一种粉末型细小病毒维持培养基及其制备方法技术

技术编号:8880825 阅读:471 留言:0更新日期:2013-07-03 19:37
本发明专利技术提供了一种粉末型细小病毒维持培养基,按质量分数计,由10-30份的氨基酸及其衍生物、2-5份的维生素及其衍生物、40-78份的无机化合物和15-50份的其它类组成,所述其它类包括5.8-10.4份的PluronicF-68和0.00009-0.00016份的亚油酸冻干粉。其制备方法如下:(1)制备亚油酸冻干粉;(2)组分制备,按照重量分别称取各物质,配制成组分A、B、C、D,并将这四种组分在鼓风恒温干燥箱中干燥;(3)将上述干燥的组分A、干燥的组分B、干燥的组分C与600-800gPluronicF-68的混合物、干燥的组分D分别装在球磨机的四头缸体中,混合6h,然后再进行搅拌混合均匀,得到产品。本发明专利技术通过增加维持培养液营养成分可以使目标产物表达量更高,通过调低防腐剂和灭活剂比例减少最终成品副作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物新材料,更具体地,涉及。
技术介绍
培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐以及维生素和水等;有的培养基还含有抗菌素和色素,用于单种微生物培养和鉴定;基础培养基添加血清、抗生素等物质后,叫做完全培养基也叫细胞培养基,完全培养基根据添加血清量的多少,又分为细胞生长培养基和细胞维持培养基。细胞维持培养基是维持细胞缓慢生长或不死的培养基,血清含量比较少,一般细胞因缺少生长因子不能增殖,生长缓慢,但是发生转化或者癌细胞因自身有产生促生长增殖因子的能力,在血清缺少情况下仍能生长,所以维持培养基可用于选择发生恶性转化的细胞。在现有技术中,在细小病毒维持工艺中,一般使用基础培养基,这种培养基在使用时需要辅以血清,这种培养基主要针对细胞的存活与增殖,并未特意弱化细胞对病毒的抵抗力和高比例防腐剂灭活剂添加对最终产品的副作用。
技术实现思路
针对现有技术中的上述缺陷,本专利技术提供了,优化了维持病毒时维持培养液的配方,本专利技术通过增加维持培养液营养成分可以使目标产物表达量更高,通过调低防腐剂和灭活剂比例减少最终成品副作用。本专利技术填补了细小病毒维持液的配方空白,切实有效的在细胞维持阶段保持细胞存活率,并且支持病毒 维持时的营养状态不发生过抗状态;通过本专利技术的制备方法制成的粉末剂型,增加了产品的存放时间和降低了产品的存放条件要求。—种粉末型细小病毒维持培养基,其特征在于,按质量分数计,由10-30份的氨基酸及其衍生物、2-5份的维生素及其衍生物、40-78份的无机化合物和15-50份的其它类组成,所述其它类包括5.8-10.4份的PluronicF-68和0.00009-0.00016份的亚油酸冻干粉。优选的,所述氨基酸及其衍生物按质量分数计,包括:4.1-8.5份L-色氨酸,0.3-0.6份L-半胱氨酸,0.1-0.3份L-异亮氨酸,0.3-0.5份L-亮氨酸,0.1-0.3份L-缬氨酸,0.2-0.4份L-赖氨酸,0.3-0.8份L-蛋氨酸,0.2-0.4份L-谷氨酸,0.2-0.3份L-苯丙氨酸,0.5-1.3份L-酪氨酸,0.2-0.3份甘氨酸,0.1-0.2份L-脯氨酸,0.1-0.3份L-丙氨酸,0.2-0.3份L-天冬氨酸,0.2-0.4份L-丝氨酸,0.3-0.8份L-苏氨酸,3.5-6.3份L-谷氨酰胺,0.3-0.7份L-天冬酰胺,0.3-0.6份L-胱氨酸盐酸盐,0.2-0.4份L-精氨酸盐酸盐,0.5-0.8份L-组氨酸盐酸盐。优选的,所述无机化合物按质量分数计,包括:45.6-94.6份氯化钠,0.5-0.9份六水氯化镁,0.4-0.8份无水硫酸镁,0.7-1.6份无水氯化钙,1.3-2.2份氯化钾,0.3份-0.6份一水磷酸二氢钠,0.2-0.3磷酸氢二钠,0.0007-0.001份七水合硫酸锌,0.000003-0.000005份五水硫酸铜,0.0007-0.002份九水合硝酸铁。优选的,所述维生素及其衍生物按质量分数计,包括:0.0007-0.001份维生素C, 0.001-0.003g磷酸吡哆醇,0.00009-0.0002份磷酸吡哆醛,0.01-0.03份烟酰胺,0.01-0.03 份盐酸硫胺素,0.0001-0.0003 份钴铵素,0.006-0.01 份核黄素,0.02-0.05份叶酸,0.0007-0.002份生物素。制备上述亚油酸冻干粉的方法,包括以下步骤: (1)将7g亚油酸和Ig氢氧化钠溶于50ml蒸馏水中配置成溶液Z,在溶液Z中添加20g氯化钠制备成预冻液Y ; (2)将步骤(I)所述的预冻液Y放入真空冷冻干燥机中,在-36°C下保温,打开真空冷冻干燥机的真空装置,待其真空度到6-7Pa时,以每小时2°C的梯度升温,直至预冻液Y的共晶点; (3)将步骤(2)中的预冻液Y,保持温度lh,2次升华至0°C,待冰点核通透后急速升温至常温,常温保持2h,制得亚油酸冻干粉。一种粉末型细小病毒维持培养基的制备方法,包括以下步骤: (I)制备亚油酸冻干粉:将7g亚油酸和Ig氢氧化钠溶于50ml蒸馏水中配置成溶液Z,在溶液Z中添加20g氯化钠制备成预冻液Y,再将预冻液Y放入真空冷冻干燥机中在_36°C下保温,打开真空冷冻干燥机的真空装置,待其真空度到6-7Pa时,以每小时2°C的梯度升温,直至预冻液Y的共晶点,然后保持温度lh,2次升华至0°C,待冰点核通透后急速升温至常温,常温保持2h,制得亚油酸冻干粉。(2)组分制 备:按照重量分别称取各物质,配制成组分A、B、C、D,然后将组分A在鼓风恒温干燥箱65°C下干燥8h,将组分B在鼓风恒温干燥箱80°C下干燥8h,将组分C在鼓风恒温干燥箱40°C下干燥14h,组分D在鼓风恒温干燥箱65°C下干燥IOh ; (3)成品制备:将上述干燥的组分A、干燥的组分B、干燥的组分C与600-800gPluronicF-68的混合物、干燥的组分D分别装在球磨机的四头缸体中,混合6h,制得四种粒径小于0.1mm3的中间体A、B、C、D,然后再将上述中间体A、B、C、D在三维运动混合机中进行搅拌混合均匀,得到粉末型细小病毒维持培养基。具体实施例方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案,并使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的说明。实施例1: 首先,制备亚油酸冻干粉,具体步骤如下: (1)将78亚油酸和Ig氢氧化钠溶于50ml蒸馏水中,配制成溶液Z;然后在溶液Z中添加20g氯化钠,配制成预冻液Y ; (2)将预冻液Y放入真空冷冻干燥机的托盘中,关好设备舱门,将冷凝温度调到-36°C,保持温度; (3)将真空度调至约6-7Pa,开始以每小时2°C的梯度升温,直至到达预冻液Y的共晶占.(4)保持温度lh,二次升华至0°C,观察冰点核情况,冰点核通透后急速升温至常温,在常温下保持2h,冻干亚油酸制成。然后,制备1000L培养基,将配方中的原料分为A、B、C、D四组,按照下列质量称取各组分: 组分A: L-色氨酸450g,L-半胱氨酸37.5g,L-异亮氨酸15g,L-亮氨酸30g,L-缬氨酸16.5g,L-精氨酸盐酸盐18.75g,L-组氨酸盐酸盐50g,L-赖氨酸22.5g,L-蛋氨酸37.5g, L-谷氨酸25g, L-苯丙氨酸18.75g, L-天冬酰胺31.5g,甘氨酸20g, L-脯氨酸14.25g, L-丙氨酸15g, L-天冬氨酸20g, L-丝氨酸22.5g, L-苏氨酸37.5g, L-谷氨酰胺390g,L-胱氨酸盐酸盐33.75g,L-酪氨酸60g。组分B:六水氯化镁60g,无水硫酸镁48g,无水氯化钙80g,氯化钾141g,氯化钠1040g, 一水磷酸二氢钠32g,磷酸氢二钠20g,七水合硫酸锌0.08g,五水硫酸铜0.0003g。组分C:氯化钠2000g,九水合硝酸铁0.08g。组分D:氯化钠2000g,大米水解物800g,丙酮酸钠105g,还原型谷胱甘肽0.04g,肌醇Sg,次黄嘌呤钠盐0.5g,腐胺0.08g,硫辛酸0.08g,亚油酸冻干粉0.0lg,维生素C0.08g,磷酸吡哆醇0.16g,磷本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种粉末型细小病毒维持培养基,其特征在于,按质量分数计,由10?30份的氨基酸及其衍生物、2?5份的维生素及其衍生物、40?78份的无机化合物和15?50份的其它类组成,所述其它类包括5.8?10.4份的PluronicF?68和0.00009?0.00016份的亚油酸冻干粉。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张大鹤王其乐
申请(专利权)人:苏州市沃美生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:

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