一种MDCK细胞改良传代方法技术

一种MDCK细胞改良传代方法。它是在MDCK细胞（培养瓶规格：T-75）传代消化过程中，通过3次更换消化液(EDTA-胰酶)，前2次消化液作用时间为1min，第3次消化液作用时间因细胞消化状态而定，每次加入1mL消化液，使消化液作用温度始终保持在37℃最佳消化温度；加入消化液前要用Hank’s平衡盐溶液清洗细胞、终止消化时弃掉消化液后要加入0.2mL的胎牛血清，其目的是为了进行消化液和胎牛血清的中和作用，保护细胞；本发明专利技术累计消化时间为3～6min。与流感监测方案相比，每消化一瓶（培养瓶规格：T-75）MDCK细胞节省有效工作时间9～11min,节约消化液8mL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物组织培养
，MDCK细胞(狗肾细胞)主要用于流感病毒的分离。
技术介绍
流感病毒所导致的流行性感冒(简称流感)是WHO第I个实行全球监测的传染病，是预防控制流感的策略和措施之一，其中流感毒株的分离对于流感监测具有非常重要的意义，作为国家流感监测的网络实验室，通过对所在监测地区的流感病毒的分离掌握最新的流感流行趋势，为疫苗株的选择制备做好流感疫情预报。目前在基层的流感监测网络实验室中用于流感病毒分离的MDCK细胞在20 35代之间，对于状态良好长成单层的MDCK细胞，其传代消化是关键技术，每一次传代消化决定着细胞下一代的生长状态及对流感病毒的分离效果。目前，国内分离流感病毒主要采用MDCK细胞培养法，作为流感监测的网络实验室，每年都承担着大量的流感病毒分离鉴定工作，实验室需要培养大量的MDCK细胞，根据国家流感监测方案《流行性感冒诊断标准WS285-2008 (附录A)》进行一瓶MDCK细胞(培养瓶规格:T-75)传代需要消化液(EDTA-胰酶)llmL、消化时间为12 17min，在工作中如果传代细胞为5瓶，累计EDTA-胰酶用量在55mL、累计工作时间60本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种MDCK细胞改良传代方法，其特征在于MDCK细胞改良传代方法是按照以下步骤进行的：一、取培养瓶中培养的单层MDCK细胞，弃去培养瓶中培养液，用Hank’s平衡盐溶液清洗MDCK细胞，弃掉洗液；二、向步骤一培养瓶中清洗后的MDCK细胞加入1mL预热的胰酶，放入37℃温箱培养1min，弃掉胰酶；三、重复步骤二操作1次；四、向步骤三处理的MDCK细胞中加入1mL预热的胰酶，放入37℃温箱培养1～4min，期间显微镜下观察细胞状态，若细胞出现明显细胞间隙时终止消化过程，弃掉胰酶；五、向步骤四处理后的MDCK细胞中加入0.2mL胎牛血清中和残余胰酶的活性，再补入8mL的细胞培养液，混匀制成细胞悬液分...

【技术特征摘要】
1.一种MDCK细胞改良传代方法，其特征在于MDCK细胞改良传代方法是按照以下步骤进行的: 一、取培养瓶中培养的单层MDCK细胞，弃去培养瓶中培养液，用Hank’s平衡盐溶液清洗MDCK细胞，弃掉洗液； 二、向步骤一培养瓶中清洗后的MDCK细胞加入ImL预热的胰酶，放入37°C温箱培养lmin，弃掉胰酶； 三、重复步骤二操作1次； 四、向步骤三处理的MDCK细胞中加入ImL预热的胰酶，放入37°C温箱培养I 4min，期间显微镜下观察细胞状态，若细胞出现明显细胞间隙时终止消化过程，弃掉胰酶； 五、向步骤四处理后的MDCK细胞中加入0.2mL胎牛血清中和残余胰酶的活性，再补入8mL的细胞培养液，混匀制成细胞悬液分装至T-...

【专利技术属性】
技术研发人员：任莉娜，张崇华，杜溪乔，
申请(专利权)人：哈尔滨市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：