本发明专利技术公开了一种检测磺胺药物和/或喹诺酮药物的酶联免疫试剂盒及其应用。本发明专利技术所提供试剂盒包括抗体1、抗体2、包被原1、包被原2、酶标记物1和酶标记物2；所述抗体1为抗抗磺胺药物的抗体，所述抗体2为抗喹诺酮药物的抗体，所述包被原1为磺胺药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述包被原2为喹诺酮药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述酶标记物1为抗所述抗体1的酶标二抗，所述酶标记物2为抗所述抗体2的酶标二抗。本发明专利技术所提供试剂盒可同时定性或定量检测待测样品中21种磺胺药物和/或11种喹诺酮药物残留，样品前处理过程简单；本发明专利技术检验方法简便易行，实用性强、灵敏度高、精确度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测磺胺药物和/或喹喏酮药物的酶联免疫试剂盒及其应用。
技术介绍
磺胺类药物(Sulfonamides),是通过人工合成的氨苯磺胺衍生物,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病。代表药物有:磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲基异恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉等。磺胺类药物能抑制革兰氏阳性菌及一些阴性菌，可以治疗多种细菌感染，在兽医临床上广泛应用于治疗由敏感细菌感染的各种畜禽疾病。喹诺酮类药物(4-quinolones),是一类较新的合成抗菌药,代表药物有氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、环丙沙星等。本类药物的分子中多数含有氟原子，因此称为氟喹诺酮。喹诺酮类是主要作用于革兰阴性菌的抗菌药物，对革兰阳性菌的作用较弱(某些品种对金黄色葡萄球菌有较好的抗菌作用)。喹诺酮类药物以细菌的脱氧核糖核酸(DNA)为靶。妨碍DNA回旋酶，进一步造成细菌DNA的不可逆损害，达到抗菌效果。本类药物与许多抗菌药物间无交叉耐药性，是理想的抗菌药。由于磺胺类药物在体内的作用和代谢时间较长，通过任何途径摄入的磺胺都有可能在人体内蓄积。蓄积浓度超过一定值时，就会对人体造成损害。短时间大剂量或长时间小剂量的刺激可分别引起急性或慢性中毒，影响机体的泌尿、免疫系统，破坏肌肉、肾脏和甲状腺等组织，如诱发人的甲状腺癌等。另外，人体内长期存在磺胺会导致许多细菌对磺胺类药物产生抗药性。因此，国际食品法典委员会(CAC)和许多国家规定，食品中磺胺类总量的最大残留限量(MRL)为0.lmg/kg。喹诺酮类药物的不良反应主要有:①胃肠道反应:恶心、呕吐、不适、疼痛等；②中枢反应:头痛、头晕、睡眠不良等，并可致精神症状；③由于本类药物可抑制Y-氨基丁酸(GABA)的作用，因此可诱发癫痫，有癫痫病史者慎用；④本类药物可影响软骨发育，孕妇、未成年儿童应慎用可产生结晶尿，尤其在碱性尿中更易发生；⑥大剂量或长期应用本类药物易致肝损害。目前，检测磺胺类药物和喹诺酮类药物残留的参考方法有高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法，由于昂贵的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。酶联免疫测定法(ELISA)是药物残留检测中重要的筛选方法，方法简便、灵敏，不需要昂贵的仪器设备和专业的分析人员，适合现场监测，方便实用，易于推广。目前，磺胺类药物药物残留检测试剂盒主要集中检测3 5种磺胺类药物，喹诺酮类药物药物残留检测试剂盒主要集中检测5 10种喹诺酮类药物，尚未有商品化的可用于同时检测更多种磺胺类药物以及喹诺酮类药物的酶联免疫试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测磺胺药物和/或喹诺酮药物的酶联免疫试剂盒及其应用。本专利技术所提供的检测磺胺药物和/或喹诺酮药物的酶联免疫试剂盒，具体可包括抗体1、抗体2、包被原1、包被原2、酶标记物I和酶标记物2 ;所述抗体I为抗磺胺药物的抗体，所述抗体2为抗喹诺酮药物的抗体，所述包被原I为磺胺药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述包被原2为喹诺酮药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述酶标记物I为抗所述抗体I的酶标二抗，所述酶标记物2为抗所述抗体2的酶标二抗。在本专利技术中，所述磺胺药物半抗原具体为磺胺二甲基嘧啶；所述喹诺酮药物半抗原具体为诺氟沙星。所述酶联免疫试剂盒还包括如下中的至少一种:磺胺二甲基嘧啶标准溶液、环丙沙星标准溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、包被缓冲液、封闭液和样品稀释液。在本专利技术的一个实施例中，所述酶联免疫试剂盒具体由所述抗体1、所述抗体2、所述包被原1、所述包被原2、所述酶标记物1、所述酶标记物2、所述磺胺二甲基嘧啶标准溶液、所述环丙沙星标准溶液、所述底物显色液、所述终止液、所述洗涤液、所述包被缓冲液、所述封闭液和所述样品稀释液组成。在所述酶联免疫试剂盒中，所述抗磺胺药物的抗体可为抗磺胺药物的多克隆抗体，也可为抗磺胺药物的单克隆抗体。在本专利技术的一个具体实施例中，所述抗磺胺药物的抗体为为抗磺胺药物的多克隆抗体，具体是用磺胺二甲基嘧啶与载体蛋白的偶联物作为免疫原免疫脊椎动物(如新西兰大白兔)得到的。在本专利技术的一个具体实施例中，所述抗喹诺酮药物的抗体为抗喹诺酮药物的单克隆抗体，具体由对11种喹诺酮类化合物(恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、达氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、麻保沙星、氨氟沙星、培氟沙星、依诺沙星)都有交叉反应的诺氟沙星单克隆杂交瘤细胞株QNs CGMCC N0.3779产生。在所述酶联免疫试剂盒中，所述磺胺二甲基嘧啶标准溶液和所述环丙沙星标准溶液可以是一定浓度范围内的多种浓度的标准溶液，例如可以在O 100 μ g/L之间，如磺胺二 甲基嘧啶的浓度分别为 O μ g/L,0.01 μ g/L,0.05 μ g/L、0.1 μ g/L、0.3 μ g/L、0.9 μ g/L、2.7 μ g/L、8.1 μ g/L、24.3 μ g/L、72.9 μ g/L,环丙沙星的浓度分别为 O μ g/L、0.01 μ g/L、0.05 μ g/L、0.1 μ g/L、0.5 μ g/L、1.5 μ g/L、4.5 μ g/L、13.5 μ g/L、40.5 μ g/L、81μ g/L。在所述酶联免疫试剂盒中，所述载体蛋白可为人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、血蓝蛋白(KLH)、卵清白蛋白(0VA)、鼠血清蛋白(MSA)、甲状腺蛋白(BCG)或兔血清蛋白(RSA)。在本专利技术中，与所述磺胺二甲基嘧啶偶联的载体蛋白具体为人血清白蛋白(HSA)，与所述诺氟沙星偶联的载体蛋白具体为牛血清白蛋白(BSA)。在所述酶联免疫试剂盒中，所述酶标记物的标记酶可为辣根过氧化物酶，也可为碱性磷酸酯酶；辣根过氧化物酶可采用现有技术中的多种方法将其与二抗进行偶联，如戊二醛法，过碘酸钠法等。当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由A液和B液组成，所述A液可为过氧化脲溶液或过氧化氢溶液(具体如体积百分含量为2%的过氧化脲溶液)，所述B液可为四甲基联苯胺溶液或邻苯二胺溶液(如体积百分含量为I %的四甲基联苯胺溶液)；所述终止液可为硫酸溶液，其浓度可为I 2mol/L (如2M)。当标记酶为碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基苯磷酸酯缓冲液(具体如浓度为0.lmg/mL的对硝基苯磷酸酯溶液);显色液和终止液也可以是本领域常用的其它底物显色液和终止液。在所述酶联免疫试剂盒中，所述洗涤液为pH7.4、含有吐温20的0.02M的磷酸盐缓冲液；所述吐温20在所述洗涤液中的体积含量为0.05%。在所述酶联免疫试剂盒中，所述包被缓冲液可为碳酸盐缓冲液，具体如为pH9.6、0.05mol/L的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液。所述0.05mol/L的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液的溶剂为水，溶质及其浓度如下=Na2CO3L 59g/L和NaHC032.93g/L。在所述酶联免疫试剂盒中，所述封闭液为磷酸盐缓冲液；在本专利技术的一个实施例中，所述封闭液具体为PH7.4，含小牛血清、蔗糖和酪蛋白的磷酸盐缓冲液；所述小牛血清在所述封闭液中的体积含量为0.5%，所述蔗糖在所述封闭液中的含量为每IOOml所述封闭液中含有5g所述蔗糖，所述酪蛋白在所述封闭液中的含量为每IOOml所述封闭液中含有Ig所述酪蛋白。当然所述包被缓冲液和所述封闭液也可以是本领域常用的其它包被本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测磺胺药物和/或喹诺酮药物的酶联免疫试剂盒，包括抗体1、抗体2、包被原1、包被原2、酶标记物1和酶标记物2；所述抗体1为抗磺胺药物的抗体，所述抗体2为抗喹诺酮药物的抗体，所述包被原1为磺胺药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述包被原2为喹诺酮药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述酶标记物1为抗所述抗体1的酶标二抗，所述酶标记物2为抗所述抗体2的酶标二抗。
【技术特征摘要】
1.一种检测磺胺药物和/或喹诺酮药物的酶联免疫试剂盒，包括抗体1、抗体2、包被原1、包被原2、酶标记物I和酶标记物2 ;所述抗体I为抗磺胺药物的抗体,所述抗体2为抗喹诺酮药物的抗体，所述包被原I为磺胺药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述包被原2为喹诺酮药物半抗原与载体蛋白的偶联物，所述酶标记物I为抗所述抗体I的酶标二抗，所述酶标记物2为抗所述抗体2的酶标二抗。2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于:所述酶联免疫试剂盒还包括如下中的至少一种:磺胺二甲基嘧啶标准溶液、环丙沙星标准溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、包被缓冲液、封闭液和样品稀释液。3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于:所述抗磺胺药物的抗体为抗磺胺药物的多克隆抗体；或 所述抗喹诺酮药物的抗体为抗喹诺酮药物的单克隆抗体，由对11种喹诺酮类化合物(恩诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、达氟沙星、氟甲喹、噁喹酸、麻保沙星、氨氟沙星、培氟沙星、依诺沙星)都有交叉反应的诺氟沙星单克隆杂交瘤细胞株QNs CGMCCN0.3779 产生。4.根据权利要求1-3中任一所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于:所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、血蓝蛋白、卵清白蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。5.根据权利要求1-4中任一所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于:所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；或 所述底物显色液由A液和B液组成；所述A液为过氧化脲或过氧化氢，所述B液为四甲基联苯胺或邻苯二胺；所述终止液为硫酸；或 所述底物显色液为对硝基苯磷酸酯溶液。6.根据权利要求2-5中任一所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于:所述洗涤液为PH7.4、含有吐温20的0.02M的磷酸盐缓冲液；所述吐温20在所述洗涤液中的体积含量为0.05% ;或 所述包被缓冲液为PH9.6,0.05mol/L的碳酸钠缓冲液；或 所述封闭液为PH7.4，含小牛血清、蔗糖和酪蛋白的磷酸盐缓冲液...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈建忠，王战辉，蒋文晓，史为民，曹兴元，张素霞，李建成，江海洋，丁双阳，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：
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