一种喜树碱新型药源原料的制备方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，是提高喜树碱新型药源植物短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法。从长春花中克隆出CrORCA3和CrG10H基因的编码框序列，构建含上述基因的植物双价高效表达载体，以发根农杆菌介导法遗传转化短小蛇根草获得转CrORCA3和CrG10H基因的短小蛇根草毛状根。获得的转基因短小蛇根草毛状根中喜树碱含量显著提高，平均每瓶喜树碱产量（2.62mg/flask）比对照增加了5.52倍，平均含量（8.44mg/g?DW）提高4.04倍。其中一个株系培养6周后经植物激素诱导后每瓶的喜树碱总产量提高7.8倍。本发明专利技术为生产具重要临床需求的抗癌药物喜树碱提供了一种新方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种生物工程
，特别是提高一种喜树碱新型药源原料短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法，为商业化生产抗癌药物喜树碱提供一种新型药源原料制备方法。
技术介绍
喜树碱(Comptothecin, CPT )是一种喹啉类生物碱，是一类最初从喜树(Camptotheca acuminata)中提取出的天然抗癌药物,喜树碱类药物具有高效低毒和广谱抗癌等诸多优点，是目前最有效的天然抗癌药物之一，并且其抗癌机理非常独特，是迄今为止发现的唯一一种通过抑制拓扑异构酶I发挥细胞毒性的天然植物活性成分，喜树碱及衍生物与紫杉醇、维生素甲类化合物抗肿瘤作用的发现被誉为“20世纪90年代抗癌药物的三大发现”。目前已有多种喜树碱衍生物类药物如依立替康(Irinotecan)和拓扑替康(Topotecan)获得了美国食品药物管理局(FDA)认证，在临床上被广泛用于治疗卵巢癌、肺癌、结肠直肠癌以及白血病等多种恶性肿瘤，全球市场需求十分巨大。目前世界上喜树碱类药物的生产主要是从喜树等植株中提取，然而由于喜树天然资源数量有限，生长十分缓慢，喜树碱及其类似物在植物体内含量又非常低，且提取环节多、费时费本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种喜树碱新型药源原料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将转录因子基因CrORCA3和关键酶香叶醇?10?羟化酶基因CrG10H插入植物表达载体，构建重组载体；（2）将步骤（1）所获得的重组载体转入发根农杆菌，构建含有重组载体的发根农杆菌；（3）利用所构建的含有重组载体的发根农杆菌菌株遗传转化短小蛇根草，获得毛状根；（4）检测步骤(3)毛状根中的CrORCA3和CrG10H基因，取筛选结果为阳性的转基因毛状根克隆。（5）利用植物激素对获得的转基因毛状根进行诱导，使其喜树碱含量进一步提高。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：滕小娟，开国银，李姗姗，郝小龙，崔丽洁，
申请(专利权)人：上海师范大学，
类型：发明
国别省市：