果，成为最有前景和最活跃的领域。针对特异表达于肿瘤的，并在肿瘤生长或转移中发挥重要作用的治疗靶点蛋白，采用各种靶向治疗剂特异地阻断干扰治疗靶点的生物学功能，从而发挥影响肿瘤生长转移的治疗作用，将可能有效地治疗恶性肿瘤。在肿瘤的各种靶向治疗药物中，最成功的是抗体类药物。抗体类药物因其特异性好、靶向性强、阻断靶点蛋白的效能高，近年来在治疗肿瘤的研究中已取得了突破性进展。Rituxan是1997年第一个获FDA批准上市的抗肿瘤抗体药物，用于治疗B细胞性非何杰金淋巴瘤。Herceptin于1998年获批准，主要用于HER-2/neu阳性的乳腺癌。Mylotarg(2000)用于治疗急性复发性髓性白血病。近年来，先后获批准用于治疗肿瘤的抗体药物还有Mylotarg、Campath-1H、Zevalin、Bexxer、Erbitux和Avastin等。目前，Rituxan与Herceptin已在临床肿瘤治疗中取得了巨大的成功。尽管目前抗肿瘤单抗药物所针对的肿瘤特异蛋白靶点已经有了几十种之多，例如：CD20(Grillo-LopezAJ.抗CD20的单抗：白血病的治疗的策略和结果.抗肿瘤治疗经验综述.2002；2：323-329；Grillo-LopezAJ.AntiCD20mAbs：modifyingtherapeuticstrategiesandoutcomesinthetreatmentoflymphomapatients.ExpertRevAnticancerTher.2002；2：323-329.)，Her2-neo(MendelsohnJ，BaselgaJ.EGF受体家族作为肿瘤靶向治疗的靶点.癌基因.2000；19：6550-6565；TheEGFreceptorfamilyastargetsforcancertherapy.Oncogene.2000；19：6550-6565.)，VEGF(SchwartzbergLS.Edrecolomab的临床经验：一种治疗结肠癌的单抗.抗肿瘤血液学的综述.2001；40：17-24；SchwartzbergLS.Clinicalexperiencewithedrecolomab：amonoclonalantibodytherapyforcolorectalcarcinoma.CritRevOncolHematol.2001；40：17-24.)，CD33，CD52，EGRFR，CD25，CO17-1A，CEA、CD22、GD2、EGFR、EGF、CD6、CD11a等，但对各种恶性肿瘤的临床治疗来说，抗肿瘤新靶点的靶向治疗药物仍然是远远不够的。由于肿瘤发生发展是一个多因素，多基因突变的过程，仅仅针对少量靶点的靶向治疗药物并不能非常有效地治疗肿瘤，而往往只能延缓这一过程；另外不同的肿瘤有不同的发病机理，具有不同的治疗靶点，需要有不同的靶向治疗药物，因此，肿瘤的临床治疗还需要更多的、针对不同治疗靶点的新药，以期协同发挥作用，更为有效地治疗肿瘤。本专利技术所涉及的单克隆抗体所识别的靶蛋白是细胞膜蛋白Derlin-1。Derlin-1是位于细胞内质网膜上的蛋白，目前的研究显示，它参与了内质网内部错误折叠蛋白向胞浆中转运、降解的过程(YihongYe1，YokoShibata1，ChiYun2，DavidRon2&TomA.Rapoport1.一个参与介导蛋白从内质网到胞浆易位转运的膜蛋白复合物.自然.2004；(429)：841-847；YihongYe1，YokoShibata1，ChiYun2，DavidRon2&TomA.Rapoport1.Amembraneproteincomplexmediatesretro-translocationfromtheERlumenintothecytosol.NATURE.2004；(429)：841-847)，其与突变型SOD1的相互作用与家族性肌萎缩侧索硬化症有关(Nishitoh，H.，Kadowaki，H.，Nagai，A.，Maruyama，T.，Yokota，T.，Fukutomi，H.，Noguchi，T.，Matsuzawa，A.，Takeda，K.，Ichijo，H.ALS-linkedmutantSOD1inducesERstress-andASK1-dependentmotorneurondeathbytargetingDerlin-1.GenesDev.22：1451-1464，2008.)。然而，虽然Derlin-1目前在肿瘤中的表达与作用报道甚少，但仍有报道指出，它在肝癌内皮细胞中受血管内皮生长因子VEGF诱导上调，敲降Derlin-1基因表达可导致肝癌内皮细胞凋亡，生长受到抑制(RanY，JiangY，ZhongX，ZhouZ，LiuH，HuH，LouJN，YangZ.IdentificationofDerlin-1asanovelgrowthfactor-responsiveendothelialantigenbysuppressionsubtractivehybridization[J].BiochemBiophysResCommun.2006，348(4)：1272-1278.)。Derlin-1可通过某种未知机制表达于多种肿瘤细胞和人体内癌组织中癌细胞的表面，且呈极性表达，即只表达于细胞膜的基质面上，而正常组织细胞膜上不表达或低表达，Derlin-1在乳腺癌、结肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、肝癌等九种常见恶性肿瘤中特异高表达，阳性率约60-90％，尤其是在癌细胞膜上特异表达，而21种正常组织中不表达或低表达，且基本未见正常细胞膜表达，具有优异的肿瘤特异性；Derlin-1胞外区抗原表位肽制备兔多抗，用125I标记的Derlin-1抗体进行体内分布及显像研究，结果显示，Derlin-1抗体在肿瘤组织特异聚集，在肿瘤组织的放射强度显著高于其它正常组织，T/NT分布呈现显著的肿瘤特异性，肿瘤显影清晰，并可被非标记抗体竞争，表明抗Derlin-1抗体可以在体内特异识别肿瘤，在肿瘤部位聚集并长时间滞留，一方面进一步证明Derlin-1可在体内肿瘤细胞表面表达，一方面更是由于Derlin-1人鼠蛋白序列同源度高达99％，充分证明了Derlin-1的表达在体内具有优异的肿瘤靶向性，具有作为肿瘤治疗靶点的潜力；采用抗Derlin-1胞外区多肽抗体，动物体内抑瘤实验证明，干扰阻断Derlin-1体内功能，可显著抑制体内人结肠癌的生长，抑本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人源化单克隆抗体，其中所述单克隆抗体由含有3个特定的轻链互补决定区的轻链和含有3个重链互补决定区的重链组成，其中所述3个轻链互补决定区的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1?3所示，所述3个重链互补决定区的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4?6所示。

【技术特征摘要】
1.一种人源化单克隆抗体，其中所述单克隆抗体由含有3个特定的轻链互补决定区的轻链和含有3个重链互补决定区的重链组成，其中3个轻链互补决定区的氨基酸序列如SEQIDNO:1-3所示，所述3个重链互补决定区的氨基酸序列如SEQIDNO:4-6所示，其中所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNO:7所示，和重链氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。2.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1所述的人源化单克隆抗体。3.一种表达载体，其含有...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨治华，冉宇靓，孙力超，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：