本发明专利技术公开了一种免疫吸附剂，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括由杂交瘤细胞株CGMCC?NO.5504分泌得到的单克隆抗体和由杂交瘤细胞株CGMCC?NO.5505分泌得到的单克隆抗体。本发明专利技术还本发明专利技术还提供含有上述免疫吸附剂或免疫亲和柱的试剂盒。以及上述免疫吸附剂、免疫亲和柱、试剂盒在检测黄曲霉毒素、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物和赭曲霉毒素A中的应用。并具体提供了分离方法和检测方法。本发明专利技术通过开发出性能稳定、特异的单克隆抗体，实现了对6种黄曲霉毒素、杂色曲霉素、6种玉米赤霉烯酮同类物和赭曲霉毒素A的同时纯化和检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种免疫吸附剂，以及装有该免疫吸附剂的免疫亲和柱和试剂盒及其它们在纯化黄曲霉毒素B2, G1, G2, M1, M2、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β -ZOL, ZAN、ZON和赭曲霉毒素A中的应用。
技术介绍
黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等产生的一组结构类似的次生代谢产物，是一组以二吠喃香豆素为基本结构的化合物。目前已分离鉴定出12种，尤其是黄曲霉毒素B1,B2,GijG2^M1和M2为强污染物质，广泛存在于粮食谷物和饲料及其加工品中，在目前已知的两百多种真菌毒素中毒性最强、污染频率最高。黄曲霉毒素具有诱导突变、抑制免疫和致癌的作用。黄曲霉毒素作用的靶器官主要是肝脏，被公认为致肝癌物质，即使食用含有低水平的黄曲霉毒素食物，长期食用的人其肝脏也将受到损害。国际癌症中心将其定为一类致癌剂。玉米赤霉烯酮又称F-2毒素，它首先从有赤霉病的玉米中分离得到。玉米赤霉烯酮的产毒菌主要是镰刀菌属的菌株，如禾谷镰刀菌和三线镰刀菌。玉米赤霉烯酮及其同类物主要污染玉米、小麦、 大米、大麦、小米和燕麦等谷物，其中，玉米的阳性检出率为45%，最高含毒量可达到2909mg/kg ;小麦的检出率为20%，含毒量为0.364-11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮及其同类物的耐热性较强，110°C下处理Ih才被完全破坏。玉米赤霉烯酮及其同类物具有雌激素作用，主要作用于生殖系统，可使家畜、家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症。妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮及其同类物的食物可引起流产、死胎和畸胎。食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心、发冷、头痛、神智抑郁和共济失调等。杂色曲霉素是由杂色曲霉、构巢曲霉等产生的一种具有致癌性的真菌毒素，在化学结构上属于黄曲霉毒素前体物质，可与DNA形成加合物。杂色曲霉素产生菌及杂色曲霉素在世界各地粮食及饲料中的污染很常见。国内学者研究发现，我国各地粮食中杂色曲霉素的污染非常普遍，其中以小麦最明显，污染率最高可达100%。杂色曲霉素可能与胃癌、肝痛的发生密切相关。赭曲霉毒素是由赭曲霉和纯绿青霉产生的一种霉菌肾毒素,可分为A和B两种类型，赭曲霉毒素A的毒性较大。赭曲霉毒素在4°C的低温下赭曲霉即可产生具有毒害作用浓度的赭曲霉毒素。动物摄入Ippm体重剂量的赭曲霉毒素A可在5-6天致死。常见的病变是肾小管上皮损伤和肠道淋巴腺体坏死。饲喂含Ippm浓度赭曲霉毒素的日粮3个月可引起动物烦渴、尿频、生长迟缓和饲料利用率降低；饲喂含量低至200ppb的日粮数周可检测到肾损伤。其他的临床症状还有腹泻、厌食和脱水。有时临床症状不明显，而在赭曲霉毒素中毒呈地方流行病的地区，动物在屠宰时惟一可观察到的病变是肾苍白、坚硬。目前，黄曲霉毒素、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物和赭曲霉毒素A的检测方法主要有薄层层析法，酶联免疫法(ELISA)，免疫亲和层析-液相色谱法，免疫亲和层析-荧光光度法等。其中，薄层层析法要接触大量的标准品，不利于实验者的健康，而且灵敏度很低。酶联免疫法，只适用于定性检测，很容易出现假阳性和假阴性的现象。而免疫亲和层析-液相色谱法可以定量地检测许多商品中的黄曲霉毒素的含量。由于该方法灵敏特异，而且不使用有毒的溶剂如氯仿和二氯甲烷等，应用越来越广泛。免疫亲和层析方法的关键在于选择一种高效特异的抗体，但是，利用现有技术中的液液提取、固相萃取、加热蒸发浓缩等方法的添加回收率均较低，对后续的检测步骤造成很强的基质效应，并且现有技术中没有能够同时纯化待处理基质中6种黄曲霉毒素(BpB2、G1' G2, M1 和 M2)、6 种玉米赤霉烯酮同类物(a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β -ZOL, ZAN 和 ΖΟΝ)、杂色曲霉素和赭曲霉毒素A的免疫吸附介质,而能够同时纯化分析多种病毒素显然能够提高检测的效率。因此，当务之急，是要制备出性能稳定、特异的免疫吸附剂，并建立一种经济、快捷、精确、安全，并且能同时纯化6种黄曲霉毒素、6种玉米赤霉烯酮、杂色曲霉素和赭曲霉毒素A的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种免疫吸附剂，以及装有该免疫吸附剂的免疫亲和柱(IAC)和试剂盒，及其它们在纯化以及检测玉米赤霉烯酮同类物α-ZER、a-ZOL、β-ZER、β -ZOL, ZAN、ZON和赭曲霉毒素A中的应用，和在纯化和检测黄曲霉毒素B1' B2、G1' G2、M1'M2、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β _Z0L、ZAN、ΖΟΝ、杂色曲霉素和赭曲霉毒素A中的应用，以及具体提供一种纯化黄曲霉毒素G2、MpM2、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β _Z0L、ZAN、ΖΟΝ、杂色曲霉素和赭曲霉毒素A的方法，和一种检测黄曲霉毒素G2為為、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β _Z0L、ZAN、ΖΟΝ、杂色曲霉素和赭曲霉毒素A的方法。本专利技术的第一方面是提供一种免疫吸附剂，其特征在于，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括由杂交瘤细胞株CGMCC N0.5504(已于2011年11月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC))分泌得到的单克隆抗体和由杂交瘤细胞株CGMCC N0.5505(已于2011年11月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)分泌得到的单克隆抗体。本专利技术的第二方面是提供装载有上述免疫吸附剂的免疫亲和柱。本专利技术的第三方面是提供含有上述免疫吸附剂或上述免疫亲和柱的试剂盒，优选地，所述试剂盒中还包括洗脱液和/或保存液，所述洗脱液优选为甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种，所述保存液优选为含有0.001-0.1重量％的NaN3的PBS缓冲液。本专利技术的第四方面是提供上述免疫吸附剂、上述免疫亲和柱、或上述试剂盒在纯化以及检测玉米赤霉烯酮同类物α-ZER、a -ZOL, β-ZER、β-Z0L、ZAN、ZON和赭曲霉毒素A中至少一种中的应用。本专利技术的第五方面是提供上述免疫吸附剂、上述免疫亲和柱、或上述试剂盒在纯化以及检测黄曲霉毒素K、B2, G1, G2, M1, M2、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER, β-Z0L、ZAN、ZON和赭曲霉毒素A中至少一种中的应用。本专利技术的第六方面是提供一种纯化黄曲霉毒素G2JpM2、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β _Z0L、ZAN、Z0N和赭曲霉毒素A的方法，该方法包括，使含有黄曲霉毒素B2, G1, G2, M1, M2、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β -ZOL, ZAN、ZON和赭曲霉毒素A的液体样品通过上述免疫亲和柱，使得所述液体样品中的至少部分黄曲霉毒素氏、B2、Gp G2、Mp M2、至少部分玉米赤霉烯酮同类物a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β -ZOL, ΖΑΝ、ΖΟΝ、至少部分杂色曲霉素和至少部分赭曲霉毒素A吸附至该免疫亲和柱上，然后用洗脱液将所述至少部分黄曲霉毒素G2、MpM2、至少部分本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫吸附剂，其特征在于，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括由杂交瘤细胞株CGMCC?NO.5504分泌得到的单克隆抗体和由杂交瘤细胞株CGMCC?NO.5505分泌得到的单克隆抗体。
【技术特征摘要】
1.一种免疫吸附剂，其特征在于，该免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗体，所述抗体包括由杂交瘤细胞株CGMCC N0.5504分泌得到的单克隆抗体和由杂交瘤细胞株CGMCC N0.5505分泌得到的单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的免疫吸附剂，其中，所述抗体还包括由杂交瘤细胞株CGMCCN0.5506分泌得到的单克隆抗体。3.装载有权利要求1或2所述的免疫吸附剂的免疫亲和柱。4.含有权利要求1或2所述的免疫吸附剂或含有权利要求3所述的免疫亲和柱的试剂盒，优选地，所述试剂盒中还包括洗脱液和/或保存液，所述洗脱液优选为甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种，所述保存液优选为含有0.001-0.1重量％的NaN3的PBS缓冲液。5.权利要求1所述的免疫吸附剂，引用权利要求1时权利要求3所述的免疫亲和柱、或引用权利要求1时权利要求4所述的试剂盒在纯化以及检测玉米赤霉烯酮同类物a-ZER、a -ZOL, β-ZER、β-Z0L、ZAN、ZON和赭曲霉毒素A中至少一种中的应用。6.权利要求2所述的免疫吸附剂、引用权利要求2时权利要求3所述的免疫亲和柱、或引用权利要求2时权利要求4所述的试剂盒在纯化以及检测黄曲霉毒素M2、杂色曲霉素、玉米赤霉 烯酮同类物α-ZER、a -ZOL, β-ZER、β-Z0L、ZAN、ZON和赭曲霉毒素A中至少一种中的应用。7.一种纯化黄曲霉毒素G2、MpM2、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物a-ZER、a -ZOL, β -ZER、β -ZOL, ZAN、ZON和赭曲霉毒素A的方法，该方法包括，使含有黄曲霉毒素B^ByG1'G2 J1J2、杂色曲霉素、玉米赤霉烯酮同类物 a -ZER、a -ZOL, β -ZER、β _Z...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲍蕾，吕宁，许艳丽，韩深，刘岩，梁成珠，王雄，果旗，江帆，王丽，李峻峰，戚大海，吴兆广，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心，北京中检维康技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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