本发明专利技术涉及特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域的人源化抗体及包含此类抗体的组合物（例如，药物组合物）。本发明专利技术还涉及通过施用治疗有效量的本发明专利技术的人源化抗体来治疗哺乳动物受试者的钙粘着蛋白-11介导的病症的方法。适于通过本发明专利技术的方法进行治疗的钙粘着蛋白-11介导的病症包括炎性疾病（例如，炎性关节疾病，诸如类风湿性关节炎）、纤维化和癌症。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向于钙粘着蛋白-11的EC1结构域的人源化抗体及相关组合物和方法相关申请本申请要求于2010年7月15日提交的美国临时申请号61/364,698的权益。以上申请的全部内容都通过引用并入本文。
技术介绍
患有重度慢性关节炎症的患者遭受严重的关节退化(包括骨和软骨的破坏)，这导致了长期疼痛、畸形、关节功能的丧失、运动能力下降以及预期寿命缩短。关节炎症与关节中细胞和炎性物质的数量增加有关，这些细胞和炎性物质引起了刺激、软骨的磨损以及关节内衬(jointlining)的肿胀。已知几种不同的自身免疫性疾病触发了关节中不当的或误定向的炎症，从而在患有这些疾病的个体的关节中导致慢性炎症。常见的炎性关节病症包括类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、莱特尔氏综合征以及强直性脊柱炎。类风湿性关节炎（RA）是最常见的炎性关节炎形式，其据估计影响到美国人口的大约1%，或者说大约210万美国人。RA是一种慢性疾病，其特征在于关节的内衬或滑膜的炎症，并且随着时间推移会导致严重的骨和软骨的损害。与男性相比，RA在女性中更为常见，并且多达3%的女性在她们的一生中可能发生类风湿性关节炎。目前，RA的病因还未知。RA可以引起长期的关节损害，导致慢性疼痛、功能丧失以及失能。此外，最近的研究表明，患有RA的人，特别是其疾病没有得到良好控制的那些人，可能具有更高的心脏病、中风以及发生纤维化(尤其是肺纤维化)的风险。肺纤维化，包括特发性肺纤维化和放射诱导的纤维化，以及由吸烟、化学品接触、硬皮病、结节病、治疗性辐射、RA或狼疮引起的纤维化，折磨着全球5,000,000名患者，以及美国的超过500,000名个体。特发性肺纤维化的5年死亡率约为80%，仅在美国每年就导致40,000例死亡。目前在美国或欧洲对于特发性肺纤维化还没有已得到批准的疗法。因此，由RA和其他炎症性状况引起的纤维化和慢性关节炎症是国际性的卫生负担。存在着开发用于预防和治疗这些和其他病症的新药的需要。
技术实现思路
在一个实施方式中，本专利技术涉及特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域的人源化抗体，该抗体包含含有选自SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67和SEQIDNO:69的氨基酸序列的抗体重链可变区。在一个具体的实施方式中，该人源化抗体拮抗哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质。在进一步的实施方式中，该人源化抗体包含含有SEQIDNO:69的抗体重链可变区。在另一实施方式中，本专利技术涉及特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域的人源化抗体，其包含含有SEQIDNO:69的抗体重链可变区和含有SEQIDNO:71的抗体轻链可变区。在一个具体的实施方式中，该人源化抗体拮抗哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质。在另一实施方式中，本专利技术提供了治疗需要的哺乳动物受试者（例如，人）中钙粘着蛋白-11介导的病症（例如，炎性关节病症）的方法。该方法包括对该受试者施用治疗有效量的特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域并拮抗哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的人源化抗体，从而在该受试者中产生期望的治疗效果。在一个具体的实施方式中，该人源化抗体包含含有SEQIDNO:69的抗体重链可变区。在优选的实施方式中，钙粘着蛋白-11介导的病症是类风湿性关节炎。在又另一实施方式中，本专利技术涉及包含特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域的人源化抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。在一个具体的实施方式中，该人源化抗体包含含有SEQIDNO:69的抗体重链可变区。在进一步的实施方式中，该药物组合物进一步包含第二药剂，诸如缓解疾病的抗风湿病药或抗炎药。本专利技术提供了对于治疗人的由钙粘着蛋白-11介导的炎症和其它状况具有改善的疗效的新药剂和疗法。附图简要说明本专利或申请文件包含至少一个彩绘附图。带有彩色附图的本专利或专利申请公开的副本将根据请求并支付必要的费用后由专利局提供。图1A是示出了使用抗Cad-11抗体23C6、13C2以及27F3来检测钙粘着蛋白-11-EC1-5-Fc融合蛋白（见实心箭头）的蛋白质印迹。这些抗体并不识别也存在于该膜上的钙粘着蛋白-11-EC1-Fc以及钙粘着蛋白-11-EC1/2-Fc融合蛋白（关于印迹上钙粘着蛋白-11-EC1-Fc和钙粘着蛋白-11-EC1/2-Fc蛋白的位置见空心箭头）。图1B是描绘了如通过ELISA测定的，公开的钙粘着蛋白-11抗体13C2、23C6以及5F82与人Cad-11-EC1-5-Fc融合蛋白的结合，而不与Cad-11-EC1-Fc融合蛋白结合的图。相比之下，EC1抗体H1M1与Cad-11-EC1-Fc融合蛋白以及Cad-11-EC1-5-Fc融合蛋白两者都结合。图2是参与钙粘着蛋白结合的人Cad-11（SEQIDNO:3）、MN-Cad（SEQIDNO:4）以及Cad-8（SEQIDNO:5）的EC1结构域的前34个氨基酸的氨基酸序列比对。包含延伸至钙粘着蛋白反受体的口袋中的残基的供体序列通过在序列的左侧一半加下划线来表示，并且该口袋序列的残基通过在SEQIDNO:3中的序列的右侧一半加下划线来表示。图3是描绘了如通过ELISA所测定的，钙粘着蛋白-11结合Fab与人Cad-11EC1结构域肽以及Cad-11-EC1-Fc融合蛋白结合，但不与Cad-8或MN-CadEC1结构域肽结合的图。克隆7证明了与Cad-11EC1结构域肽以及融合蛋白的明显结合，而不与MN-Cad或Cad-8EC1结构域肽结合。图4是描绘来自体外Cad-11细胞聚集分析的数据的图。加入到培养基中的Cad-11拮抗剂，例如由抗Cad-11抗体13C2制备的Fab，或不同浓度的针对钙粘着蛋白-11的EC1结构域的前35个氨基酸的抗钙粘着蛋白-11EC1Fab（标示为EC1Fab克隆7），阻止了Cad-11介导的431-D-11细胞的聚集。抗钙粘着蛋白-11EC1Fab（克隆7）在从0.3μg/ml至10μg/ml范围内的所有测试浓度下抑制了A-431-D-11表皮样癌细胞的聚集。相比之下，由13C2抗钙粘着蛋白-11抗体制备的Fab仅在10μg/ml的浓度下抑制细胞聚集。图5是描绘来自第二体外Cad-11细胞聚集分析的数据的图。431-D-11细胞的聚集在加入SME培养基（标示为对照）、不同浓度的含有与人IgG2铰链域、CH2和CH3结构域融合的Cad-11的EC1结构域的融合蛋白（标示为Cad-11-EC1-Fc）、不同浓度的针对钙粘着蛋白-11的EC1结构域的前35个氨基酸的抗钙粘着蛋白-11EC1Fab（标示为Cad-11EC1Fab）或不同浓度的对照抗绿色荧光蛋白（抗-GFP）Fab（标示为GFPfAb）之后40分钟显示。抗钙粘着蛋白-11EC1Fab（克隆7）在3μg/ml、1μg/ml和0.1μg/ml的浓度下抑制表达Cad-11的431-D-11细胞的聚集。EC1-Fc融合蛋白在3μg/ml的浓度下抑制431-D-11细胞的聚集。相比之下，抗-GFPFab在任何测试浓度下都没有显著地抑制细胞聚集。图6是描绘使用体外细胞聚集试验，各种抗钙粘着蛋白-11EC1Fab对Cad-11介导的细胞聚集本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.15 US 61/364,6981.一种特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域并拮抗所述哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的人源化抗体，该抗体包含由SEQIDNO:69组成的抗体重链可变区和由SEQIDNO:71组成的抗体轻链可变区。2.权利要求1的人源化抗体，其中所述抗体抑制一种或多种钙粘着蛋白-11介导的活性，所述活性选自：所述哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质与一个或多个其他钙粘着蛋白-11蛋白质的结合、表达所述哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的细胞的聚集、酶表达的诱导、细胞因子表达的诱导、生长因子表达的诱导、表达所述哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的细胞的迁移以及软骨的破坏。3.权利要求1的人源化抗体，其中所述抗体结合存在于SEQIDNO:3中的表位。4.权利要求1的人源化抗体，其中所述抗体结合存在于SEQIDNO:10中的表位。5.权利要求1的人源化抗体，其中所述抗体结合包含SEQIDNO:11的表位。6.权利要求1的人源化抗体，其中所述抗体是完整抗体。7.一种药物组合物，其包含特异性结合哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的EC1结构域并拮抗所述哺乳动物钙粘着蛋白-11蛋白质的人源化抗体以及药学上可接受的载体，其中所述抗体包含由SEQIDNO:69组成的抗体重链可变区和由SEQIDNO:71组成的抗体轻链可变区。8.权利要求7的药物组合物，其中所述抗体抑制表达所述哺乳动物钙粘着蛋白-11的细胞的聚集。9.权利要求7的药物组合物，其中所述抗体是完整抗体。10.权利要求7的药物组合物，其进一步包含缓解疾病的抗风湿病药。11.权利要求10的药物组合物，其中所述缓解疾病的抗风湿病药是氨甲蝶呤。12.权利要求7的药物组合物，进一步包含抗炎药。13.权利要求12的药物组合物，其中所述抗炎药是NSAI...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·G·麦克阿瑟，
申请(专利权)人：希诺维克斯公司，
类型：
国别省市：
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