本发明专利技术涉及一种降解石油的耐油耐盐菌株，名称为SY-1，分类名称：大肠埃希氏菌Escherichia?coli，保藏编号为：CGMCC?No.7075，保藏日期：2012年12月31日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明专利技术菌株的耐油耐盐性好，为革兰氏阴性菌，短杆状，有鞭毛，运动，无芽孢，柠檬酸盐、葡萄糖铵盐阳性，产过氧化氢酶，无明胶酶，该菌生长速度快，能以石油为唯一碳源进行生长，并具有降解石油的特性。
Oil and salt resistant strain for degrading petroleum and its screening method and Application
The invention relates to an oil resistant oil degradation of salt tolerant strains, named SY-1, the classification Name: Escherichia coli Escherichia? Coli, the preservation number is: CGMCC? No.7075, the collection date: December 31, 2012, Beijing Chaoyang District city preservation address: No. 1 Beichen West Road, No. 3 hospital, Chinese Academy of Sciences Institute of Microbiology, preservation unit: General Microbiology center Chinese microbe preservation management committee. Oil resistant strains of the invention of the salt tolerance, gram negative bacteria, short rod, a flagella movement, non spore, ammonium citrate, glucose positive, catalase production, no gelatinase, the bacteria growing fast, with oil as the sole carbon source for growth, and the quality of oil degradation the.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物育种及生态领域，尤其是一种降解石油的耐油耐盐菌株及其筛选方法和应用。
技术介绍
石油作为主要的能源物质对人类社会的发展起到了至关重要的作用，但在石油开采、运输、装卸、加工和使用过程中不可避免的会对环境造成污染。据不完全统计，全世界每年约有1.0 XIOki kg石油通过各种途径进入土壤或水体，污染地下水、流入海洋，改变水生环境，使水体动植物和海洋生物都受到威胁。随着全球环境的不断恶化，生态环境的安全越来越受到人们的关注。石油对环境的危害主要集中在海洋和土壤。石油漂浮在海面上，迅速扩散形成油膜，可通过扩散、蒸发、溶解、乳化、光降解以及生物降解和吸收等进行迁移、转化。油类可沾附在鱼鳃上，使鱼窒息；抑制水鸟产卵和孵化，破坏其羽毛的透水性，降低水产品质量。形成的油膜阻碍水体的复氧作用，影响海洋浮游生物生长，破坏海洋生态平衡，此外，还可破坏海滨风景，影响其旅游环境等。石油进入土壤后则改变土壤的有机质组成和结构，影响土壤中微生物的生长繁殖和分布变化；大量的石油会堵塞土壤孔隙，对土壤中酶的活性也有抑制作用；另外，石油经过土壤生态系统的一系列作用后某些成分在作物中形成积累，从而影响粮食质量，并进入食物链，危及人类健康。石油污染的处理方法主要有物理法、化学法、生物法及不同方法的组合。物理处理法的特点是相对简单、安全，适用于突发溢油的回收并控制溢油的扩散。化学方法是见效快，即使在恶劣的天气下也可以在短时间内处理大面积的溢油，但缺点是使用消油剂等化学药剂浪费能源，可能产生二次污染；凝油性能较低，生产工艺复杂，成本偏高，价格昂贵，难以在实际中得到应用。生物处理法，自然界中存在着大量能够降解石油的微生物，通过人工筛选、培育，甚至 改良这些微生物，然后将其投放到受污染区。石油烃类的生物降解，具有成本低、见效快、无污染的特点。生物修复技术是国际上具有发展潜力的环境污染治理技术。通过检索，发现以下几篇与本专利申请相关的专利公开文献:1.耐低温石油降解菌株、培养方法、培养基及其应用(CN102021128A)，本专利技术涉及耐低温石油降解菌株、培养方法、培养基及其应用，本专利技术的耐低温石油降解菌株为Paracoccus sp.D17和Paracoccus sp.D24 ;筛选上述两种菌用液体培养基，该培养基由每1000 mL 培养基液体由 0.5 g NaCl, 0.1 g K2HPO4,0.1 g NH4H2PO4,0.1 g (NH4)2SO4j0.02 gMgSO4.7H20，0.3 g KNO3, 700-900 mL油田废水和余量的超纯水组成；筛选上述两种菌用的固体培养基，其由液体培养基每1000 mL另外加入15 20 g琼脂，再在培养基表面均匀涂20 30 UL灭菌原油形成；上述两种菌应用于石油烃降解和土壤或水体石油污染的生物修复中。本专利技术的两种低温菌可应用于低温环境中，对低温环境中土壤石油污染的治理具有重大价值。2.一株降解石油的细菌及其应用(CN1580241)，公开了一株降解石油的细菌及其应用。本专利技术所提供的降解石油的细菌是蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)HP CGMCCNa 1141。实验证明，该菌株能有效地改善原油的性质，原油酸值提高8倍以上，轻组份增加，含蜡含胶降低率30% - 50%，原油流变性变好，油水间界面张力降低，发酵液中有机酸等物质含量增加；其代谢原油途径为次末端氧化，产生了一种新型脂类表面活性剂。该菌株可广泛应用于采油工程领域特别是微生物强化采油领域。3.一株降解石油烃的菌株及其应用(CN101691552A)，公开了一株降解石油烃的菌株及其应用。该菌株为柠檬酸杆菌(CitiObacter sp.)WTS，其保藏编号为CGMCCN0.3253。本专利技术的菌株具有很强的降解石油烃的能力。本专利技术的菌株、菌剂及其应用方法为我国进行石油污染土壤的生物修复工作提供理论依据，对我国油田地区环境保护工作以及石油运输过程中因泄漏而造成污染的修复工作具有重大意义，加快石油污染生物修复工作的进展，具有重要的经济意义。通过对比，本专利技术专利申请与上述专利公开文献存在本质的不同。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种降解石油的耐油耐盐性好的菌株，该菌株是一种生长速度快，能以石油为唯一碳源的菌株，可用于石油污染地的生物修复。同时，也提供了一种降解石油的耐油耐盐菌株的筛选方法，该方法能筛选出以石油为唯一碳源的菌种，操作简便、快捷，能显著缩短菌株筛选时间。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的:一种降解石油的耐油耐盐菌株，名称为SY-1，分类名称:大肠埃希氏菌Escherichia coli，保藏编号为=CGMCC N0.7075，保藏日期:2012年12月31日，保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心。而且，所述菌株对石油的降解率为40%_50%。而且，所述菌株使用的培养基配方:KH2PO43.4 g，Na2HPO4 1.5 g, (NH4)2SO4 4.0g，MgSO4 0.7 g, NaCl 1.6 g,酵母粉 0.0lg, Tween-80 0.6 mL,石油 5.0g 25.0 g，自来水1000 mL, pH 7.2 7.6，不同阶段添加不同含量石油。而且，所述菌株以石油为唯一碳源。而且，所述菌株的耐盐性为NaCl质量浓度为7%。而且，所述菌株对石油的耐性为石油质量浓度为10%。如上所述的降解石油的耐油耐盐菌株的筛选方法，筛选步骤如下:⑴取样:选取某油田储油罐和采油井处2-10 cm的土壤，除去杂物将其装入无菌自封袋内备用；⑵菌株初筛:称取土壤样品制成土壤悬液，按体积比为1:8 12将土壤悬液加入到石油质量浓度为0.5%的无机矿物盐培养液中，培养3 d后进行4个周期的菌种驯化，驯化步骤是:按体积比为1:8 12取上一次的培养液加入到含有石油的无菌无机矿物盐培养液中(石油浓度从0.5-2.5 g/100mL，每次增加0.5 g石油)，取最后一次驯化菌液，梯度稀释成10-1，10_2，10_3，10_4，10_5，10_6，10_7，分别取 10_5，10_6，10_7 稀释菌液 0.5mL 分别加入到牛肉膏蛋白胨、PDA培养基、高氏I号固体培养基平板上，涂布均匀，于30°C培养2-3 d，挑取不同菌落形态的菌株，保存备用；⑶菌株复筛；挑取步骤⑵中分离保存的菌株，分别接种到含有0.5 g石油/IOOmL无机矿物盐培养基固体平板上，分别于30°C培养2-3 d，挑取在菌落周围形成噬油斑的菌株，划线分离为单菌株，保藏备用；⑷菌株耐油特性:将步骤⑶中待测定的菌株活化后种子液，按3%的接种量接入每100 mL含石油分别为0.5 g、l g、2 g、4 g、6 g、8 g、10 g、12 g的无机盐矿物培养液中，30°C >160^200 r/min培养6 8 d，取培养液颜色改变并变浑浊的菌株进入下一步；(5)菌株耐盐特性:将步骤⑷中待测定菌株活化后分别以3%的接种量接入每100HiL含质量分数为1%、3%、5%、7%和9%的NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基中，30°C，16(T200 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种降解石油的耐油耐盐菌株，其特征在于：名称为SY?1，分类名称：大肠埃希氏菌Escherichia?coli，保藏编号为：CGMCC?No.7075，保藏日期：2012年12月31日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王昌禄，张丽红，王玉荣，李贞景，陈勉华，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
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