人抗TAU抗体制造技术

提供了人tau特异性抗体及其片段、衍生物和变体，及其相关方法。还公开了与tau特异性抗体相关的测定、试剂盒和固体支持物。所述抗体、免疫球蛋白链及其结合片段、衍生物和变体可分别用于tau靶向免疫治疗和诊断的药物和诊断组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人抗TAU抗体专利
本专利技术一般涉及新型tau特异性结合分子，尤其是识别tau蛋白的人抗体及其片段、衍生物和变体，包括病理磷酸化的tau和tau的聚集形式。此外，本专利技术涉及包含此类结合分子、抗体及其模拟物的药物和诊断组合物，其用作识别血浆和CSF中的tau和毒性tau物质的诊断工具，以及在被动疫苗接种策略中用于治疗神经退行性tau蛋白病(tauopathy)，例如阿尔茨海默氏病(AD)、肌萎缩性侧索硬化/帕金森–痴呆综合征(ALS-PDC)、嗜银颗粒痴呆(AGD)、英式淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、皮质基底退化(CBD)、克罗伊茨菲尔德-雅各布二氏病(Creutzfeldt-Jakobdisease)(CJD)、拳击员痴呆、伴有钙质沉着的弥漫性神经原纤维缠结病、唐氏综合征、额颞痴呆、17号染色体相关的伴有帕金森症的额颞痴呆(FTDP-17)、额颞叶退化、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克病(Gerstmann--Scheinkerdisease)、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatzdiseas)、包涵体肌炎、多系统萎缩、肌强直性营养不良、C型尼曼-皮克病(NP-C)、伴有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元病、皮克氏病(PiD)、脑炎后帕金森症、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下胶质增生、进行性核上性麻痹(PSP)、亚急性硬化全脑炎、缠结痴呆、多发性脑梗死性痴呆和缺血性中风均有重大价值。专利技术背景蛋白质积累、修饰和聚集是多种神经退行性疾病的病理学方面。包括超磷酸化tau构象异构体的病理修饰和聚集的tau是tau蛋白病的恒定标志，并且与疾病严重性相关联。Tau是在中枢神经系统中表达的微管相关蛋白，其主要功能是稳定微管。有六种主要在成人大脑中表达的主要tau亚型，它们通过选择性剪接来源于单个基因。在病理条件下，tau蛋白变为超磷酸化，导致微管蛋白结合的丧失和微管的去稳定化，然后是tau在病原性神经原纤维缠结中的聚集和沉积。Tau相关的疾病-统称为神经退行性tau蛋白病-是蛋白质错误折叠疾病集合的一部分，所述疾病包括阿尔茨海默氏病(AD)、进行性核上性麻痹、皮克氏病、皮质基底退化、FTDP-17等。据报道，超过40种tau基因突变与遗传性额颞痴呆相关联，表明tau基因突变足以触发神经退行性变性(Cairns等,Am.J.Pathol.171(2007),227-40)。转基因小鼠和细胞培养研究表明在AD中，tau病变由病理级联反应引起，其中Aβ位于tau的上游(等,Science293(2001),1491–1495)。然而，其他发现指向双通路模型，其中两种级联反应彼此独立地发挥作用(vandeNes等,ActaNeuropathol.111(2006),126-138)。靶向AD中的β-淀粉样肽的免疫治疗在动物模型中已经产生令人鼓舞的结果，并且显示出在临床试验中的潜力。最近来自少量受试者的尸检数据暗示，患有进行性AD的患者中β-淀粉样蛋白斑的清除不足以阻止认知功能恶化，这强调了对附加AD治疗策略的需要(Holmes等,Lancet372(2008),216-223;Boche等,ActaNeuropathol.120(2010),13-20)。随着基于Aβ的免疫治疗在转基因动物模型中的成功，主动免疫治疗的概念扩展到了tau蛋白。然而，使用tau蛋白对野生型小鼠进行主动疫苗接种被发现会导致中枢神经系统中神经原纤维缠结的形成、轴突损伤和单核浸润，并且伴随着神经缺损(Rosenmann等,ArchNeurol.63(2006),1459-1467)。在使用磷酸化tau肽进行主动疫苗接种的转基因小鼠品系中的随后研究揭示，大脑中tau聚集体的水平降低，并且行为障碍的进展变慢(Sigurdsson,J.Alzheimers.Dis.15(2008),157-168;Boimel等,Exp.Neurol.224(2010),472-485)。这些发现突出了与靶向tau的主动免疫治疗方式相关联的潜在有益效果，以及巨大风险。迫切需要新型治疗策略，从而使用有效和安全的治疗处理病理性tau蛋白。用来源于健康人受试者的人抗体进行被动免疫可以卓越疗效和安全性的高度可能性提供具有潜力的新型治疗途径，其中该抗体通过人免疫系统进行进化优化和亲和力成熟。专利技术概要本专利技术将健康人受试者的tau特异性免疫应答用于分离天然抗tau特异性人单克隆抗体。具体地讲，根据本专利技术进行的实验在从无神经退行性tau蛋白病症状的健康人受试者库分离单克隆tau特异性抗体中取得了成功。因此，本专利技术涉及人抗体、抗原结合片段以及类似的抗原结合分子，其能够特异性识别tau。所谓“特异性识别tau”、“对tau具有特异性的抗体”和“抗tau抗体”具体、一般并且总体来讲是指tau的天然形式或聚集的或病理修饰的tau亚型的抗体。本文提供了对全长、病理磷酸化和聚集形式具有选择性的人抗体。在本专利技术的特定实施方案中，人抗体或其抗原结合片段显示出了抗体的免疫结合特征，其特征在于可变区VH和/或VL，如图1中所示出。抗体的抗原结合片段可以是单链Fv片段、F(ab')片段、F(ab)片段和F(ab')2片段或任何其他抗原结合片段。在下文的具体实施方案中，抗体或其片段为人IgG同种型抗体。作为另外一种选择，抗体为嵌合的人-鼠或鼠源化抗体，后者尤其可用于动物中的诊断方法和研究。此外，本专利技术涉及包含本专利技术的抗体或其活性片段或激动剂和同源分子、或者其拮抗剂的组合物，并且涉及在tau蛋白病的预防、诊断或治疗中使用此类组合物的免疫治疗和免疫诊断方法，其中将有效量的该组合物施用至需要其的患者。当然，本专利技术分别扩展到永生化的人B记忆淋巴细胞和B细胞，它们产生如下所定义具有显著和独特特征的抗体。本专利技术还涉及编码至少本专利技术抗体的免疫球蛋白链的可变区的多核苷酸。在一个实施方案中，所述可变区包含可变区的VH和/或VL的至少一个互补决定区(CDR)，如图1中所示出。因此，本专利技术还涵盖包含所述多核苷酸的载体和转化了该载体的宿主细胞，以及将它们用于制备tau特异性抗体和等同的结合分子的用途。重组制备抗体及其模拟物的方式和方法，以及筛选竞争性结合分子的方法是本领域已知的，所述竞争性结合分子可以是或可以不是抗体。然而，如本文所述，尤其是针对人的治疗应用，在所述抗体的应用基本上不含指向此类抗体或者观察到嵌合和甚至人源化抗体的免疫应答的意义上，本专利技术的抗体是人抗体。此外，本文公开了可用于鉴定样本中的tau的组合物和方法。所公开的抗tau抗体可用于筛选人血液、CSF和尿液样本中tau的存在，例如通过使用基于ELISA或表面适应测定。本文所公开的方法和组合物可有助于神经退行性tau蛋白病，例如阿尔茨海默氏病的诊断，并且可用于监控疾病进展和治疗效能。因此，本专利技术的特定目的是提供治疗、诊断或预防神经退行性tau蛋白病的方法，所述神经退行性tau蛋白病例如阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化/帕金森–痴呆综合征、嗜银颗粒痴呆、英式淀粉样血管病、脑淀粉样血管病、皮质基底退化、克罗伊茨菲尔德-雅各布二氏病、拳击员痴呆、伴有钙质沉着的弥漫性神经原纤维缠结病、唐氏综合征、额颞痴呆、17号染色体相关的伴有帕金森症的额颞痴呆、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.11 EP 10013494.9;2010.10.11 US 61/391,7511.一种分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其中所述抗体或其片段包含SEQIDNO:9和11所示的氨基酸序列，其中所述的tau结合片段包含单链Fv片段(scFv)、F(ab')片段、F(ab)片段和F(ab')2片段。2.权利要求1所述的分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其是包含SEQIDNO:9和11所示的氨基酸序列的抗体。3.一种分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中(a)重链可变区含有氨基酸序列如SEQIDNO:23、24和25所示的互补决定区，以及(b)轻链可变区含有氨基酸序列如SEQIDNO:26、27和28所示的互补决定区，其中所述的tau结合片段包含单链Fv片段(scFv)、F(ab')片段、F(ab)片段和F(ab')2片段。4.权利要求3所述的分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其是抗体，其中(a)重链可变区含有氨基酸序列如SEQIDNO:23、24和25所示的互补决定区，以及(b)轻链可变区含有氨基酸序列如SEQIDNO:26、27和28所示的互补决定区。5.权利要求3所述的分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其中所述重链可变区不包含处于Kabat编号位置30的天冬酰胺。6.权利要求3所述的分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其中所述重链可变区包含处于Kabat编号位置30的谷氨酰胺。7.权利要求6所述的分离的结合人tau的人单克隆抗体或其tau结合片段，其包含SEQIDNO:93和SEQIDNO:11所示的氨基酸序列。8.一种编码根据权利要求1-7任一项所述的抗体或tau结合片段的分离的多核苷酸。9.一种包含根据权利要求8所述的多核苷酸的分离的载体。10.一种包含根据权利要求8所述的多核苷酸的分离的宿主细胞。11.一种制备抗tau抗体或其tau结合片段的方法，所述方法包括(a)培养根据权利要求10所述的细胞；以及(b)从所述培养物分离所述抗体或其tau结合片段。12.一种由权利要求8所述的多核苷酸编码的抗tau抗体或其tau结合片段。13.由权利要求11所述的方法获得的分离的抗tau抗体或其tau结合片段。14.根据权利要求1至7中任一项所述的人单克隆抗体或tau结合片段，其(a)被可检测地标记，其中所述可检测标记选自酶、放射性同位素、荧光团和重金属；或(b)连接至药物。15.一种包含根据权利要求1至7中任一项所述的人单克隆抗体或tau结合片段的组合物，其中所述组合物为(i)还包含可药用载体的药物组合物；或(ii)还包含常用于免疫或基于核酸的诊断方法的一种或多种试剂的诊断组合物。16.根据权利要求15所述的组合物，还包含用于治疗神经退行性tau蛋白病的附加药剂。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈峰，简·格林，让略·巴埃里斯威利，罗格·尼奇，克里斯多夫·霍克，
申请(专利权)人：比奥根艾迪克国际神经科学公司，苏黎世大学，
类型：
国别省市：